重组人白细胞介素-6抑制BTT739小鼠膀胱癌生长和转移的实验研究

1、    重组人白细胞介素-6抑制BTT739小鼠膀胱癌 生长和转移的实验研究        摘要：目的探讨重组人白细胞介素-6对小鼠膀胱癌BTT739生长和转移的抑制作用。方法将BTT739肿瘤细胞接种于T739近交系小鼠皮下(2.6×105小鼠)，24只小鼠随机分成3组，第3天始分别给予对照组溶剂(0.9NS)0.3mL，治疗组重组人白细胞介素-6(4×106IU/kg)，日2次，腹腔注射，共20天，阳性对照组MMC(1mg/kg)日1次，腹腔

2、注射计14天。第25天测对照组和治疗组的皮下瘤重及肺转移率，分别进行t检验和2检验。结果两组皮下瘤重分别为11.4±1.9g和7.4±0.8g，重组人白细胞介素-6有明显抑制BTT739肿瘤生长作用，抑瘤率35.1%(P<0.05)，而对肺转移灶数目及转移灶大小的抑制率分别为61.3%和26.2%(P值均<0.05)，有显著性差异。结论重组人白细胞介素-6可明显抑制BTT739小鼠膀胱癌生长和转移。关键词：重组人白细胞介素-6；膀胱癌；小鼠中分类号：R73-362文献标识码：A文章编号：1000-8578(2000)06-0439-02 Experimental

3、 Study of the Effect of Recombinat Human Interleukin-6 on the Growth and Metastasis of BTT739 Mouse Bladder CarcinomaWU Wen-Sen,HU Hong-Hui（Department of Pathology,Shanghai First People?s Hospital,Shanghai 200080,China）Abstract:Objective To study the inhibition effect of recombinat human interleukin

4、-6 on the growth and metastasis of BTT739 mouse bladder carcinoma.Methods BTT739 mouse bladder carcinoma cells (2.6×105/mouse)were inoculated subcutaneously to 24 mice.The treated group was given into 3 groups.From the 3nd day,the treated group was given 4×106 IU/kg of recombinat human int

5、erleukin-6 Bid ip(20day)and the control group was given vohiole only(0.9%NS),and mitomycin-C group was given MMC(1mg/Kg)Qd.ip(14day).On the 25nd day,the weight of the subcutaneous tumors and the lung metastasis rates of the 2 groups were detected.The results were analysed by student-t and X2 test.Re

6、sults the tumor weight of the control and treated group was 11.4±1.9g and 7.4±0.8g.The growth of primary tumor was inhibited by 35.1% (P<0.05) and the number and size of metastatic foci in the lungs were inhited by 61.3% and 76.2% (P<0.05) respectively.Conclusion These results sugges

7、t that the recombinat human interleukin-6 has a strong inhibitory metastasis of BTT739 mouse bladder carcinoma.Key words:Recombinat human interleukin-6 rhIL-6;Bladder carcinoma;Mice白细胞介素-6(Interleukin-6,IL-6)是细胞网络中一种具有多种生物活性的细胞因子，研究表明它对肺癌、乳腺癌、白血病及淋巴瘤细胞增殖有较强的抑制作用，但对肾细胞癌，骨髓瘤/浆细胞瘤细胞有促进增殖作用14，人工合成的IL-6可

8、使化学诱导的大鼠实体瘤瘤结变小或消失1，IL-6除抑制肿瘤生长，诱导肿瘤细胞分化并抑制肿瘤转移5，亦有研究表明重组人白细胞介素-6(recombinat human interleukin-6，rhIL-6)促进人肺巨细胞癌系(PG)和人肺腺癌细胞系(PAa)细胞生长6，显示了IL-6对肿瘤所具有的双向作用。膀胱癌在泌尿系恶性肿瘤中居首位，而有关IL-6对膀胱肿瘤治疗研究国内尚未见报道，我们选用rhIL-6对BTT739小鼠膀胱癌瘤株进行抑瘤及抑制转移的实验研究，报道如下。1材料与方法1.1动物模型BTT739小鼠膀胱移行细胞癌模型7由南京铁道医学院病理教研室提供，具有高自发肺转移特性。1.2

