基因工程习题及参考答案02

1、基因工程习题及参考答案02工具酶部分限制性内切核酸酶一、填空题1严格地说限制性内切核酸酶(restriction endonuclease)是指已被证明是 的酶。基因工程中把那些具有识别 的内切核酸酶统称为限制性内切核酸酶。2 年Luria 和Human 在T 偶数噬菌体对大肠杆菌感染实验中首次发现了细菌的 现象。31970 年，Smith 和Wilcox 从流感嗜血杆菌中分离到一种限制酶，能够特异性的切割DNA，这个酶后来被命名为 ，这是第一个分离到的类限制性内切核酸酶。4通过比较用不同组合的限制性内切核酸酶处理某一特定基因区域所得到的不同大小的片段，可以构建显示该区域各限制性内切核酸酶切点

2、相互位置的 。5类限制性内切核酸酶分子量较小一般在2040kDa，通常由 亚基所组成。它们的作用底物为双链DNA，极少数类酶也可作用于单链DNA，或DNARNA 杂合双链。这类酶的专一性强，它不仅对酶切点邻近的两个碱基有严格要求，而且对更远的碱基也有要求，因此，类酶既具有 专一性，也具有 专一性，一般在识别序列内切割。切割的方式有 ，产生 末端的DNA 片段或 的DNA片段。作用时需要 作辅助因子，但不需要 和 。6完全的回文序列具有两个基本的特点，就是：(1) (2) 。7类限制性内切核酸酶一般识别 个碱基，也有识别多序列的限制性内切核酸酶。根据对限制性内切核酸酶识别序列的分析， 限制性内切

3、核酸酶识别序列具有倾向，即它们在识别序列中含量较高。8EcoK 是I 类限制性内切核酸酶，分子组成是2 2 ，分子量300kDa。在这些亚基中，亚基具有 作用；亚基具有 的活性；亚基的作用则是 。9个体之间DNA 限制性片段长度的差异叫 。10限制性内切核酸酶是按属名和种名相结合的原则命名的，第一个大写字母取自 ，第二、第三两个字母取自 ，第四个字母则用 表示。11限制性内切核酸酶Acy I 识别的序列是5GRCGYG-3，其中R ，Y 。12在酶切反应管加完各种反应物后，需要离心2 秒钟，其目的是 和 。13部分酶切可采取的措施有：(1) (2) (3) 等。14第一个分离的限制性内切核酸酶

4、是 ；而第一个用于构建重组体的限制性内切核酸酶是 。15限制性内切核酸酶BsuRI 和Hae的来源不同，但识别的序列都是 ，它们属于 。16由于DNA 是由4 种碱基组成的，所以任何限制性内切核酸酶的切割频率的理论值应该是 。17Sal I 和Not I 都是哺乳动物中识别序列稀有的酶，在哺乳动物基因组的5kb 片段中，找到NotI 切点的概率是 。18部分酶切是指控制反应条件，使得酶在DNA 序列上的识别位点只有部分得到切割，它的理论依据是 。19I 类限制酶识别DNA 的位点和切割的DNA 位点是不同的，切割位点的识别结合有两种模型，一种是 ，另一种是 。20限制性内切核酸酶通常保存在 浓

5、度的甘油溶液中。二、判断题（ ）1限制与修饰现象是宿主的一种保护体系，它是通过对外源DNA 的修饰和对自身DNA的限制实现的。（ ）2限制性内切核酸酶在DNA 中的识别切割位点的二级三级结构也影响酶切效率。一般来说，完全切割质粒或病毒DNA，要比切割线状DNA 需要更多的酶，最高的需要20 倍。（ ）3如果限制性内切核酸酶的识别位点位于DNA 分子的末端，那么接近末端的程度也影响切割，如Hpa和MboI 要求识别序列之前至少有一个碱基对存在才能切割。（ ）4能够产生防御病毒侵染的限制性内切核酸酶的细菌，其本身的基因组中没有被该核酸酶识别的序列。（ ）5限制性图谱与限制性片段长度多态性(RFLP

