参冬心宝口服液对柯萨奇病毒B3病毒性心肌炎小鼠的NK细胞及干

1、    参冬心宝口服液对柯萨奇病毒B3病毒性心肌炎 小鼠的NK细胞及干扰素活性的影响        【摘要】目的探讨参冬心宝口服液在小鼠体内免疫促进作用，为该药的临床应用提供理论依据。方法以柯萨奇病毒B3型(Coxsackie virus B3, CBV3m)病毒感染10日龄乳鼠为模型，观察了参冬心宝口服液对病毒感染急性期不同阶段心肌炎小鼠自然杀伤细胞(NK细胞)活性及干扰素(IFN)水平的影响。结果参冬心宝口服液能增强病毒感染急性期不同阶段小鼠的NK细胞活性，并能

2、促进感染小鼠体内诱生干扰素，治疗组与对照组的试验结果经统计学处理，差异具有显著性意义(P<0.05)。结论参冬心宝口服液具有免疫促进作用。该研究结果为临床采用参冬心宝口服液治疗病毒性心肌炎提供了佐证。【主题词】参冬心宝口服液心肌炎/病毒学干扰素NK细胞Effect of Shen-dong-xin-bao oral liquid on IFN-induction and NK cell activity in CVB3m infected miceWAN Sujun, LI Jiannong,CHEN Hongshan et al. Guang An Men Hospital &

3、 The Chinese Academy of Traditional Chinese Medicine 100053 【Abstract】ObjectiveOur aim was to investigate the effect of Shen-dong-xin-bao oral liquid on IFN-induction and NK cell activity in mice with coxsackie virus B3(CVB3m) infection in different infective stages. MethodsThe level of serum interf

4、eron (IFN) and the activity of natural killer (NK) cells in CVB3m induced myocarditis in mice were determined. Natural killer cell cytolytic activity was tested by MTT method and interferon titers by 50% microcytopathic effect assay. ResultsIn the infected mice fed with 30 g/kg or 12 g/kg per day of

5、 Shen-dong-xin-bao oral administration for 10d and 20d, the mean titers of IFN were markedly higher than that in untreated infected group, P<0.05. The NK cell activity in treated infected groups was also prominently higher than that in untreated infected group, especially on 20d, P<0.05. Concl

6、usionThis results demonstrate that administration of Shen-dong-xin-bao oral liquid possesses enhancement of antiviral immunocompetente action.【Key words】Shen-dong-xin-bao oral liquidViral myocarditisInterferonNatural killer cell病毒性心肌炎的发病率临床上与日俱增，已成为常见的心血管疾病之一。有关本病的发病与免疫的关系研究已有很大的进展。症状持续不愈的病毒性心肌炎患者NK

7、细胞活性明显较痊愈者及健康人为低1，动物实验也见类似报道2，说明提高机体免疫功能对病毒性心肌炎患者的恢复具有重要作用。参冬心宝口服液用于病毒性心肌炎临床应用受到好评，我们借助建立的小鼠Coxsackie B3病毒性心肌炎模型，观察了该药对NK细胞活性及IFN的作用效果。1材料和方法1.1药物参冬心宝口服液由北沙参、麦冬、黄芪、生地、炒枣仁等组成，含量为2 g/ml生药，由广安门医院药剂科提供。1.2动物同批10日龄上海种乳鼠体重67 g，以窝(8只带母鼠)购自军事医学科学院实验动物中心。1.3病毒感染病毒为Coxsackie virus B3嗜心株病毒(CVB3m)，TCID50为10/ml；

8、攻击病毒为滤泡性口炎病毒(VSV)，TCID50为105/ml。该两株病毒均由中国医学科学院医药生物技术研究所提供。1.4细胞靶细胞用K562细胞，测定细胞用L929细胞。细胞按常规方法传代，实验时按所需调配细胞浓度。1.5病毒感染及给药方法实验共分4组，参冬心宝口服液治疗组分设15 g/kg组和6 g/kg组，病毒感染对照组和正常小鼠对照组。每组2窝共16只。实验当日小鼠腹腔内接种0.3 ml含105CVB3m的RPIM 1640液，正常小鼠不做任何处理，接种病毒后2h，用药组小鼠以0.2 ml/10 g体重2次/日参冬心宝口服液灌胃治疗，病毒对照组小鼠以等体积饮用水替代安慰用药，正常小鼠自