9、实验动物T739近交系小鼠，雌雄兼有，24只，体重2022g，南京铁道医学院病理教研室提供。1.3药物丝裂霉素-c(Mitomycin-C,MMC)2mg/安瓶，日本协和发酵工业株式会社。rhIL-6除菌白色冻干粉剂，100万单位/安瓶，中国医学科学院肿瘤研究所范贤俊教授提供。1.4实验方法无菌条件下将BTT739瘤块制成细胞悬液，接种T739近交系小鼠皮下(2.6×105细胞/小鼠)，3天后，随机分成3组，每组8只(4雄4雌)，对照组给予0.9%NS0.3mL，治疗组给予rhIL-6 4×106IU/kg，均予腹腔注射，每天2次，共20天，化学药物阳性对照组给予MMC 1

10、mg/kg每日1次，腹腔注射，共14次。实验中观察小鼠皮肤，饮食，活动度，精神状态变化，于实验第25天处死实验动物，先称体重后称瘤重，按公式计算抑瘤率×100，解剖小鼠，观察记录肺转移情况，将脏器置10%中性福尔马林固定，每只鼠5叶肺取冠状面之最大切面全部常规石蜡包埋、制片，HE染色，光镜下观察计数小鼠肺转移瘤灶数目，用上海第三光学仪器厂生产的显微镜测微尺计算肺转移瘤灶大小(转移灶大小面积的总和)的抑制率。2结果2.1rhIL-6对BTT739荷瘤小鼠体重影响及毒性作用与对照组比较，rhIL-6组荷瘤小鼠体重略有增加，但体重变化差异无显著性(P>0.05)，MMC组荷瘤小鼠体重

11、明显减轻，有显著性差异(P<0.05)详见表1，rhIL-6组实验小鼠未见明显毒性反应，化学药物阳性治疗对照组小鼠除体重减轻外，并出现食欲差，活动度少，皮毛无光泽及脱毛等常见的化疗药物毒性反应。表1rhIL-6对BTT739抑瘤作用药物组别剂量途径次数动物数平均体重(±s)g平均瘤重(±s)g抑病率(%)P值始末始末NSBidip×2088rhIL-64×106IU/kgBidip×2088MMC1mg/kgQdip×14882.2rhIL-6对BTT739的抑瘤作用实验结果表明rhIL-6对BTT739小鼠膀胱肿瘤有抑制生长作

12、用，抑瘤率35.1%，有显著性差异(P<0.05)，化学药物MMC抑瘤率为69.3%，抑瘤作用比rhIL-6好，但毒性反应明显，故在用药14天后因毒性反应大而停药。2.3rhIL-6对BTT739小鼠肺转移抑制作用实验结果表明：对照组，rhIL-6治疗组和化学药物阳性对照组，每组的8只荷瘤小鼠均发生不同程度的肺转移(16)。各组小鼠肺转移率均为100%，但从肺转移灶数目及肺转移灶大小(转移灶面积的总和计算)的抑制率统计结果，rhIL-6组分别为61.3%和76.2%(P<0.05)，有显著性差异，而MMC组虽有较好的抑瘤作用，对抑制BTT739荷瘤小鼠肺转移抑制率仅为26.4%和1

13、6.7%(P>0.05)无显著性差异，见表2、3。 表2rhIL-6对BTT739肺转移灶数目影响药物组别动物数转移率(%)肺转移灶数(±s)转移灶数抑制率(%)P值始末NS8810039±19rhIL-688100MMC88100表3rhIL-6对BTT739肺转移灶大小的影响药物组别动物数转移率(%)肺转移灶大小总面积mm2肺转移灶大小总面积的抑制率(%)P值始末NS88100rhIL-68810076.2%MMC8810016.7%3讨论 IL-6是细胞因子网络中一种具有多种生物学活性的细胞因子，其作用包括诱导B细胞增殖和分化，促进T细胞的增殖和激活T细胞的细胞