6、)图谱的最显著的区别在于前者是一个物理图谱而后者是一个连锁图。（ ）6用限制性内切核酸酶Hae分别切割载体DNA 和供体DNA 后，可用Ecoli DNA 连接酶进行连接。 ，（ ）7已知某一内切核酸酶在一环状DNA 上有3 个切点，因此，用此酶切割该环状DNA,可得到3 个片段。（ ）8迄今所发现的限制性内切核酸酶既能作用于双链DNA，又能作用于单链DNA。（ ）9基因工程中使用的类限制性内切核酸酶不仅有内切核酸酶的活性，而且有甲基化酶的活性。（ ）10DNA 多态性就是限制性片段长度多态性。（ ）11用限制性内切核酸酶PstI 切割质粒pBR322 后，再用外切核酸酶Exo进行系列缺失，可

7、得到一系列大小不同的缺失突变体。（ ）12甘油会使许多限制性内切核酸酶的特异性发生改变，是导致一些酶的星活性的主要原因之一，防止的办法是在酶切反应体系中，将甘油的浓度控制在5以下。（ ）13具有EcoR末端的外源片段只能以一个方向插入到EcoR末端的载体中。（ ）14从Esherichiacoli K 中分离的限制性内切核酸酶命名为EcoK。（ ）15同一种限制性内切核酸酶切割靶DNA，得到的片段的两个末端都是相同的。（ ）16在限制与修饰系统中，修饰主要是甲基化作用，一旦位点被甲基化了，其他的限制性酶就不能切割了。（ ）17稀有酶是指那些识别序列很长又不常用的限制性内切核酸酶。三、选择题(单

8、选或多选)1关于宿主控制的限制修饰现象的本质，下列描述中只有( )不太恰当。(a)由作用于同一DNA 序列的两种酶构成(b)这一系统中的核酸酶都是类限制性内切核酸酶(c)这一系统中的修饰酶主要是通过甲基化作用对DNA 进行修饰(d)不同的宿主系统具有不同的限制修饰系统2RFLP 产生自( )(a)使用不同的限制性内切核酸酶(b)每种类型的染色体有两条(二倍体)(c)染色体中碱基的随机变化(d)Southern 印迹(e)不同探针的使用3型限制性内切核酸酶： ( )(a)有内切核酸酶和甲基化酶活性且经常识别回文序列(b)仅有内切核酸酶活性，甲基化酶活性由另外一种酶提供(c)限制性识别非甲基化的核

9、苷酸序列(d)有外切核酸酶和甲基化酶活性(e)仅有外切核酸酶活性，甲基化酶活性由另外一种酶提供4型限制性内切核酸酶： ( )(a)由两个亚基组成，仅识别半甲基化位点。甲基化位点相对于限制位点的位置(上游或下游)决定了DNA 是被甲基化还是被限制(b)不同亚基的识别位点甲基化和限制活性相互排斥：MS 亚基促使甲基化，R 亚基促使限制(c)由两个亚基组成，在识别位点附近识别并进行甲基化或限制(d)在错配修复中起关键作用，因为酶结合到DNA 上是以结构扭曲为基础而不是序列错误识别(e)是光依赖型酶，是嘧啶二聚体进行“光反应”的关键酶，它们能使胸腺嘧啶二聚体间的共价键断裂5分析限制性内切核酸酶切割双链

10、DNA 所得到的DNA 片段的长度有助于物理作图，这是因为：( )(a)即使只用一种限制酶，因为DNA 是线性的，所以也可以迅速确定限制性片段序列(b)内切酶在等距离位点切割DNA，同时对于每个生物体的长度是特异的(c)DNA 的线性意味着单限制性酶切片段的长度之和等于DNA 的总长，而双酶切产生的重叠片段则产生模糊的图谱(d)这些内切酶的消化活性是物种特异的(e)这一技术同时为核苷酸序列提供了广泛信息6通过限制性片段分析，可以对等位基因进行精确的分析比较，其原因是：( )(a)限制性内切核酸酶只切割两个变异等位基因中的一个(b)它利用限制性位点作为遗传标记(c)一个特定细胞中等位基因的核苷酸

