壮元扶骨逍遥汤治疗膝骨关节炎的实验研究

1、壮元扶骨逍遥汤治疗膝骨关节炎的实验研究         08-06-20 09:51:00     编辑：studa20             作者：马永健 李青 王金榜 张丽娜【摘要】  目的 观察壮元扶骨逍遥汤对家兔膝骨关节炎模型血清中超氧化物歧化酶（SOD）和关节液中白介素-1（IL-1）含量的影响，并探讨其作用机制。方法 将新西兰白兔36

2、只，雌雄不分，随机分成4组，即正常组（N组）、模型对照组（M组）、壮元扶骨逍遥汤组（F组）、布洛芬组（P组），各8只，于相同温度、湿度下分别单笼喂养，在治疗前、中、后分别提取家兔的血清和关节液，采用免疫组织化学法检测血清SOD和关节液IL-1的含量。结果 治疗前比较，M、F、P组SOD水平明显降低（P0.05），IL-1水平明显升高（P0.05）；治疗中、后期比较，F组SOD水平明显升高（P<0.05），P组无明显变化（P>0.05），F、P组IL-1水平明显降低（P<0.05）。结论 壮元扶骨逍遥汤可提高血清SOD水平，通过激活SOD的活性而使其含量显著升高，催化氧自由基发

3、生歧化反应，阻止过多氧自由基对关节软骨的损害，保护关节软骨，提高软骨细胞功能，促进软骨修复；降低关节液IL-1水平，可有效清除促炎性细胞因子，减轻炎症对关节软骨的破坏及所产生的疼痛，可能是通过抑制巨噬细胞的分泌来起效的。 【关键词】  骨关节炎；膝；动物；实验；壮元扶骨逍遥汤Experimental investigation on treating osteoarthritis of the knee with Zhuangyuanfuguxiaoyao decoction     【Abstract】  Objective

4、0; To observe the influence of Zhuangyuanfuguxiaoyao decoction on SOD in blood serum and IL-1 in synovial fluid of knee osteoarthritis rabbit model, and reveal the mechanism of action. Methods  36 well-being New Zealand white rabbits were randomly divided into 4 group, they are normal group(gro

5、up N), model reference group(group M), Zhuangyuanfuguxiaoyao decoction group(group Z), ibuprofen group(group P), 8 rabbits in each group. The rabbits blood serum and synovial fluid were extracted in pre-treatment, meta- treatment and post- treatment, and SOD and IL-1 levels were detect with the immu

6、nohistochemistry. Result  The concentration of SOD in group M, group Z and group P before treatment could markedly reduce compared with that in group N (P<0.05), and the concentration of IL-1 increased (P<0.05). The concentration of SOD meta- treatment and post- treatment group Z was high

7、er than those pre-treatment (P<0.05), but group P there was no significant difference (P>0.05). The concentration of IL-1 meta- treatment and post- treatment group Z and group P were lower than those pre-treatment (P>0.05). Conclusion  Zhuangyuanfuguxiaoyao decoction can enhance the le

8、vel of blood serum SOD by activating activity of SOD, and prevent damage of arthrodial cartilage from  oxygen  radical by catalyzing dismutation reaction of oxygen  radical. Zhuangyuanfuguxiaoyao decoction can reduce the level of  IL-1 in synovial fluid and effectively by inhibit

9、ion of macrophage secretion.     【Key words】  Osteoarthritis; Knee; Animal; Experiment; Zhuangyuanfuguxiaoyao decoction膝骨关节炎作为中老年人的常见病、多发病，以膝关节肿痛、畸形和功能障碍为主要表现，是引起中老年人疼痛和伤残的主要原因之一。其基本病理变化是膝关节软骨退变。现代医学认为骨内压升高，金属蛋白酶（MMPs）及其抑制物（TIMPs）失衡，破坏性细胞因子、炎性介质、生长因子、氧自由基、自身免疫反应的增加，透明质酸（HA）分泌减少等对

