益肾平喘活血合剂对哮喘气道重塑大鼠血清及气道上皮炎性因子的影

1、益肾平喘活血合剂对哮喘气道重塑大鼠血清及气道上皮炎性因子的影         作者：张燕萍，张元元，苗青，王书臣，谭素贞 【摘要】 目的初步探讨益肾平喘活血合剂对哮喘气道重塑大鼠血清及气道上皮炎性因子的影响。方法SD大鼠60只，随机分为正常组，造模组，激素组和中药高、中、低剂量组各10只。按文献方法制成支气管哮喘模型。用放免法测定血               

2、60;         作者：张燕萍，张元元，苗青，王书臣，谭素贞【摘要】  目的初步探讨益肾平喘活血合剂对哮喘气道重塑大鼠血清及气道上皮炎性因子的影响。方法SD大鼠60只，随机分为正常组，造模组，激素组和中药高、中、低剂量组各10只。按文献方法制成支气管哮喘模型。用放免法测定血清IL-2、IL-4浓度，免疫组化法测定大鼠气道TGF-，苦味酸天狼星红染色，观察气道胶原分布和变化。结果与正常组比较，中药3个组血清IL-2水平下降，IL-4水平升高均轻于造模组和激素组，与造模组比较有显著差异（P<0.0

3、1），与激素组比较无显著差异（P>0.05）；中药组组间比较，高、中剂量组优于低剂量组（P<0.05）。TGF-免疫组化造模组阳性反应最强，呈深棕色，激素组，中药3个组阳性反应稍弱，呈棕黄色至浅黄色，正常组呈淡浅黄色。苦味酸天狼星红染色，偏振光显微镜观察，造模组支气管粘膜及上皮下型和型胶原纤维明显增多；激素组较造模组减少，中药低剂量组改变与激素组类似，中药中、高剂量组胶原纤维沉积少于激素组；正常组可见少量胶原纤维分布。结论益肾平喘活血合剂治疗哮喘慢性持续期的作用途径，可能有一部分是通过调节IL-2、IL-4、TGF-水平，减少气道壁胶原等来延缓支气管哮喘气道重塑的形成。 【关键词】

4、  支气管哮喘； 气道重塑； 炎性因子 ChinaAbstract：ObjectiveTo investigate the effect of YiShenHuoXue decoction on serum inflammation factor of bronchus asthma airway remolding model.MethodsSixty SD rats were randomly divided into six groups: blank group,asthma group,hormone group, and high, middle and low

5、 dosage Chinese medicine groups, 10 rats in each group.The asthmatic model was established by sensitization and challenge with ovalbumin.Radioimmunoprecipitation was used to determine the contents of serum IL-2, IL-4.  ELISA was used to measure the level of serum TGF-. Picric acid sirius red dy

6、eing was used to observe the dostritmtion and change of collagen in the rat airway.  Results(1) Compared with the blank group, serum IL-2 was descreased, and IL-4 was increased in other five groups. The change of rat's serum in the three Chinese medicine groups was smaller than in the asthm

7、a group and hormone group. The levels of serum IL-2, IL-4 among Chinese medicine groups and the asthma group were different. （P<0.01）. They were similar among the Chinese medicine groups and hormone group （P>0.05）The high and middle dosage groups were better than the low dosage group （P<0.0

8、5）.(2) The positive reaction of serum TGF- in the asthma group was the strongest, deep brown look. The positive reaction of serum TGF- in the hormone group and the Chinese medicine were much lighter, brown and buff look.The blank group looked like pale buff color. (3)In picric acid sirius red dyeing

9、 and  polarizable optic microscope, tapeand tape collagen in bronchus mucous membrane and under the epidermis of  the asthma group increased obviously. The change of Chinese low dosage medicine group and the hormone group were smaller, which were less than the asthma group. In the Chinese

10、middle and high dosage medicine groups , the collagen textile fiber was less than the hormone group. There was a little collagen textile fiber in the blank group. ConclusionYiShenHuoXue decoction may control the level of rat serum IL-2 , IL-4 and TGF- in the bronchus asthma airway remolding model, r

11、educe the collagen in the cliff of the airway, which may slow the remodeling of bronchus in asthma rats.Key words：Bronchus asthma ;   Airway remolding ;   Inflammation factor    益肾平喘活血合剂是我院呼吸科治疗支气管哮喘的常用方剂，在临床上取得了较好的疗效。我们建立了大鼠支气管哮喘模型（以下简称哮喘模型）以观察其气道重塑的改变。通过益肾平喘活血合剂对

12、其干预，初步探讨益肾平喘活血合剂治疗哮喘慢性持续期的作用途径，观察其对与哮喘气道重塑密切相关的血清白细胞介素2（IL-2）、白细胞介素4（IL-4）与大鼠气道上皮转化生长因子-（TGF-）表达的影响，为临床应用提供可靠的理论基础。1  材料与仪器1.1  动物健康雄性SD大鼠，体质量(200±10)g ，60只。北京维通利华实验动物技术有限公司提供许可证编号：SOXK(京)20020203。1.2  药品卵蛋白（ovalbumin OVA）Grade，购于Sigma公司；灭活百日咳杆菌苗购于北京生物制品研究所；氢氧化铝购于北京市化学试剂公司（批号 200

13、40618）；3.5%水合氯醛，（批号 20050916）西苑医院制剂室提供；泼尼松购于天津力生制药股份有限公司（批号0410086 ）；血清IL-2、IL-4放免试剂盒购于北京华英生物技术研究所（批号20040625 ）；免疫组化试剂盒（SP-9001）美国ZYMED公司；浓缩型DAB试剂盒，北京中杉金桥生物技术有限公司；TGF-抗体，美国Santa Cruz生物技术公司益肾平喘活血合剂补骨脂、生地、 川芎、赤芍、炙麻黄、杏仁、穿山龙、茯苓、甘草，由中国中医科学院西苑医院制剂室制备（批号 20050321），1ml药液4 g生药量，再根据实验要求进行稀释）。1.3  仪器402型医

14、用雾化器，上海合力医疗器械厂生产；802台式离心机，上海医疗器械厂生产；全自动RIA16免疫计数器，美国Capintec公司生产；石蜡切片机，德国LEICA公司生产；图像分析系统，德国LEICA-Q550CW;偏振光显微镜，德国NIKON公司。2  方法2.1  大鼠分组及哮喘模型的建立哮喘模型的建立：参考Temelkovski等13的方法，配置成每毫升含OVA 100 mg、Al(OH)3 100 mg、灭活百日咳杆菌约6×109个的溶液。第1步致敏：第1天每只大鼠腹腔注射以上溶液1 ml，第8天重复腹腔注射1 ml。第2步激发：第15天将致敏大鼠置于密闭喷雾箱，给予10g/l的OVA生理盐水溶液，超声雾化，每天激发20 min，连续14 d，制成支气管哮喘模型。    60只大鼠随机分为6组，在中国中医科学院西苑医院二级动物室饲养设施合格证号SYXK(京)20030008）开始实验适应性喂养1周后开始实验。分组：正常对照组（正常组）：腹腔注射及雾化均用生理