11、序列不会是相同的(d)它不依赖于变异等位基因产物的功能。(e)限制性内切核酸酶的切点被限制在DNA 的编码区域内7限制性片段长度多态性(RFLP)是：( )(a)用于遗传的“指纹结构”模式分析的技术(b)二倍体细胞中的两个等位基因限制性图谱的差别(c)物种中的两个个体限制性图谱间的差别(d)两种物种个体间的限制性图谱差别(e)两种酶在单个染色体上限制性图谱的差别 ·8为了正确地构建一个真核基因组的物理图谱：( )。(a)必须有可能清晰地分离各个染色体(通过脉冲场凝胶电泳)(b)必须从单倍体细胞(配子)中分离DNA，这样避免了由二倍体细胞中同源染色体的存在而产生的干扰信息(c)必须进行

12、单个染色体分析，这只能在细胞分裂后期进行(d)必须找到对于每个染色体只切割一次的限制酶(e)必须首先分离核DNA 和细胞器DNA，然后对它们分别作图9下面有关限制酶的叙述哪些是正确的?( )(a)限制酶是外切酶而不是内切酶(b)限制酶在特异序列(识别位点)对DNA 进行切割(c)同一种限制酶切割DNA 时留下的末端序列总是相同的(d)一些限制酶在识别位点内稍有不同的点切割双链DNA，产生黏末端(e)一些限制酶在识别位点内相同的位置切割双链DNA，产生平末端10因研究噬菌体的限制与修饰现象的本质而获得诺贝尔奖的科学家是：( )(a) JLederberg (b) WArber (c) HSmit

13、h (d) FSanger11第一个被分离的类酶是： ( )(a)EcoK (b)Hind (c)Hind (d)EcoB12双链DNA 中一段自我互补的序列被称为回文序列，这种序列一般具有下列特征： ( )(a)有对称轴 (b)两条链的5 3方向的序列相同(c)是类酶的识别序列 (d)可增强基因的表达13在下列进行DNA 部分酶切的条件中，控制那一项最好?( )(a)反应时间 (b)酶量(c)反应体积 (d)酶反应的温度14在下列试剂中，那一种可以螯合Ca2离子?( )(a)EDTA (b)柠檬酸钠 (c)SDS (d)EGTA ，15在下列工具酶中，那一种可以被EGTA 抑制活性?( )(

14、a)S1 单链核酸酶 (b)末端转移酶 (c)碱性磷酸酶 (d)Bal 31 核酸酶16限制性内切核酸酶可以特异性地识别： ( )(a)双链DNA 的特定碱基对 (b)双链DNA 的特定碱基序列(c)特定的三联密码 (d)以上都正确17在下列酶中，催化反应不需要ATP 的是( )(a)EcoK (b)EcoB (c)T4DNA 连接酶 (d)BamHl18下列关于限制性内切核酸酶的表示方法中，正确一项的是( )。(a)Sau3AI (b)EcoRI (c)hindIII (d)Sau 3A119限制性内切核酸酶的星号活性是指：( )(a)在非常规条件下，识别和切割序列发生变化的活性。(b)活性

15、大大提高(c)切割速度大大加快(d)识别序列与原来的完全不同20下面哪一种不是产生星号活性的主要原因?( )(a)甘油含量过高 (b)反应体系中含有有机溶剂(c)含有非Mg2的二价阳离子 (d)酶切反应时酶浓度过低21DNA 被某种酶切割后，电泳得到的电泳带有些扩散，下列原因中，那一项不太可能?( )(a)酶失活 (b)蛋白质(如BSA)同DNA 结合(c)酶_切条件不合适 (d)有外切核酸酶污染22关于回文序列，下列各项中，( )是不正确的(a)是限制性内切核酸酶的识别序列 (b)是某些蛋白的识别序列(c)是基因的旁侧序列 (d)是高度重复序列23关于宿主控制的限制修饰现象的本质，下列描述中

