银屑病患者抗角蛋白自身抗体的初步研究

1、    银屑病患者抗角蛋白自身抗体的初步研究        银屑病患者表皮中角蛋白有异常表达，特别是角蛋白K16,它常在银屑病活动的早期即在皮损边缘处的基底层上表达1，2。为了研究银屑病患者血清中是否存在针对角蛋白K16的自身抗体，以及该抗体与银屑病病情变化的确切关系，我们用间接酶联免疫测定法（ELISA）和免疫印迹法（IBT）分别检测银屑病患者血清中的抗角蛋白自身抗体（AKautoAB）和抗角蛋白K16自身抗体（AK16autoAB）的滴度。 一、病例与方法（一）临床病例：

2、寻常型银屑病患者53例，其中进行期30例，静止期23例；女19例，男34例；年龄2072岁(43.2±14.1岁)，病期2周至31年。正常人对照组为健康体检者20例，其中男12例，女8例，年龄3552岁(42.9±5.5岁)。银屑病患者的皮损面积和严重程度按PASI评分为4.834.8分（13.75±7.18)。（二）血清标本：对照组和患者组每例采血3mL，待凝固离心后取血清分装，置20保存备用。（三）主要试剂：辣根过氧化酶标记兔抗人IgG购自Dako公司，辣根过氧化酶标记羊抗鼠IgG和抗角蛋白单抗Ks8.12均购自Sigma公司。（四）实验方法：收集正常人的足部

3、胼胝来提取其中的角蛋白3。抽提得到的角蛋白液（抗原液）经SDSPAGE电泳观察角蛋白抽提的结果,将SDSPAGE凝胶上的角蛋白抗原组分通过电泳转移至硝酸纤维薄膜上。先加血清标本，再加兔抗人IgG抗体（以单抗Ks8.12与K16结合的条带作阳性对照）,进行固相酶联免疫检测。显色后的抗体含量经VIDAS象分析仪进行灰度读数，用密度积分值来分别比较AKautoAB和AK16autoAB的含量。另外，再分别用ELISA法测定AKautoAB和双抗夹心ELISA法测定AK16autoAB。二、结果（一）AKautoAb的检测结果：正常人与银屑病患者血清中均存在AKautoAB。2种方法（IBT和ELIS

4、A）检测结果显示：正常人血清中的AKautoAB水平明显高于银屑病患者组（P值均<0.01）；静止期患者AKautoAb抗体水平高于进行期患者（仅ELISA结果有统计学意义）（见表1）。表1抗角蛋白自身抗体及抗角蛋白K16自身抗体检测结果组别IBTELESA例数密度积分值（<"xx1 (881 bytes)" src="/med/cano/201003/20100317183350218" 12 14>±s）t值P值例数密度积分值（<"xx1 (881 bytes)" src="/med/c

5、ano/201003/20100317183350218" 12 14>±s）t值P值抗角蛋白自身抗体正常人对照组92.662±278.21200.37±0.104.45<0.01银屑病患者组222319.75±290.243.02<0.01530.23±0.13进行期132284.91±324.89300.19±0.122.47<0.05静止期92370.07±240.770.67>0.05230.28±0.14抗角蛋白K16自身抗体正常人对照组9206.24&#

6、177;55.692.91 2.37<0.01 <0.05200.59±0.102.94 3.11<0.01 <0.01银屑病进行期13303.48±88.33300.67±0.12银屑病静止期9228.16±41.93230.57±0.10（二）AK16autoAB的检测结果:IBT与ELISA2种方法均显示银屑病进行期患者组AK16autoAB水平不仅明显高于静止期患者,而且也高于正常人对照组，并均具有统计学差异(见表1)。（三）银屑病患者AKautoAB水平(ELISA检测结果)与PASI评分之间无显著性相关性，r

7、s=0.14，P>0.05。AK16autoAB水平与PASI评分之间呈显著正相关，rs=0.61，P<0.05。 三、讨论几乎所有正常人的血清中都含有AKautoAB，其中尤以IgG型为多4。AKautoAB能与不同的角蛋白抗原反应，特别是破坏、凋亡的角质形成细胞释放的角蛋白中间丝。AKautoAB能促进单核细胞、多核白细胞对角蛋白中间丝集聚物的吞噬，还能包绕结合于组织中的角蛋白小体（KB）表面而有利于KB的清除，防止免疫系统对自身角蛋白发生进一步的炎症反应5。我们用ELISA方法来检测正常人、银屑病患者血清中IgG型AKautoAB的水平，结果发现：银屑病患者进行期和静止期血清

8、中的AKautoAB较正常人有明显降低，银屑病患者AKautoAB水平的下降可能与银屑病患者表皮的病理变化有关。我们通过ELISA的双抗夹心法来检测正常人和银屑病患者血清中的AK16autoAB的水平，发现银屑病进行期患者AK16autoAB的水平明显高于静止期及正常对照组。这可能与银屑病患者表皮中角蛋白K16的异常增高和K16本身具有抗原性有关。我们将银屑病患者PASI的评分分别与AKautoAB水平和AK16autoAB水平作相关性分析的结果表明，PASI评分与AKautoAB水平无相关关系，而PASI评分与AK16autoAB水平呈正相关，即AK16autoAB与银屑病患者皮损的面积和严

9、重程度成正比，故我们认为AK16autoAB可以用来作为评估银屑病病情的血清学指标之一。作者单位：陆毅（200025上海第二医科大学附属瑞金医院皮肤科）冯信忠（200025上海第二医科大学附属瑞金医院皮肤科）参 考 文 献 1Thewes M， Stadler R， Korge B， et al. Normal psoriatic epidermis expression of hyper proliferation? associated keratins. Arch Dermatol Res, 1991, 283: 465 471. 2Castelijns FA, Gerritsen MJ

10、, van Vlijmen? Willems IM, et al. The epidermal phenotype during initiation of the psoriatic lesion in the symptomless margin of relapsing psoriasis. J Am Acad Dermatol, 1999,40: 901 909. 3Aoki S， Yaoita H， Kitajima Y. An elevated level of autoantibodies against 48? to 50? kD keratins in the serum of patients with psoriasis. J Invest Dermatol, 1989,92:179 183. 4刘玉峰，车乃增，刘彦仿,等人血清抗角蛋白自身抗体的免疫组化研究.第四军医大学学报，1989,9:311313.5Hintner H， Romani N， Sta