10、其病理变化具有重要作用1。我们通过建立膝骨关节炎(KOA)动物模型，应用纯中药制剂壮元扶骨逍遥汤干预，观察其对血清超氧化物歧化酶(SOD)及关节液白介素-1(IL-1)的影响来探讨其治疗的可能机制。1  材料与方法1.1  材料1.1.1  实验动物  健康68个月龄，体质量（3±0.1）kg，新西兰白兔36只，雌雄不分，由河北医科大学实验动物中心提供,实验动物合格证号：D0561620。1.1.2  主要试剂  木瓜蛋白酶，由河北博海生物工程有限公司提供，MERCK公司产品，批号：000607。试剂盒，SOD、关节液中IL

11、-1放免试剂盒由解放军总医院科技开发中心放免所提供，标号100T。1.1.3  主要仪器  国营二六二厂FJ-2021放射免疫计数器，放射性免疫射线计数分析工作站，上海安亭科技仪器厂GL-20B高速冷冻离心机。1.1.4  主要药品及制备  壮元扶骨逍遥汤由熟地黄、肉苁蓉、黄芪等药物组成，采购于河北省中医院，由其制剂室韩国煎药机制备，每剂药装2袋，每袋约100 mL。布洛芬片剂，0.1 g/片，由浙江康恩贝制药有限公司提供。1.2  方法1.2.1  动物饲养  36只实验兔于相同温度、湿度下分别单笼喂养。每日早晚各喂1次，

12、水300 mL，专用兔料（由河北医科大学实验动物中心提供）100 g。1.2.2  实验动物分组  将实验动物随机分为正常组（N组）8只，模型对照组（M组）8只，壮元扶骨逍遥汤组（F组）8只，布洛芬组（P组）8只，余4只候补备用。1.2.3  动物模型制作  备皮：蘸取10% Na2S溶液给M、F、P组实验兔双后腿膝关节周围皮肤均匀脱毛后，用大量清水冲洗干净。造模：以实验兔专用兔兜（自制）固定实验兔于四角支架上，四肢和头颈可活动。碘酒、酒精常规消毒膝关节局部皮肤。将4、1.6%的木瓜蛋白酶溶液2 mL，从前外侧入路注入双后腿膝关节腔内，隔3日1次，共注射

13、3次，注射剂量分别为2、1、1 mL。于第3次注射完毕的第1日起，可认为获得稳定的膝骨关节炎模型2。1.2.4  给药方法  F组，用20 mL注射器抽取壮元扶骨逍遥汤药液经内径5 mm的灌胃管灌入兔胃，每次100 mL，每日2次，15日为1个疗程，共2个疗程。注意观察实验兔有无呛咳，防止灌胃管进入气管中。P组，方法同上，将布洛芬片剂捻碎溶入水中灌胃，每次0.3 g，每日3次。N组、M组正常喂养即可。1.2.5  取材方法  将实验兔用兔兜固定，碘酒、酒精常规消毒双后膝关节局部皮肤，以50 L微量注射器从前外侧入路进膝关节腔，抽取关节液20 L，注入5

14、mL灭菌EP管中，定容至2 mL，密闭和编号后-20保存。同时用5 mL注射器抽取兔耳背动脉血2 mL，也注入5 mL灭菌EP管中，密闭和编号后-20保存。于治疗前、中、后各取材1次。1.3  观测指标  采用放射性免疫吸附法检测血清SOD和关节液IL-1的含量。1.4  统计学处理  各组数据均采用均数±标准差（±s）表示，用SAS软件对组间和组内数据做正态检验和方差齐性检验后，再做完全随机设计的方差分析和SNK-q检验。2  结果2.1  治疗前、中、后各组血清SOD的含量比较  见表1。表1

15、0; 治疗前、中、后各组血清SOD的含量（略）与N组治疗前比较,P>0.05;与本组治疗前比较，P0.05；与P组比较，P0.05由表1可见，治疗前，N组与M、F、P组间比较差异有统计学意义（P<0.05），M、F、P组间比较差异无统计学意义（P>0.05），这说明造模成功。治疗中、后期，F组SOD水平明显升高（P<0.05），P组无明显变化（P>0.05），组间比较差异有统计学意义（P<0.05），继做SNK-q检验示，M、P组间差异有统计学意义（P0.05），余2组间比较差异有统计学意义（P<0.05）。2.2  治疗前中后各组关节液IL-1的含量比较  见表2。表2  治疗前中后各组关节液IL-1的含量