HIF-1α、2α和Survivin蛋白在食管鳞癌中的表达及临床意义(1)

1、HIF-1、2和Survivin蛋白在食管鳞癌中的表达及临床意义(1)【摘要】 目的 探讨缺氧诱导因子（HIF-1、HIF-2）和生存素蛋白（survivin）在食管正常粘膜、食管炎、食管鳞癌（ESCC）组织中的表达，并测定食管正常粘膜、食管炎、食管鳞癌组织中的微血管密度，初步分析它们与食管鳞癌生物学行为之间的关系。方法 采用免疫组织化学(SP)方法分别检测65例食管正常粘膜、食管炎、食管鳞癌组织中HIF-1、HIF-2和survivin的表达，同时测定微血管密度(MVD)计数。结果 (1) HIF-1、HIF-2和survivin在食管正常粘膜组织中不表达，食管炎组织中低表达，食管鳞癌中高表

2、达，在食管不同组织分型中三者的表达比较具有显著性差异(P0.01)。随正常粘膜-炎症-癌的次序MVD计数呈逐渐升高趋势。(2)Survivin在食管鳞癌组织中表达越强，组织分化程度越低(P0.01)、TNM分期越晚(P0.01)、淋巴结转移率越高(P0.01)；HIF-1和HIF-2在食管鳞癌组织中表达越强，淋巴结转移率越高(P0.01)，组织分化程度越低(P0.05)，两者与组织分化程度、TNM分期呈负相关。(3)食管鳞癌中HIF-1、HIF-2表达与survivin表达呈正相关(P0.01), 三者表达与MVD呈正相关(P0.01)。结论 (1) HIF-1、HIF-2和survivin表

3、达对食管鳞癌的发生、发展起正性协同作用；(2)检测食管鳞癌组织中survivin的表达对判断肿瘤的发生、发展具有重要意义。survivin可望成为诊断和治疗食管鳞癌的新靶点。 【关键词】 食管鳞癌 缺氧诱导因子 生存素蛋白 免疫组织化学 Abstract Objective To identify MVD and illustrate the significance of expression of HIF-1、HIF-2 and survivin in normal mucosa of esophagitis and esophageal squamous cell cancer, and

4、 its relationship to the biological behavior of esophageal squamous cell cancer. Methods HIF-1、HIF-2 and survivin in 65 specimens resection from patients with normal mucosa、esophagitis and esophageal squamous cell cancer were investigated by IHC S-P staining method and identify the MVD as well. Resu

5、lts (1)The expression of HIF-1、HIF-2 and survivin in normal mucosa was non-expression, low in esophagitis ,high in esophageal squamous cell cancer , the expression of esophageal squamous cell cancer was significantly higher than its expression in normal mucosa and esophagitis(P0.01). MVD was more hi

6、gher as the progression of normal mucosa, esophagitis and esophageal squamous cell cancer. (2)Expression of survivin in esophageal squamous cell cancer was inversely correlated with the histological differentiation of tumor, lymph node metastasis and TNM stage(P0.01). Expression of HIF-1、HIF-2 was p

7、ositively related with lymph node metastasis(P0.01) and histological differentiation of tumor(P0.05),inversely correlated with TNM stage(P0.01). (3)Expression of HIF-1、HIF-2 and survivin were positively related with each other(P0.01) and the MVD(P0.05)。 1.2 主要试剂 兔抗人多克隆survivin即用型工作液、HIF-1和HIF-2鼠抗人单克

8、隆抗体浓缩型工作液、即用型ElivisionTM plus试剂盒（鼠/兔）、DAB显色试剂盒，均购自福州迈新生物技术有限公司。 1.3 免疫组化检测方法 石蜡切片脱蜡水化后均先行高温高压抗原修复，其余步骤按ElivisionTM plus试剂盒说明书操作。以PBS液代替一抗作阴性对照，用已知阳性的组织作阳性对照。 1.4 结果判断方法 HIF-1、HIF-2表达于细胞核，出现棕黄色或棕褐色颗粒者为阳性，按阳性细胞百分数分组：每张切片随机取5个高倍镜视野(400)，计数200个细胞并计算阳性细胞所占百分数。阳性细胞数50%者为强阳性，弱阳性至强阳性表达视为阳性表达。Survivin表达于细胞质，

