高效毛细管电泳法同时测定药品中苯甲酸和山梨酸钾

1、第29卷第4期分析试验室Vol.29.No.42010年4月ChineseJournalofAnalysisLaboratory2010-4高效毛细管电泳法同时测定药品中苯甲酸和山梨酸钾涂逢樟,姚辉梅,吴华,刘文安,吴裕雄(龙岩学院化学与材料学院,龙岩364000)摘要:建立了毛细管电泳2紫外检测法测定硝酸咪康唑乳膏、小儿止咳糖浆及复方苦参水杨酸散中苯甲酸和山梨酸钾的方法。在230nm波长处以焦性没食子酸为内标物,分离电压为20kV,分离温度为25,用20mmolL硼砂缓冲液(pH9.2)作毛细管电泳的运行液,被测组分与内标物得到快速分离。苯甲酸和山梨酸钾的进样质量浓度在1400mgL范围内与

2、电泳峰面积呈良好的线性关系,相关系数r均为0.9999,检出限均为0.15mgL。方法可用于药品中苯甲酸和山梨酸钾含量的测定。关键词:毛细管电泳;苯甲酸;山梨酸钾;测定中图分类号:O657.8;O621.38文献标识码:A10002(,进行防腐。,1,23分光光度法对谱法、气相色谱4,568法、高效液相色谱法和高效毛细管电泳913(HPCE)等进行检测。法本文研究了不同缓冲溶液对苯甲酸和山梨酸钾电泳行为的影响,测定了不同电泳电压、进样时间、温度和内标物对苯甲酸和山梨酸钾混合液的电泳现象的影响,在最佳的电泳条件下测定了3个药品中苯甲酸和山梨酸钾的含量。方法简单、快速,相对于其他分析方法,具有预处

3、理简便、检测成本低等特点。实验证明,HPCE作为处于不断发展中的定量方法,与HPLC一样,在药品安全分析领域具有良好的应用前景。1实验部分1.1仪器LUMEXCAPEL105型毛细管电泳仪(LUMEXLtd,Russia),Chrom&Spec1.5x数据处理工作站及m57cm);KQ2250B(昆山市超声仪器公司)。1.2药品及试剂对硝基苯酚(CP),其它试剂均为分析纯。实验用水为二次蒸馏水,实验中所有溶液进入毛细管之前均用0.45m纤维素滤膜过滤。复方苦参水杨酸散(广西久辉制药公司);小儿止咳糖浆(贵州益佰制药公司);硝酸咪康唑乳膏(江西仁和制药公司)。苯甲酸、山梨酸钾标准储备液:

4、准确称取200mg苯甲酸、山梨酸钾样品,用适量的乙醇溶解,于200mL棕色容量瓶中定容,配制成110mgmL标准储备液置于4冰箱中保存。1.3实验方法1.3.1毛细管冲洗方法每次进样前依次用水冲洗10min,0.1molLNaOH溶液冲洗10min,再用水冲洗10min,最后用运行缓冲溶液冲洗5min,两次测定间用运行缓冲液冲洗毛细管3min。1.3.2实验参数及条件检测波长:230nm;压力进样:3kPa;进样时间:10s;分离电压:20kV;温度:25;缓冲溶液:20mmolL硼砂溶液(pH9.2);内标:20mgL的焦性没食子酸溶液。紫外检测器(190400nm);双光束紫外可见分光光度

5、计TU21901(北京普析通用仪器公司);未涂层熔融石英毛细管(河北永年锐沣色谱器件公司),收稿日期:2009207222;修订日期:2009209229作者简介:涂逢樟(1977-),男,讲师;E2mail:fzhtu99第29卷第4期分析试验室Vol.29.No.42010年4月ChineseJournalofAnalysisLaboratory2010-41.4电泳样品前处理复方苦参水杨酸散:将试样配制成200mgL的储备溶液,移取12.50mL储备液到50mL容量瓶中,然后加入2.50mL,1000mgL内标焦性没食子酸溶液,用20mmolL硼砂溶液定容。用滤膜过滤,取滤液作为分析液。

