肠道病毒EV71和柯萨奇病毒A16型(CA16)核酸检测试剂盒_第1页
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文档简介

1、肠道病毒EV71和柯萨奇病毒A16型（CA16）核酸检测试剂盒（RT-PCR-双色荧光探针法）说明书【产品名称】通用名称：肠道病毒EV71和柯萨奇病毒A16型（CA16）核酸检测试剂盒（RT-PCR-双色荧光探针法）英文名称：Human Enterovirus 71（EV71）and Coxsackievirus A16 (CA16) Nucleotide Acid Detection Kit (RT-PCR double Fluorescence Taqman probes)【包装规格】50人份/盒【用途】本试剂盒用于EV71和CA16的荧光RT-PCR 核酸检测【主要组成成分】序号试剂盒组

2、成数量体积/人份1荧光RT-PCR反应液625ll2逆转录酶25ll3Taq酶25ll4H2O 500ll5引物和探针150l3l【储存条件及有效期】1） 试剂盒必须在冷冻条件下运输2） 试剂盒保存：试剂盒需20C以下保存，应避免反复冻融。3） 有效期：本试剂盒有效期12个月，请在有效期内使用。【适用仪器】全自动荧光PCR检测仪，需含FAM和HEX通道检测功能。【操作步骤】 1. 标本RNA提取： 可使用商业化试剂盒提取RNA,提取的RNA于-20以下保存，长期保存最好于-70条件下保存。 2. 反应液的配置： 1)先将试剂解冻，从试剂盒中取出相应的试剂，反应液在室温融化后，瞬时离心，按n+1

3、配置25l反应体系（n=样本数+1管阳性对照+1管阴性对照），每个测量反应体系配置如下表： 内容1份样品的量n+1份样品的量荧光RT-PCR反应液ll (n+1)逆转录酶ll (n+1)Taq酶ll (n+1)引物和探针3l3l (n+1)H2O ll (n+1)2）将上述反应液混匀离心后，按照每管20L分装于各荧光PCR仪适用的PCR管中。3）加样：将提取好的样本RNA，分别加入上述分装好的PCR反应管中，模板量可根据样本情况自行决定（临床标本通常使用5ul模板量），不够部分以水补足。总反应体积25L。3.荧光RT-PCR循环条件设置程序循环数温度反应时间114230min21952min3

4、409510sec6035sec荧光检测模式为FAM和HEX荧光4.对照设置（1）阴性对照：核酸提取时以灭菌双蒸水代替标本。（2）阳性对照：阳性核酸作为模板RNA5.结果分析条件设定和结果判断阈值设定原则以阈值线刚好超过正常阴性对照扩增曲线的最高点，结果显示阴性为准，或可根据仪器噪音情况进行调整。Ct值无数值的标本为阴性样本Ct值Ct值35.0的样本建议重做。重做结果无数值者为阴性，否则为阳性。FAM荧光检测阳性为CA16核酸阳性，HEX荧光检测阳性为EV71核酸阳性。【注意事项】 1. 实验前请仔细阅读本试剂盒说明书，严格按操作步骤执行。 2. 整个实验操作过程以及PCR实验室的软硬件设施应符合卫生部颁布临床基因扩增检验实验室管理暂行办法、临床基因扩增检验实验室工作规范等法规的要求。 【联系方式】

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