16、只有( )不太恰当(a)由作用于同一DNA 序列的两种酶构成(b)这一系统中的核酸酶都是类限制性内切核酸酶(c)这一系统中的修饰酶主要是通过甲基化作用对DNA 进行修饰(d)不同的宿主系统具有不同的限制修饰系统四、简答题1现分离到X82 噬菌体的一个突变型，它同野生型的噬菌斑相当不同，并已分离到这两种噬菌体的DNA，请设计一个实验，初步鉴定是点突变、插入突变还是缺失突变?2说明SangerDNA 测序法的原理。3在酶切反应缓冲液中加入BSA 的目的是什么?机理是什么?4Fredrick 和McClarin 等用一个由13 个碱基对的DNA 片段与EcoRI、反应，然后分离到酶和DNA 共结晶的

17、复合物，通过X 射线分析发现了什么?5有些噬菌体和质粒常常编码一些抗限制性酶的蛋白以中和宿主的限制系统。你认为噬菌体和质粒还有哪些可能的方式避免宿主的限制作用?6某学生在用EcoRI 切割外源DNA 片段时，出现了星号活性，请分析可能的原因?7在序列5CGAACATATGGAGT-3中含有一个6bp 的类限制性内切核酸酶的识别序列，该位点的序列可能是什么?8下面几种序列中你认为哪一个(哪些)最有可能是类酶的识别序列：GAATCG，AAATTT， GATATC， ACGGCA?为什么?9用连接酶将Sau 3AI(,bGATC)切割的DNA 与经BamHI(G 'GATCC)切割的DNA

18、连接起来后，能够被BamHI 切割的机率有多大(用百分比表示)?10用Klenow 酶填补的办法可使5黏性末端转变成平末端。这种方法常使DNA 上的某些限制酶的识别位点消失。请问，对于下列限制酶，用这种方法处理会不会使它们的识别序列都消失?BamH I(G GATCC)；Taq I(T CGA)，BssH(G CGCGC)。11请推测细菌的染色体上是否会有编码识别8 个碱基的内切酶? 怎样验证?12当两种限制性内切核酸酶的作用条件不同时，若要进行双酶切，应采取什么措施?为什么?五、问答题1 什么是细菌的限制修饰系统(restriction-modificationsystem，R-Msyste

19、m)2 细菌的限制修饰系统有什么意义?3 说明限制性内切核酸酶的命名原则要点。4 I 类限制酶具有哪些特点?在基因工程中有什么作用?5 类限制酶有哪些特点?6 何谓限制性内切核酸酶的切割频率?7 什么是限制性内切核酸酶的星号活性?受哪些因素影响?8 双酶消化法(doubledigests)绘制限制性内切核酸酶酶谱的原理。9 什么是DNA 多态性(DNApolymorphism)?10限制性片段长度多态性(restrictionfragmentlengthpolymorphism，RFLP)。11计算下列三种酶各自在某染色体DNA 序列上识别位点间的平均距离：Alu I： 5AGCT 3”， E

20、coR I： 5GAATTC 3 3，TCGA 5 3CTTAGG 5Acy I： 5GPuCGPyC 3 3CPyGCPuG 5(注： Py 二任何一种嘧啶：Pu 二任何一种嘌吟)12在细菌质粒pBPI 的四环素抗性基因tetR 的中间有一个Hind的切点。用Hind 切割果蝇基因组DNA，以pBPl 为载体构建基因组文库。分子杂交证明克隆15 带有果蝇的目的基因。用Hind 和EcoRV 对克隆15 进行了酶切分析，电泳结果如图下图(用酶切的pBPl 质粒DNA 作对照)，旁边标出了片段的大小。图 酶切电泳图谱12： Hind切割；34：EcoRV 切割；56：HindIII+EcoRV；

