纳米雄黄脂质体的制备、特性检测和体外抗肿瘤细胞作用的研究

1、纳米雄黄脂质体的制备、特性检测和体外抗肿瘤细胞作用的研究         11-03-27 09:51:00     作者：王子妤，王丽，张东生    编辑：studa20【摘要】  目的： 研究纳米雄黄脂质体的制备方法并对其特性进行检测。方法： 采用化学沉淀法先制备纳米级雄黄，薄膜分散高压均质法制备纳米雄黄脂质体。用电子显微镜、能谱仪、原子荧光光谱仪、激光粒度分析仪对其进行特性研究，并研究其体外抗肿瘤细胞的能力。结果： 薄膜

2、分散高压均质法制备的雄黄纳米脂质体平均粒径为102.3 nm，分散性良好，球形或卵球形。能谱仪证实其中含有砷和硫的成分，脂质体的药物包封率为82.78%。体外作用于HepG2肝癌细胞显示其有良好的抑制生长作用。结论： 采用上述方法可以成功制备纳米级别的雄黄脂质体，粒径较小，符合纳米制剂的要求，稳定性良好，药物包封率高，并且具备良好的抗肿瘤细胞的作用。纳米雄黄脂质体是一种新型纳米级剂型，为传统中药在抗肿瘤方面的应用提供了新的思路。 【关键词】  纳米脂质体； 雄黄； 特性; 抗肿瘤作用    近年来，我国学者将主要成分为三氧化二砷（As2O3）的中药砒霜用

3、于治疗急性早幼粒细胞白血病，效果良好，从而引起了人们从肿瘤治疗学角度研究砷剂的极大兴趣。雄黄与砒霜同属于含砷矿物类中药，其主要成分为As2S2和As4S4，并夹杂少量As2O3和其他重金属盐。传统医学认为，雄黄具有解毒、燥湿、祛痰、截疟等作用;现代医学研究表明，雄黄还具有抗肿瘤作用。以往的研究证实其对慢性粒细胞白血病、骨髓增生异常综合征等恶性血液系统疾病疗效显著。与砒霜相比，雄黄含砷量低，毒性相对较小，所以有很广阔的应用前景1。但目前雄黄采用传统中药制剂工艺使其入药非常困难，需经研磨、水飞等繁复的工艺手段，存在耗时、废料、毒性大、颗粒偏大、生物利用度较低等缺点，因此我们在看到雄黄临床应用价值的

4、同时，通过制备药物新剂型，以减少用药量、提高疗效，具有非常重要的临床意义。    1  材料与方法    1.1  试剂和仪器    雄黄（南京药材公司），天然大豆磷脂（Lipoid，德国），胆固醇（北京奥博星生物技术责任有限公司），维生素E（Sigma，美国），明胶（AMRESCO，美国），其余均为化学纯。H600透射电子显微镜(Hitachi,日本)，能谱仪(Thermo NORAN Vantag,美国)，旋转蒸发器（河南巩义英裕子华仪器厂），超声波清洗器（上海超声波仪器厂），ZE

5、TA SIZER 3000激光粒度分析仪（MALVERN，英国），高压均质机（Avestin，加拿大）。    1.2  实验方法    纳米雄黄脂质体采用薄膜分散高压均质法制备，将配方量天然大豆磷脂、胆固醇、维生素E置于圆底烧瓶中，加入适量无水乙醚充分溶解，超声2 min，置旋转蒸发器减压蒸发至有机溶剂完全挥发，在瓶壁形成一薄膜。取前面制备的纳米雄黄溶于明胶PBS液中，加入圆底烧瓶中，高速搅拌30 min，使薄膜完全脱落。加入甘油后置-20 冰箱，2 h后取出37 冻融，超声10 s后继续置-20 ，反复处理两次后，在高压

6、均质机6070 MPa压力下均质处理34次，4 条件下保存。    纳米雄黄脂质体包封率测定：取1 ml雄黄脂质体，置于eppendorf管中，12 000 r·min1离心5 min，收取离心液，用原子荧光光谱仪测定离心液及洗涤液中砷的含量。按中国药典2000年版脂质体包封率的计算公式计算包封率,即包封率 = (W总- W游)/W总×100%。W总为投入总药物量，W游为未包入脂质体的游离药物量。    纳米雄黄脂质体的稳定性考察：将雄黄脂质体在室温下静置两个月后，进行肉眼和电子显微镜下观察。 2  结&

7、#160;   果    2.1  形态观察    天然雄黄外观呈土状块或石块状；制备的纳米雄黄为淡黄色液体状；纳米雄黄脂质体为淡黄色乳状液，分散良好，久置不分层。    透射电镜下观察发现，传统的雄黄粉末呈方形、多边形或不规则晶体状，直径较大，在5 m左右甚至更大（图1）。 纳米雄黄脂质体近似球形，分散性良好，粒径分布在100500 nm。经高压均质处理后，雄黄脂质体粒径大小均匀一致，大部分在100 nm左右（图2）。    2.2 

8、 纳米雄黄脂质体激光粒度分析仪测定粒径    ZETA SIZER 3000 激光粒度分析仪测定结果显示：未经高压均质处理的雄黄脂质体平均粒径在300 nm左右，且粒径大小分布不均匀；高压均质后雄黄脂质体平均粒径102.3 nm，单峰状，多分散指数为0.479，说明粒径分布范围窄，均匀一致（图3）。    2.3  能谱分析    在JEM2010扫描电镜下对单个纳米颗粒进行EDS分析，结果显示纳米雄黄脂质体含有砷和硫的成分，表明纳米雄黄脂质体已制备成功（图4）。    2.4  纳米雄黄脂质体的药物包封率的测定