补阳还五汤及其有效组分生物碱和苷对大鼠血管内膜损伤后主动脉内膜增生和增殖细胞核抗原表达的影响

1、补阳还五汤及其有效组分生物碱和苷对大鼠血管内膜损伤后主动脉内膜增生和增殖细胞核抗原表达的影响 08-10-02 10:40:00 作者：吴露, 张伟, 李花编辑：studa20【摘要】 目的：探讨补阳还五汤及其有效组分生物碱和苷类对大鼠血管内膜损伤后主动脉内膜增生和增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen, PCNA）表达的影响。方法：用国产2.0 F球囊导管建立大鼠主动脉内皮剥脱模型，术后第1天开始灌胃给药，术后第15天取胸主动脉血管损伤段测定内膜增生程度及增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen, PC

2、NA）的表达。结果：剥脱术后第15天，模型组大鼠主动脉内膜出现显著增生。与假手术组比较，术后各组中膜增生不明显(P0.05)，内膜增生明显(P0.01)。生物碱组、苷组、补阳还五汤原方组和阿伐他汀组血管内膜增生程度轻于模型组(P0.01)。模型组PCNA表达高于假手术组(P0.01)。生物碱组、苷组、阿托伐他汀组PCNA表达高于假手术组(P0.05, P0.01)，但均低于模型组(P0.01)。补阳还五汤原方组大鼠PCNA表达高于假手术组(P0.01)，虽低于模型组，但差异无显著性意义(P0.05)。结论：补阳还五汤有效组分生物碱和苷类均可抑制血管内皮剥脱后的血管内膜增生，可能为补阳还五汤抗血

3、管内膜增生的药效物质基础之一，其抗血管内膜增生的作用可能与降低PCNA表达有关。 【关键词】 补阳还五汤 生物碱 苷 球囊导管 血管平滑肌细胞 形态计量学 增殖细胞核抗原Objective: To explore the effects of alkaloids and glycosides extracted from Buyang Huanwu Decoction (BYHWD), a compound of traditional Chinese herbal medicine, on aortic intimal hyperplasia and the expression of th

4、e proliferating cell nuclear antigen (PCNA) in rats with aortic intimal injuries.Methods: The vessel restenosis model was established by denuding aortic endothelium with domestic balloon catheter in rats. Drugs were administered intragastrically on the first day after operation. The injured segments

5、 of aorta were taken on the fifteenth day after operation to determine the degree of intimal hyperplasia and observe the expression of PCNA.Results: Aortic intimal hyperplasias were very obvious on the fifteenth day after operation. The media hyperplasias in the drugtreated groups were not significa

6、nt (P0.05), but the intimal hyperplasia were remarkable as compared with that in the shamoperated group (P0.01). The degrees of intimal hyperplasia in BYHWD, alkaloids, glycosides and atorvastatin groups were less than that in the untreated group (P0.01). There was significant difference of PCNA exp

7、ression between the untreated group and the shamoperated group (P0.01). The expressions of PCNA in alkaloids, glycosides, and atorvastatin groups were higher than that in the shamoperated group (P0.01, P0.05), but still lower than that in the untreated group (P0.01). The expression of PCNA in BYHWD

8、group was higher than that in the shamoperated group (P0.01), and no significant difference was found between the BYHWD group and the untreated group (P0.05).Conclusion: Alkaloids and glycosides extracted from BYHWD can inhibit intimal hyperplasia induced by denuding arterial endothelium with domest

9、ic balloon catheter in rats. Alkaloids and glycoside may be among basal substances in BYHWD inhibiting intimal hyperplasia of blood vessel, the effect of which may relate to downregulating the expression of PCNA.Keywords: Buyang Huanwu Decoction; alkaloids; glycosides; balloon catheter; vascular smo

10、oth muscle cell; morphology; proliferating cell nuclear antigen血管内膜损伤后，血管内皮细胞受损，管壁组织暴露，促使血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell, VSMC)发生表型转化和增殖，这是导致血管狭窄的主要原因之一。前期研究表明，用国产2.0 F球囊导管致大鼠主动脉内膜剥脱损伤后，在术后1421 d出现明显的血管内膜增生而引起血管狭窄，其内膜增生主要是由于VSMC增殖所致1。补阳还五汤（Buyang Huanwu Decoction, BYHWD）是防治心脑血管缺血性疾病常用的有效方剂。前期研究表