6、小儿止咳糖浆:准确移取1.00mL小儿止咳糖浆到50mL容量瓶中,加入2.5mL,1000mgL焦性没食子酸溶液,用硼砂溶液定容。用滤膜过滤后备用。硝酸咪康唑乳膏:准确称取0.3540g硝酸咪康唑乳膏,加入少量重蒸乙醇溶解,转移到50mL容量瓶中,加入2.50mL,1000mgL焦性没食子酸溶液,然后用20mmolL硼砂溶液定容。用滤膜过滤后备用。2结果与讨论2.1检测波长与内标物的选择接近又不重合,且其电泳淌度与被测组分相近,吸收灵敏度高、峰形好,是测定苯甲酸和山梨酸钾的良好内标。2.2缓冲体系的选择实验了浓度均为20mmolL的NaAc2HAc(pH4.0)、柠檬酸2柠檬酸钠(pH6.2)

7、、硼砂2硼酸(pH7.4)、柠檬酸2Na2HPO4(pH7.6)、Na2HPO42NaH2PO4(pH8.0)、Na2HPO42NaH2PO4(pH9.0)、硼砂(pH9.2)7种缓冲液对苯甲酸、山梨酸钾和内标物的电渗流和分离效果的影响。结果表明,在20mmolL硼砂(pH9.2)缓冲溶液中苯甲酸和山梨酸钾的分离效果和灵敏度最好,因此,选择浓度为20mmolL硼砂(pH9.2)缓冲溶液作为运行液。2.3缓冲溶液浓度、20、30、40、60ol。实验结果表,20mmolL时,苯甲酸和山梨酸钾分离效果最好。在节省分离时间的条件下,综合分离效果,本实验选择缓冲溶液的最佳浓度为20mmolL。2.4分

8、离电压400范围内扫描,知,苯甲酸在,属于K吸收带,230nm处吸光度仅比苯甲酸的吸光度略低;而山梨酸钾在260nm处有最大的吸收峰,但苯甲酸在260nm处吸光度极低,因此选择230nm为检测波长,使两个目标化合物的检测灵敏度达到最优。分别配制苯甲酸和山梨酸钾的质量浓度均为10mgL,内标物质量浓度为50mgL的混合标准溶液。电泳条件:波长230nm,进样时间15s,电压20kV,20mmolL硼砂(pH9.2)作为缓冲体系。改变电压(1222kV)进行电泳分析,并考察目标物的分离情况。结果表明,电压在1222kV范围内,苯甲酸和山梨酸钾迁移时间随着分离电压的增大而逐渐减少。同时,电压增高,电

9、流增大,产生焦耳热,使谱线变宽,综合考虑选择分离电压为20kV。2.5进样时间采用进样压力为3kPa时,实验了进样时间5、10、15、20、25、30s时的分离效果和灵敏度,发现进样时间越长,苯甲酸和山梨酸钾峰高越大,灵敏度增大,当进样时间大于15s时,其峰形会展宽,时间小于15s时灵敏度偏小,因此选择15s为最佳的进样时间。2.6操作温度实验在2035之间改变柱温,发现温度20时,迁移时间增大,温度35时,基线产生图1苯甲酸和山梨酸钾溶液紫外吸收光谱图Fig.1Theultraviolet2visibleabsorptionspectraofbenzoicacidandpotassiumso

10、rbate1-苯甲酸;2-山梨酸钾在20mmolL的硼砂(pH9.2)缓冲溶液中,4种不同的内标物质都能够出峰,但是焦性没食子酸的迁移时间和苯甲酸及山梨酸钾的迁移时间较100第29卷第4期分析试验室Vol.29.No.42010年4月ChineseJournalofAnalysisLaboratory2010-4漂移,考虑迁移时间以及基线的稳定等因素,选择25作为分离温度。2.7线性范围、检出限及精密度分别配制1、10、100、200、400mgL的苯甲酸和山梨酸钾的混合溶液(内含50mgL的焦性没食子酸),在上述选定条件下进行电泳分析。以苯甲酸的相对峰面积y1和山梨酸钾的相对峰面积y2(即被

