色谱柱的制备_第1页
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文档简介

1、实验一 色谱柱的制备一、目的要求1. 掌握固定液的配制及涂渍技术2. 掌握柱的填装及老化技术。二、方法概述一根好的色谱柱不仅与选择合适的固定液和载体有重要关系，而且与固定液能否在载体表面上分布成一层均匀液膜以及与固定液填充情况有紧密关系。固定液涂渍一般系用静态法。涂渍完毕后进行柱的装填。装填要求均匀紧密，不得敲打过猛，以免载体粉碎，使柱效变坏。刚填装的柱子不能马上使用，需要老化处理，其目的是彻底除去残余和挥发性杂质，促使固定液均匀、牢固地分布在载体表面上。三、仪器与试剂仪器：1. 台天平；2. 真空泵；3. 分析天平；4. 不锈钢色谱柱；5.玻璃棉。试剂：1. 6201载体（6080目）；2.

2、 邻苯二甲酸二壬酯（色谱专用）；3. 乙醚A.R。四、实验步骤1. 色谱柱的清洗清洗的方法是：用510的热碱（NaOH或KOH）溶液抽洗45次，以除去内壁油腻或污物，用水冲洗干净后，再用蒸馏水冲洗数次，烘干备用。2. 固定液的涂渍固定液的配比：邻苯二甲酸二壬酯（DNP）：6201载体3100将市售的一定粒度范围的6201载体，预先过筛（6080目），然后根据色谱柱体积，量取已过筛的载体（比色谱柱体积放宽23ml），记下体积，称重。再根据载体的重量以及配比关系，计算出固定液DNP的含量。在分析天平上称取DNP。用量筒量取略小于载体体积的无水乙醚，将此乙醚分35次把DNP全部转移至250ml烧杯中

3、，溶解完全后，把载体倒入，并迅速摇匀，使乙醚溶液正好淹没载体，于室温下，置于通风橱内，并拍打烧杯，帮助载体翻转，使乙醚均匀挥发，直至无乙醚气味为止，然后装柱。3. 柱的装填将色谱柱一端塞入少许清洁的玻璃棉，用四层纱布包住，与真空泵相连，另一端接漏斗，启动真空泵，边抽边从漏斗上加入已涂好固定液的载体，并不断轻轻敲打，以保证填充紧密直至载体不再下沉为止。在装填完毕后，另一端也塞上少许玻璃棉。4. 老化将装填好的柱子安装在气相色谱仪上，柱尾不接检测器（接真空泵一端的柱子作为柱尾），通入载气，调节柱温在95，老化四小时，老化完毕后，将柱尾接检测器，检漏。检漏的方法是：将柱后堵死，通入2kg/cm2压力的载气。若不漏气，转子流量计浮子应下降至零。流量计浮子若不能下降至零，用十二烷基苯磺酸钠溶液检查各连接处有否漏气。检漏毕，继续通入载气，调节柱温至95，打开记录仪，直至记录仪基线平直为止。此时，色谱柱即可供分析使用。五、注意事项a) 涂渍时切忌图快而在高温下烘烤。为了加快溶剂蒸发速度，可用红外灯烘烤固定相；b) 填充时敲打不得过猛，以免载体粉碎。c) 安装色

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