11、明，该方中有效组分生物碱和苷可抗缺血性脑损伤，并对血管内皮细胞的抗血栓功能具有改善作用，提示生物碱、苷可能为该方中具有血管效应的物质基础之一2。稽波等3也发现气血并治方防治动脉粥样硬化的作用可能与方中有效组分芍药苷和总黄酮配伍抑制氧化低密度脂蛋白诱导血管内皮细胞损伤条件培养基引起的VSMC增殖相关基因的表达有关。为此，本研究采用大鼠球囊导管损伤主动脉内膜增生模型，研究补阳还五汤中有效组分生物碱和苷抗血管内膜增生的作用，旨在为其应用提供实验依据。1 材料和方法1.1 实验材料1.2 实验方法图1 补阳还五汤全方和生物碱、苷有效组分HPLC图谱（略）Figure 1 HPLC determinat

12、ion spectra of BYHWD integral prescription and alkaloids, glycosides extracted from BYHWDA1: Tetramethylpyrazine; A2: Alkaloids; A3: BYHWD. B1: Astragaloside ; B2: Ferulic acid, amygdalin, paeoniflorin; B3: Glycosides; B4: BYHWD.实验过程中若发觉球囊在大鼠体内破裂，针管回抽有血，或球囊在大鼠体内有破损，球囊充盈不理想，或剥脱过重造成髂动脉血栓形成，致大鼠术后单下肢瘫或双

13、下肢全瘫者均应剔除。MA=(外弹力膜内面积内弹力膜内面积)IA=(内弹力膜内面积管腔面积)MT=(外弹力膜内面积内弹力膜内面积)IT=(内弹力膜内面积管腔面积)HRIA=(内膜面积)/(内膜面积+中膜面积)100HRIT=(内膜厚度)/(内膜厚度+中膜厚度)1001.3 统计学方法 应用SPSS 11.5统计软件进行分析，实验结果所有数据均采用xs表示。原始数据方差不齐时，对数据取自然对数进行变量变换，使各组数据均符合正态性和方差齐性要求。多组间均数比较用单因素方差分析，组间两两比较用LSD检验。2 结果 2.1 各组大鼠血管形态学变化 假手术组大鼠主动脉壁各层结构完整，管腔面积无缩小，内膜光

14、滑无增生，中膜VSMC排列整齐。模型组大鼠胸主动脉内膜呈弥漫性增厚，管腔面积明显缩小，增厚的内膜中以VSMC为主，中膜细胞排列紊乱。补阳还五汤原方组、生物碱组、苷组和阿托伐他汀组内膜均有增生，管腔口径有不同程度缩小，但增生程度明显轻于模型组。见图2。2.2 各组血管形态计量指标比较 各组中膜面积和中膜厚度比较，差异均无统计学意义(P0.05)。模型组、生物碱组、苷组、补阳还五汤原方组和阿托伐他汀组的内膜面积、内膜厚度、内膜面积增生比率、内膜厚度增生比率、内膜/中膜面积比、内膜/中膜厚度比均比假手术组增加(P0.01)，且生物碱组、苷组、补阳还五汤原方组、阿托伐他汀组的内膜面积、内膜厚度、内膜面

15、积增生比率、内膜厚度增生比率、内膜/中膜面积比、内膜/中膜厚度比均低于模型组(P0.01)。见表1。2.3 各组增生内膜PCNA表达的比较 假手术组未见到PCNA阳性细胞。模型组增生内膜中可见到大量PCNA阳性细胞，分布在新生内膜和中膜中。生物碱组、苷组和阿托伐他汀组新生内膜中也可见到散在的PCNA阳性细胞。补阳还五汤原方组仍可见到较多的PCNA阳性细胞。各组PCNA表达比较表明，模型组PCNA表达较假手术组显著增强(P0.01)。生物碱组、苷组和阿托伐他汀组PCNA表达较假手术组也均显著增强(P0.05, P0.01)，但均低于模型组(P0.01)。而补阳还五汤原方组PCNA表达高于假手术组(P0.01)，其表达强度虽略低于模型组，但差异无统计学意义(P0.05)。见表1和图3。图2 各组大鼠血管形态学（光学显微镜,100）（略）Figure 2 Vas