21、1、3、5 是质粒DNA；2、4、6 是15 号克隆。(1)绘制含有插入片段和不含插入片段时的pBPl 的限制性图谱，并标明四环素抗性基因的位置；(2)如果用克隆在另一个与pBPl 完全不同源载体上的四环素抗性基因作为探针进行Southern 印迹杂交，预测上述电泳图会出现什么样的杂交带?(3)如果用克隆15 的果蝇DNA 片段作为探针进行Southern 印迹杂交，放射自显影的结果又是如何?13为什么大多数内切酶被称为“限制”酶。14据Science 杂志报道：一种重要的遗传疾病可由导致DNA 中碱基替换的诱变剂在体外进行人工诱导。设计一种快速用以鉴定疾病基因型的检测方法。15为了绘制长为3

22、0kb BamH限制性片段的限制性图谱，分别用EcoRI、Hpa、EcoRI+Hpa消化这一片段的三个样品，然后通过凝胶电泳分离DNA 片段，溴化乙锭染色后观察DNA 带型(见下图)。请根据这些结果，绘制一个限制性图谱，要标明EcoRI和Hpa识别位点间的相对位置，以及它们之间的距离(kb)。图 用EcoRI、Hpa单独切割及用这两种酶混合切割片断产生的DNA带六、概念题1回文结构 2同裂酶 3限制性物理图谱工具酶-限制性内切核酸酶(参考答案)一、填空题1限制修饰系统的一个组成部分；双链DNA 分子中的某种特定核苷酸序列，并由此切割DNA 双链结构21952； 限制和修饰3Hind4限制性酶切

23、图谱524 个相同的；切割位点；识别位点的；平切和交错切；平；具有突出黏睦末端；Mg2+；ATP；SAM6(1)能够在中间划一个对称轴，两侧的序列两两对称互补配对；(2)两条互补链的5 3的序列组成相同，即将一条链旋转180°，则两条链重叠746；GC8限制性内切核酸酶的作用； 甲基化酶；识别DNA9限制性片段长度多态性(RFLP)10属名的第一个字母；种名的前两个字母；株名11代表A 或者是T；代表G 或者C12混合均匀；防止部分酶切13(1)减少酶量；(2)缩短反应时间；(3)增大反应体积14EcoK；EcoRl15GGCC；异源同工酶16 4n17120018酶切速度是不均衡的

24、 19限制酶移动；DNA 弯曲20 50二、判断题1 错误。 对外源DNA 的限制，对自身DNA 的修饰。2 正确。3 正确。4 错误。细菌本身基因组中核酸酶的识别序列因C 或A 残基的甲基化作用而受到保护，可免遭切割。5 正确。6 错误。限制性内切核酸酶Hae切割DNA 产生平末端的DNA 片段，EcoliDNA 连接酶不能连接平末端。7 正确。8 错误。9 错误。类限制性内切核酸酶没有甲基化酶的活性。10错误。DNA 多态性是指中性突变不低于1的一种群体，一般是不能检测的。如果这种突变发生在限制性内切核酸酶的识别位点上，就会改变酶切的模式，可以通过电泳检测出来。所以，RFLP 是DNA 多

25、态性的一部分。11错误。限制性内切核酸酶PstI 切割DNA 后产生3，突出的黏性末端，而外切核酸酶Exo只能从突出的5，端降解DNA。12正确。13正确。14错误。应是EcoK。15错误。同一种限制性内切核酸酶切割靶DNA，得到的片段的两个末端不一定相同。如果识别序列不是完整的回文序列，产生的末端就不相同。16错误。限制与修饰是一对保护系统，修饰了就不能被同一系统中的限制性内切核酸酶切割，但是对不同限制修饰系统中的酶没有作用。17错误。在某种生物基因组DNA 中切割频率很低的酶称为稀有酶。三、选择题(单选或多选)1b； 2C； 3b； 4C； 5C；6b，d； 7c； 8a，e； 9b，c，