14、毒(CTL)作用，促进单核细胞的分化以及促进肝细胞合成血浆蛋白等，它除参与免疫应答，炎症反应外，在抑制某些恶性肿瘤细胞生长方面引起人们的关注，实验研究发现IL-6对恶性肿瘤作用突出表现出它所具有的双重性，它不仅诱导多种肿瘤细胞的增殖分化，如多发性骨髓瘤/浆细胞瘤，恶性胶质瘤，肾细胞癌，前列腺癌等，又能直接抑制某些肿瘤，如肺癌，乳腺癌，恶性黑色素瘤的生长，此外IL-6除抑制一些肿瘤生长，诱导肿瘤细胞分化外亦能抑制某些肿瘤转移5。我们应用rhIL-6对小鼠膀胱癌BTT739进行抑瘤研究，结果表明rhIL-6能有效的抑制BTT739的生长和肺转移。而化疗药物MMC虽对BTT739有效好的抑瘤作用，但

15、对肺转移抑制作用不明显，而且MMC的毒性作用大，在注射8天时，体重减轻、食欲差，活动度小，在用药14天时，因药物毒性大而停药观察，高朋根8等曾用TA2MA891津白小鼠自发乳腺癌模型分别给予7种常见的化疗药物实验治疗，这些化疗药物对原发肿瘤的抑制率可达90%以上，但对转移的抑制率仅30%，充分说明目前常规化疗对肿瘤转移的无奈。浸润和转移是恶性肿瘤主要的生物学特征之一，是肿瘤患者治疗失败和死亡的直接原因，也是抗肿瘤研究的核心问题，由于荷瘤机体的自身免疫功能低下，手术，放疗及化疗又在一定程度上抑制了机体自身免疫能力，更易造成肿瘤的转移和复发，近年有关血管生成抑制剂，生物反应调节剂，血管内皮生长因子

16、抗体等对肿瘤转移抑制作用方面研究，进行了有益的探索，我们的实验结果表明rhIL-6对膀胱肿瘤BTT739不仅有抑瘤作用，而且对BTT739肺转移亦有抑制作用。有关rhIL-6抑制BTT739生长和转移的机理尚不十分清楚，PCR技术证实膀胱癌细胞可表达IL-6和IL-6受体(IL-6R）9，因此认为是否rhIL-6与膀胱癌细胞的IL-6R结合而发挥了抗肿瘤作用，或是IL-6介导的免疫反应增加而使机体抗肿瘤能力增强，藉此T细胞的细胞毒(CTL)作用，以及单核细胞活值增强，NK细胞、肿瘤环死因子(TNF)及IL-6可能参与抗肿瘤作用的结果，尚待进一步证实。(本文见封3)作者单位：武文森（上海市第一人

17、民医院病理科 200080）胡宏慧（上海市第一人民医院病理科 200080）参考文献：1Mule JJ.Mcintosh JK,Jablons DM,et al.Antitumor activity of recombinat IL-6 in miceJ.J Exp Med,1990,171:629.2MiKi S,Inwanno M,MiKiy,et al.IL-6 functions as on in/vitro autocrine growth factor in renal cell carcinomasJ.FEBS Letters，1988,250:607.3Mullen CA,Co

18、ale MM,Levy AT,et al.Fibrosarcoma cells transduced with the IL-6 gene enhibit reduced,tumorigenicity,increased immunogenioity,and decreased metastatic PotentialJ.Carcer Res,1992,52:6020.4Okurro y,Takahashi T,Suzuki A,et al.Acquistion of growth autoromy and tumorigevicity by an interlekin-6-dependent human myeloma cell cell line transfected with interleukin-6 CONA.Exp Hematol.1992,20:395.5Revel M.Antitumor potentials of interleukin 6J.Interferons cytokines.1991,19:5.6付坚，吴秉权，郑杰,等.重组人白细胞介素-6对人肺癌细胞系生长的调控及机制研究J.中华医学杂志，1997，77(3)：494.7武文森，尹克铮，朝月明，等.小鼠可移植性膀胱移行细胞癌株(BTT739)的建立及实验