9、出现棕黄色或棕褐色颗粒者为阳性，按染色深浅分组：阴性(-)：无染色；弱阳性(+)：浅染色；阳性 (+)：中度染色；强阳性(+)：强染色。分组在病理科医生不了解病例临床预后情况下进行。 MVD计数：参照Weidner等报道的方法, 每张切片随机取5个高倍镜视野(400)，记录5个视野内的微血管数, 取其平均值作为该病例的MVD值。 1.5 统计学分析方法 采用SPSS12.0统计软件包进行统计分析。计数资料以百分率表达，显著性检验采用2检验；计量资料以(xS)表达，显著性检验采用方差分析、t检验；做秩相关分析。 2 结果 2.1 食管不同组织分型中HIF-1、HIF-2和survivin的表达情

10、况 HIF-1、HIF-2和survivin在食管正常粘膜组织中不表达，在食管炎组织中低表达，在食管鳞癌中高表达。MVD计数随着正常粘膜-炎症- 癌次序呈逐渐升高趋势，见表1。表1食管不同组织分型的比 注：*与正常粘膜比较P0.01；与食管炎比较P0.01. 2.2 食管鳞癌中HIF-1、HIF-2和survivin的表达情况 淋巴结转移组HIF-1、HIF-2和Survivin阳性率分别为92.31%、100%和92.31%，与淋巴结无转移组比较有显著性差异 (P0.05或P0.01)，MVD计数（30.362.78）与淋巴结无转移组比较有显著性差异(P0.01)；组织分化程度低组HIF-1

11、、HIF-2和Survivin阳性率分别为95.24%、100%和100%，三者与组织分化程度高、中组比较有显著性差异 (P0.05或P0.01)，MVD计数(30.522.89)与组织分化程度高、中组比较有显著性差异 (P0.01)；TNM分期B、组HIF-1、HIF-2和Survivin阳性率分别为90.48%、95.24%和90.48%，其中survivin与TNM分期、A组比较有显著性差异(P0.05），MVD计数(30.582.67)与TNM分期、A组比较有显著性差异(P0.01)，见表2。表2 65例食管癌各因素比较 注： *与淋巴结无转移比较，P0.05；*，P0.01；与分化程

12、度高、中比较P0.05，与分化程度高、中比较 P0.01；，与TNM分期、A比较，P0.05，P0.01.2.3 食管鳞癌中HIF-1、HIF-2和survivin表达间的相关性 HIF-1、HIF-2与survivin表达均呈正相关(P0.01)，随着HIF-1、HIF-2和survivin表达强度的升高，MVD呈升高趋势，三者与MVD计数均呈正相关关系(P0.01)，见表3。 表3 食管癌中HIF-1、HIF-2和Survivin表达的相关性 3 讨论 3.1 HIF-1、HIF-2对食管鳞癌生物学行为的影响 HIF是近年来发现的广泛存在于哺乳动物细胞中介导低氧适应的一种异源二聚体核转录因

13、子，HIF-1含有亚基(HIF-1)和亚基(HIF- 1)。HIF-2与HIF-1在结构上极其相似，也是由诱导表达的亚单位和持续表达的亚单位组成异源二聚体结构。两者的生物活性由亚基决定，表达严格地受细胞氧浓度的调节。在缺氧状态下，HIF-1和HIF-2通过启动下游靶基因（如红细胞生成素、血管内皮生长因子、葡萄糖载体-1、糖酵解酶等）的表达对肿瘤的血管生成、能量代谢、激素代谢等方面产生重要作用3,6，促使恶性肿瘤增殖、浸润和转移。肿瘤适应缺氧的重要途径之一是新生血管的形成7, 而肿瘤新生血管形成与实体瘤的发生、侵袭和转移密切相关，并影响大部分恶性肿瘤的预后。许多研究已表明，HIF-1和HIF-2是VEGF关键的激活因子8,11。最近有研