26、d，e； 10b；11c； 12a，b，c； 13b； 14d； 15D 16b； 17d； 18d； 19a； 20d；21a； 22d； 23b四、简答题1 答：用RFLP 分析法。2答：SangerDNA 测序法是建立在两个基本原理之上：(1)核酸是依赖于模板在聚合酶的作用下由5，端向3，端聚合(DNA 聚合酶参与了细菌修复DNA 合成过程)；(2)可延伸的引物必须能提供游离的3，羟基末端，双脱氧核苷酸由于缺少游离的3，羟基末端，因此会终止聚合反应的进行。如果分别用4 种双脱氧核苷酸终止反应，则会获得4 组长度不同的DNA 片段。通过比较所有DNA 片段的长度可以得知核苷酸的序列。3答：

27、目的是保护酶活性，机理是通过提高溶液中蛋白质的浓度，防止酶失活。4答：发现：具有活性的EcoRI 是一个二聚体，它们同DNA 结合形成一个直径为50A 的球形结构，两个EcoRI 位于DNA 的两侧。5答：某些噬菌体的基因组中有修饰的碱基，因此对限制性内切核酸酶具有免疫作用。另一种避免限制酶切割的途径是抑制SAMase 的活性，该酶制造S腺苷甲硫氨酸。某些限制酶作用时需要S腺苷甲硫氨酸。然而，噬菌体在发育过程中不能同某些单碳的供体反应。6答：盐离子浓度不对，温度不对，甘油浓度过高。7答：回文序列是：5-CATATG-38答：GATATC；AAATUF，因为它们是回文序列。9答：25。10答：B

28、ssH不会。11答：关于这个问题没有明确的答案。这些酶的作用不仅仅限于噬菌体的感染，因为大多数噬菌体并不含有8 个碱基序列的酶切位点，一种可能是8 个碱基的酶是质粒整合后加上去的，作为质粒附加系统的一部分。12答：注意星活性，先低盐，后高盐；先低温酶，后高温酶；并且可以直接在换酶前将第一种酶失活，再加第二种酶，否则，易产生星活性。或使用通用缓冲液。五、问答题1答：细菌中有作用于同一DNA 的两种酶，即分解DNA 的限制酶和改变DNA 碱基结构使其免遭限制酶分解的修饰酶。 而且，这两种酶作用于同一DNA 的相同部位，把这两种酶所组成的系统称为限制与修饰系统。2答：不同种的细菌或不同的细菌菌株具有

29、不同的限制酶和修饰酶组成的限制与修饰系统。修饰的本质是通过甲基化酶将DNA 中某些碱基进行甲基化修饰，由于宿主自身DNA 上的这些位点进行了修饰，限制酶就不能进行切割。由于外来的DNA 在相应的碱基上没有被甲基化，宿主的限制酶通过对该位点的识别来分辨敌我，并将人侵的外来DNA 分子降解掉。所以DNA 限制作用和修饰作用为细胞提供了保护。3答：限制性内切核酸酶采用三字母的命名原则，即属名+种名+株名的各一个首字母，再加上序号。基本原则： 34 个字母组成，方式是：属名+种名+株名+序号；首字母： 取属名的第一个字母，且斜体大写；第二字母： 取种名的第一个字母，斜体小写；第三字母： (1)取种名的

30、第二个字母，斜体小写；(2)若种名有词头，且已命名过限制酶坝，j 取词头后的第一字母代替。第四字母： 若有株名，株名则作为第四字母，是否大小写，根据原来的情况而定，但用正体。顺序号： 若在同一菌株中分离了几种限制酶，则按先后顺序冠以I、等，用正体。4答：I 类限制性内切核酸酶的分子量较大，一般在30 万道尔顿以上，通常由三个不同的亚基所组成。例如限制性内切核酸酶EcoB 是由R(135kDa)，M(62kDa)和S(55kDa) 三种亚基组成的复合酶，这三个亚基分别由不同的基因编码。全酶的总分子量为449kDa，共5个亚基，其中R 亚基和M 亚基各两分子。I 类酶不仅是一种内切核酸酶，同时在酶

