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文档简介

1、课题2 多聚酶链式反应扩增DNA片段导学案学习目标：1、了解PCR技术的基本操作。2、理解PCR的原理。3、讨论PCR的应用。基础知识PCR技术扩增DNA的过程，与细胞内DNA复制过程类似：1细胞内DNA复制条件分析：条件组分作用模板DNA的两条单链提供复制的模板原料四种脱氧核苷酸合成DNA子链的原料酶解旋酶DNA聚合酶打开DNA双螺旋催化合成DNA子链能量ATP为解螺旋和合成子链供能引物RNA为DNA聚合酶提供合成的3端起点2细胞内DNA复制过程的解析：解旋： 引物结合：DNA聚合酶结合： 子链合成： 后续加工： 子链合成特点： 思考DNA分子能准确复制的原因有哪些？3 DNA分子复制的人工

2、控制解开螺旋：在 时，DNA双螺旋打开，形成两条DNA单链，称为变性。恢复螺旋：在 左右时，两条DNA单链重新形成双螺旋结构，称为复性。复制条件： 反应场所： （自动温度周期性调节）。思考缓冲液相当细胞内的什么成分？（核基质）4PCR的反应过程变性：在 时DNA解旋 复性：在 时引物与DNA单链结合延伸：在 时合成DNA子链（两个引物间的序列）实验操作（1） PCR反应体系：缓冲液、 ， 、 、两种RNA引物，水（2） 实验操作步骤按照PCR反应体系配方配制反应液；将PCR反应体系50L用微量移液器转移到微量离心管（0.5mL）中；将微量离心管放到PCR仪中；设置PCR仪的工作参数。DNA在PCR仪中大量扩增。24 水浴法：将微型离心管依次在 、 、 的恒温水浴锅中循环处理相应时间。3实验注意事项（1）避免外源DNA污染：所用仪器、缓冲液、蒸馏水等使用前高压灭菌。（2）缓冲液和酶分装成小份，20低温保存。（3）每添加一种反应成分，更换一个移液器的枪头。（4）混匀后离心处理，使反应液集中在离心管底部。多聚酶链式反应扩增DNA片段PCR原理DNA的复制需要酶、原料、能量、引物DNA的变性和复性受温度影响PCR过程变性复性延伸操作步骤配制PCR反应体系移入离心管放

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