多囊卵巢动物模型的实验研究(1)

1、多囊卵巢动物模型的实验研究(1)        作者：江胜芳， 曹书芬， 张昌军    【关键词】 多囊卵巢；,动物模型；,大鼠摘要：目的对孕激素联合HCG PCO动物模型进行评估。方法给24日龄雌性SD大鼠皮下埋植孕酮硅胶棒，2 d后再连续9 d皮下注射低剂量HCG，观察卵巢形态、血清激素含量及卵巢颗粒细胞凋亡、卵泡闭锁情况。结果模型组大鼠卵巢重量、体积增加，卵巢呈多囊性改变，卵泡颗粒细胞减少而膜细胞层增加，颗粒细胞凋亡及卵泡闭锁增加，血清中孕酮、睾酮明显增高，而雌二醇变化

2、不明显。结论此动物模型卵巢病理改变及血内分泌改变与PCOS病人相似，可以作为多囊卵巢研究的动物模型。关键词：多囊卵巢； 动物模型； 大鼠Abstract:ObjectiveTo evaluate the animal model for polycystic ovary (PCO).MethodsProgesterone-synchronized immature rat were injected 1.5 IU HCG twice-daily for 9 days. Ovarian morphology, serum hormone, apoptosis of granulose cells

3、 and atresia of follicles were observed.ResultsIn the model group the weight and volume of cysfic ovaries highly increased, granulose cells reduced and thecal cells increased.Apoptosis of granulose cells and atre sia of follicles increased. In addition, serum progesterore and festosterone increased

4、highly.ConclusionThese results suggested that this kind model is suitable for the PCO research.Key words:Polycystic ovary(PCO); Animal model; Rat    多囊卵巢综合征（Polycystic Ovary Syndrome ,PCOS）是妇科常见的生殖功能障碍性疾病，主要表现为卵巢的雄激素过多所造成的闭经、多毛、肥胖及无排卵，其发生率占生育年龄妇女的5%10%。建立多囊卵巢综合征动物模型对其病因的基础研究以及指导临

5、床的诊断和治疗有深远的意义。多年来，高LH血症被认为是PCOS的主要内分泌变化和特征1。K.Bogovich等据此提出一种孕激素联合HCG的PCO动物研究模型2，本实验对此模型从内分泌、形态、卵巢颗粒细胞凋亡及卵细胞闭锁等方面进行研究，以对此模型进行评估。1 材料与方法1.1 试剂左旋18甲基炔诺酮硅胶棒：上海达华制药厂，购自十堰市计划生育服务站，每根含75 mg左旋18甲基炔诺酮；HCG（注射用）：北京高科，华泰制药，500IU/支；放免试剂盒：购自深圳拉尔文生物技术有限公司；细胞凋亡检测试剂盒：购自武汉博士德生物工程有限公司。1.2 动物模型的建立实验选用24日龄未成年雌性SD大鼠20只，

6、随机分成对照组和模型组，每组10只。模型组皮下埋植左旋18甲基炔诺酮硅胶棒（3 mm），从27日龄开始每天2次皮下注射1.5IUHCG，共注射9 d至36日龄。对照组每天注射等量生理盐水。1.3 激素测定两组大鼠均于24日龄、36日龄分别称体重，36日龄断头处死，取血，3000 r/min离心20 min，收集血清样品，-20储存，按放免试盒说明书测血清中孕酮（P）、雌二醇（E2）、睾酮（T）含量。测定仪器：SN679型放射免疫计数仪。放免质控符合要求，批内变异系数10%，批间变异系数15%。1.4 卵巢形态学观察大鼠处死后立即取出双侧卵巢称重，分别测量卵巢长径（L）、短径（S），计算平均卵巢

7、面积（MOP=L×S）、卵巢体积V=4.19×(L S)/23。用10%福尔马林固定作常规石蜡切片HE染色及TUNEL法检测颗粒细胞凋亡。观察两组大鼠双侧卵巢大体解剖及光镜(HE)染色及TUNEL改变，计算每张切片囊状卵泡数、囊状扩张卵泡比例，进行卵泡膜细胞层最大厚度及颗粒细胞层最大厚度的显微测量。光学显微镜镜下对凋亡染色进行观察，计算每张切片凋亡颗粒细胞数。根据李爱冬、羊惠君等的方法计算闭锁卵泡数，测量最大闭锁卵泡直径（测量卵泡中两个最大垂直直径，取平均值则为该卵泡直径）。1.5 数据处理计量资料以均值±标准差表示，组间差异的比较采用双侧t检验。记数资料采用2检

8、验。2 结果2.1 大鼠体重差模型组造模前后体重显著大于对照组（见表2），P0.05。2.2 激素测定与对照组相比，模型组E2含量变化不明显，而P，T均显著升高。结果见表1。表1 两组大鼠血清激素水平比较（略）3 卵巢形态学观察3.1 卵巢大体解剖学改变对照组卵巢色泽红，模型组卵巢表面色泽苍白，体积增大，见较多囊状扩张的卵泡。模型组卵巢重量、体积、平均卵巢面积均显著高于对照组（见表2），P均0.01。表2 两组大鼠造模前后体重差及卵巢大体解剖比较（略）3.2 HE染色光学显微镜观察卵巢形态对照组卵巢镜下见多个黄体及不同发育阶段的卵泡，卵泡数明显高于模型组，模型组囊状扩张卵泡比例明显增加，囊状扩

9、张卵泡内卵母细胞或放射冠消失，颗粒细胞层数减少，排列疏松，内外卵泡膜细胞层分层明显。模型组颗粒细胞层厚度较对照组明显变薄（P0.01），泡膜细胞层厚度较对照组明显增厚。见表3及图12。表3 两组大鼠卵巢形态学比较（略）图1 对照组卵巢镜下见多个黄体及不同发育阶段的卵泡，卵泡数明显高于模型组（×40） （略）图2模型组囊状扩张卵泡比例明显增加，囊状扩张卵泡内卵母细胞或放射冠消失，颗粒细胞层数减少，排列疏松，内外卵泡膜细胞层分层明显（×40）（略）3.3 凋亡颗粒细胞数凋亡阳性染色呈褐色细颗粒状，位于细胞核。阳性颗粒细胞的核浓缩，或靠边呈环状或呈新月形（图3）。模型组卵巢凋亡颗粒细胞数较对照组明显增加，差别具有显著性意义（P0.05）。结果见表4。3