11、测物的峰面积与内标物的峰面积之比)分别2.8样品分析与加标回收率取复方苦参水杨酸散、小儿止咳糖浆和硝酸咪康唑乳膏,经过1.4步骤预处理,添加内标物(50mgL),配制成一定浓度的分析液。按实验方法测定,标准溶液和复方苦参水杨酸散药品试样(含50mgL山梨酸钾和苯甲酸)毛细管电泳谱图见图2,其中苯甲酸和水杨酸的峰有所重叠,但两者分离度尚可,不影响苯甲酸的定量。各药品目标物测定结果如表2。同时对3种药品分别进行加标回收率实验,结果如表3。表2样品分析结果Tab.2Determinationresultsofsamples(n=5)对它们的质量浓度(mgL)进行线性回归分析。实验发现,苯甲酸和山梨酸

12、钾在1400mgL的范围内具有良好的线性关系,线性回归方程分别为:+0103713,R1=019999;y2=y1=01031670103436+0101094,R2=019999。以噪音的3倍(SN=3)推算得苯甲酸和山梨酸钾的检出限均为0115mgL。在上述最佳的条件下,取10mgL的苯山梨酸钾-4.332.45D苯甲酸(mgwg)118-0.15RSD甲酸和山梨酸钾的混合液(含有50mgL的焦性没食子酸)连续进样7次,标准偏差(RSD)如表1表1苯甲酸、密度实验Tab.1Precisiontestofthepeakareasandmigrationtimeofthebenzoicacid

13、andpotassiumsorbateandtheinter2nalstandard(n=7)-2.332.46%2.08-3.18小儿止咳糖浆硝酸咪康唑乳膏“-”:未检测到或低于检测限组分焦性没食子酸山梨酸钾苯甲酸t平均RSDA平均RSDmin7.398.098.98%1.30.460.80mAU158.1771.664.5%0.800.892.0图2苯甲酸和山梨酸钾标准溶液及加标样品的毛细管电泳谱图Fig.2Electropherogramsofthestandardsandsamples(a)标准溶液(10mgL;IS:50mgL);(b)复方苦参水杨酸散加标试样1-山梨酸钾;2-苯甲酸

14、;3-水杨酸;IS-焦性没食子酸101第29卷第4期分析试验室Vol.29.No.42010年4月ChineseJournalofAnalysisLaboratory2010-4表3样品加标回收率实验Tab.3Recoveriesofsamples(n=5)目标物加标试样编号1原值(wgg)086.6017.3449.1601.06加标量(wgg)50.0050.0050.0050.0050.0050.00测得值(wgg)49.88143.268.30103.250.2751.20回收率%99.8104.8101.4104.1100.5100.3RSD%3.52.21.45.41.72.4山梨

15、酸钾231苯甲酸23参考文献1曾启华.遵义师范学院学报,2004,6(4):592冯云晓,吴华涛.怀化学院学报,2009,28(2):483伍发兴.饮料工业,2003,6(5):354董长波.中国卫生检验杂志,2009,19(3):5675迪丽努尔马力克,庞楠楠,刘虎威.食品科技,2008,(4):2016兰金苹,宁丽峰,.2009,19()7吴国海,2009,18(1):218张雪梅,池利民.安徽农业科学,2009,37(13):58239王咏梅,刘恺,卢玉妹等.食品科技,2007,(6):22710胡美珍,王文铮,张燕琴.(自然)2004,3:.,2009,.色谱分析概论.北京:化学工业出

16、版社,2000.4513MonningCA,KennedyRT.AnalChem,1994,66:280DeterminationofbenzoicacidandpotassiumsorbateindrugsbyHPCE,YAOHui2mei,WULin2hua,LIUWen2anandWUYu2xiong(CollegeofChemistryandMaterial,LongyangUniversity,Longyan364000),FenxiShiyanshi,2010,29(4):99102TUFeng2zhang3Abstract:Amethodwasdevelopedforthedet

17、erminationofbenzoicacidandpotassiumsorbateinmiconazolenitratecream,syrupurgentsupportandcompoundflavescentsophoraandsalicylicacidpowderbycapillaryelectrophoresis.Atwavelengthof230nm,usingpyrogallicacidastheinternalstandard,thesampleswereanalyzedwith20mmolLsodiumboratebuffer(pH9.2)asrunningbufferatacapillarytemperatureof25andavoltageof20kV.Thecali2brationcurvesofbenzoicacidandpotassiumsorbatewerelinearbyplottingthepeakareaagainstthesampleconcentra2tionovertherangefrom1.0mgLto400mgL.Thecorrelationco