9、然喂养。连续治疗至急性期10天，每组杀检8只小鼠，进行NK细胞活性和IFN水平的测定，余小鼠继续接受治疗至20天杀检，重复上述检测。1.6IFN的测定采用微量细胞病变抑制法。将实验组和对照组鼠血清系列倍比稀释，取0.1 ml分别加入96孔培养板，再加入2×106/ml L929细胞0.1 ml，37培养24h，以200 TCID 50 VSV攻击。48h内观察细胞病变。用Reed-Muench法计算结果。1.7NK细胞活性测定将实验组和对照组鼠脾脏用完全1640培养液制成1×105/ml悬液，以K562细胞为靶细胞，参照文献3，4方法进行NK细胞活性测定。2结果2.1参冬心

10、宝口服液对CVB3m心肌炎小鼠IFN水平的影响从表1可见，参冬心宝口服液能促进感染小鼠体内诱生IFN，其在不同阶段(10，20天)的诱生水平与病毒对照组比较，均有显著性差异。 表1Tab.1组别Group鼠数No. ofmice每日剂量Dosage perday (g/kg)IFN滴度(U/0.1 ml)IFN titer第10天The tenthday第20天The twentiethday病毒对照Virus control16治疗 Treatment1630*治疗Treatment1612*正常小鼠Normal mice16*     *P<0

11、.05：与病毒对照组比较*P<0.05：As compared with virus control2.2参冬心宝口服液对CVB3m小鼠NK活性的影响在感染期不同阶段，感染治疗组与感染对照组比较，参冬心宝口服液均能明显提高小鼠NK细胞活性。见表2。表2Tab.2组别Group鼠数No. ofmice每日剂量Dosage perday (g/kg)自然杀伤细胞(%)NK cell(%)第10天The tenthday第20天The twentiethday病毒对照Virus control16治疗 Treatment1630*治疗Treatment1612*正常小鼠Normal mice1

12、6     *P<0.05：与病毒对照组比较*P<0.05：As compared with virus control3讨论细胞免疫在病毒性心肌炎发病中的作用已受到临床上的普遍重视，Godney E K等在实验中发现，小鼠对CoxB3m病毒抵抗力不依赖T细胞功能而与NK细胞活性有一定的关系5，证明机体防御病毒感染，NK细胞是不可缺少的。而干扰素是NK细胞一种强大激活剂，二者在体内有效形成IFN-NK系统，对病毒感染起直接作用6。本研究观察到，中药参冬心宝口服液对病毒感染急性期不同阶段的Coxsackie B3病毒性心肌炎小鼠均具有增强脾脏N

13、K细胞的活性，明显促进其体内诱生IFN的作用，证明了参冬心宝口服液具有免疫增强作用，这种作用对于抑制病毒繁殖，清除病毒及促进病毒感染后机体恢复是十分重要的。本研究为临床采用该药治疗病毒性心肌炎奏效，提供了有力的佐证。本研究为国家中医药管理局资助课题作者单位：100053北京中国中医研究院广安门医院(万素君毛艳荣)；中国医学科学院医药生物技术研究所(李建农陈鸿珊)；中国医学科学院阜外医院(阮英茆张连庄) 参考文献1扬英珍，金佩英，王球达，等.Coxsackie B3病毒性心肌炎患者中天然杀伤细胞活性及.r干扰素的观察.中华心血管病杂志，1998，16(6)：337-339.2陈小敏，陈曙霞，郑道声，等.柯萨奇B3m病毒性心肌炎小鼠细胞免疫.上海医科大学学报，1992，12(4)：304-307.3王新江，李燕，谷淑燕.用MIT法检测小鼠NK细胞活性.中华实验和临床病毒学杂志，1991，5(1)：81-83.4蒋景仪，刘玉珍，朱珉，等.中药来源的新型免疫佐剂ASDP/ASDE3的抗病毒及诱生IFN，IL-1，IL-2的活性