31、分子上还具有甲基化酶和ATPase 的活性，所以是具有多种酶活性的复合酶类。作用时除了需要Mg2+作辅助因子外，还要求ATP 和S腺苷甲硫氨酸(SAM)的存在。I 类酶具有特异的识别序列，大约15 个碱基对。I 类酶虽然能够在一定序列上识别DNA 分子，并能同DNA 分子作用，因其识别DNA 后，要朝一个方向或两个方向移动一段距离(通常为1000 个碱基左右)，并且要形成一个环才能切割DNA，所以识别位点和切割位点不一致，产生的片段较大。因此在基因工程中作用不大。5答：类酶是基因工程中不常用的酶，分子量和亚基组成类似于I 类酶，作用方式基本同类酶。如EcoPI 是由两个亚基组成，一个亚基(M

32、亚基)负责位点识别和修饰，另一个亚基(R 亚基)具有核酸酶的活性。切割DNA 时需要ATP、Mg2+，也能被SAM激活，但并非必须。6答：切割频率是指限制性内切核酸酶在某DNA 分子中预测的切点数。由于DNA 是由4 种类型的单核苷酸组成，假定DNA 的碱基组成是均一的，而限制性内切核酸酶的识别位点是随机分布的，那么对于任何一种限制酶的切割频率，理论上应为14n，n 表示该限制酶识别的碱基数。如识别4 个碱基的限制酶，其切割频率应为每256 个碱基有一个识别序列和切点(144=1256)，识别5 个碱基的限制性内切核酸酶，其切割频率应为每1024 个碱基有一个识别序列和切点，余类推。7答：类限

33、制酶虽然识别和切割的序列都具有特异性，但是这种特异性受特定条件的限制，即在一定环境条件下表现出来的特异性。条件的改变，限制酶的特异性就会松动，识别的序列和切割都有一些改变，改变后的活性通常称第二活性，而将这种因条件的改变会出现第二活性的酶的右上角加一个星号表示，因此第二活性又称为星活性。概括起来，诱发星活性的因素有如下几种：(1)高甘油含量5，vv)；(2)限制性内切核酸酶用量过高(>100Ug DNA)；(3)低离子强度(<25 mmolL)；(4)高pH(8.0 以上)；(5)含有有机溶剂，如DMSO，乙醇等；(6)有非Mg2+的二价阳离子存在(如Mn2+，Cu2+，C02+，

34、Zn2+等)。8答：双酶消化法是绘制DNA 中两个或两个以上限制性内切核酸酶图谱所采用的方法。做法是在两个限制性内切核酸酶分别单独消化DNA 分子的基础上，然后再用这两个酶同时或先后消化此DNA，根据它们的结果，构建物理图谱。 ，9答：在正常人群中，各个体DNA 分子的某些位点可以发生中性改变，这些改变虽然会使DNA 一级结构产生一定变化，但不影响基因的表达，如果这种中性突变在人群中的频率不低于1，这一现象被称为多态性。DNA 多态性本质上是染色体DNA 中核苷酸数目或排列顺序的个体差异，这些差异多数为中性突变，不引起表型改变。10答：当DNA 序列的差异发生在限制性内切核酸酶的识别位点时，或当DNA 片段的插入、缺失或重复导致基因组DNA 经限制性内切核酸酶酶解后，其片段长度的改变可以经凝胶电泳区分时，DNA 多态性就可应用限制性内切核酸酶进行分析，这种多态性称为限制性片段长度多态性(restrictionfragmentlengthpolymorphism,RFLP)。11 答 AluI：(14)4=1256； EcoRI： (14)6=14096 AcyI：(14)4(12)2=1102412 答：(1) 酶切图谱示于下图图 限制性图谱(2)除No.2 的2.5kb，No.6 的1