病毒性肝炎患者血清学测定常见影响因素观察

1、病毒性肝炎患者血清学测定常见影响因素观察 【摘要】 目的 了解温度、时间、抗凝剂、不同试剂、不同仪器等因素对病毒性肝炎患者血清酶的测定的影响 方法 采集病人血清分别比较加抗凝剂、放置不同时间、不同温度保存24 h、不同试剂、不同仪器对测定的影响 结果 采用肝素锂抗凝影响ADA、CH50的测定；室温放置24 h（不分离血清）将影响ADA、CH50的测定；不同厂家试剂将影响结果的一致性。结论 不同保存条件和试剂将影响测定结果。为了使检测结果有较好的一致性，必须制订和执行标准化的操作规程。【关键词】 血清酶测 影响因素 总补体CH50 腺苷脱氨酶ADASome influence factors i

2、n determination of serum enzyme in hepatitis patientsGUO Hongyan（Youan Hospital of Beijing attached to the Capital Medical University，Beijing 100069，China）Abstract Objective To study some factors temperature ，time ，anticoagulant，reagent and apparatus which influence the detection of serum enzymeMeth

3、ods Serums obtained from same patient are determined in different conditionsCompare the statistical difference among each groupResults The anticoagulant- Lithium heparin influence the determination of ADA and CH50If serums were sent in room temperature for 24 hours，the results will be differentUsing

4、 regents from different factories will receive different resultsConclusion Different conditions and reagents will influence resultTo obtain correct data，we must institute and perform standard regulationKey words Determination of serum enzyme；Influence factor；Total complement activity（CH50）；Adenosine

5、 deaminase（ADA）病毒性肝炎是我国常见和多发的传染性疾病，由于其病程较长、不宜治愈的特点，需要反复多次测定多种血液指标，血清酶的测定在病毒性肝炎诊断和治疗中发挥着重要的作用。随着自动化仪器的普及应用，快速准确地测定血清指标成为可能。但由于仪器和试剂厂家众多，其测定结果的一致性值得注意。同时有许多新的检测指标的出现，其测定的影响因素还不什么明了。本研究的目的在于观察实验前因素（抗凝剂、温度、时间）及不同仪器、试剂对测定结果的影响。1材料与方法1.1.1实验对象：实验血清均来自我院住院病人，按照2000年中华医学会传染病与寄生病学分会、肝病学分会联合修订的诊断标准确诊为慢性病毒性乙型肝

6、炎。1.1.2.1 CH50试剂盒为Wako pure chemical industries，ltd 生产。1.1.2.2 ADA试剂盒为北京世诊好克生物技术有限公司生产。1.1.2.3 丙氨酸氨基转移酶（ALT）、-谷氨酰基转移酶（-GT）、胆碱酯酶（CHE）为中生北控生物科技股份有限公司、英国郎道公司、罗氏公司生产。均为干粉试剂。其中ALT（不加吡哆醛磷酸激活剂）、-GT为IFCC推荐方法，CHE为丁酰硫代胆碱法。（4）ALT、-GT、CHE质控为卫生部临检中心提供质控郎道（批号Randox350UN，223UE）；ADA质控为厂家提供（批号ADA02305，18333 u/l）；CH5

7、0质控为厂家提供（Complement L：202 u/ml ，Complement H：464 u/ml）。以上试剂均为市售的试剂盒，随机购买。质控标准为2SD。1.1.3 仪器：全自动生化分析仪Olympus AU640和Roche SWA。1.1.4 一次性采血管为BD公司生产的真空采血管，抗凝管为肝素锂抗凝。1.2 方法1.2.1 实验前因素对ADA及CH50测定的影响1.2.1.1 同一病人空腹采血2份，一份抗凝，一份不抗凝。室温放置30 min血液凝结后3000 rpm离心3 min，立即测定ADA及CH50；同时未抗凝管分离3管血清200 l/管备用。1.2.1.2 国同一标本在

8、室温放置30 min，1 h，2 h，3 h，24 h分别测定ADA及CH50。1.2.1.3 将1中所得3管血清分别在4、室温20、-20保存24 h后测定ADA及CH50。1.2.2 不同仪器、试剂对ALT、-GT、CHE测定的影响同一检测原理三家试剂（中生、郎道、罗氏）检测同一份血清。1.2.3同一试剂（罗氏试剂）、不同仪器（Olympus AU640/Roche SWA）检测同一份血清。1.3 统计学处理2结果表1抗凝剂（肝素锂）对测定的影响A 组和B组测定的ADA及CH50均有显著性差异（p0.05），CHE的D组与A、B、C组相比均有显著性差异（p0.01）。3讨论病毒性肝炎是由多

9、种肝炎病毒引起的常见传染病，具有传染性强、传播途径复杂、流行面广泛，发病率较高等特点，其中血清酶的检测在病毒性肝炎的诊断和治疗中起到重要作用。血清酶测定是临床实验室中一项重要的常规工作，检测结果对疾病的诊断及治疗监测有着很大的参考价值。目前，用于血清酶定量测定的方法以测定酶的活性为主，即酶的催化反应速率。由于酶蛋白本身的生物特点及其对催化反应条件要求的特殊性，使不同实验室的测定结果间存在较大的差异，可比性远不如其他检测项目1。常见的一些非病理因素也会引起实验室测定结果的变化，现分述如下：在实验室测定酶之前，标本还要经过采集、分离血清和贮存等一系列处理过程。血清离开体内后还会发生一定变化，因此在

10、其中任一阶段处理不当，都可能引起测定值的变化。采血中最容易引起实验误差的是抽血不当或急于分离血清造成体外溶血，本实验采用一次性真空采血管，室温放置30 min后3000转/min离心3 min能较好的避免这一现象。另外采血后如不及时将血清与血凝块分离，血细胞中酶同样可以通过细胞进入血清，所以采血后12 h内应该立即分离血清。除了测定与凝血相关的酶，一般不采用血浆而用血清作为测定标本。本研究选定两个新的检测项目，观察抗凝剂以及测定时间，保存条件对测定结果，结果发现常用抗凝剂肝素锂对ADA及CH50的测定均有显著性差异（p0.05），但不分离血清室温放置24h测定结果与其它各组比较有显著性差异（p

11、0.05）。其中ADA测定值明显升高，因为血液中ADA主要存在于红白细胞（淋巴细胞、粒细胞），其含量为血清中4070倍3。室温放置24 h细胞内酶释放到 血清里，测定结果增高。而CH50测定值显著减低可能为补体在体外迅速破坏的缘故。如果分离血清不同温度放置24h各组相比均无显著性差异，所以及时分离血清能确保酶测定的稳定性。3.2不同仪器、不同厂家试剂的影响为使血清酶定量（活性）测定的结果具有可比性，国际临床化学联合会（IFCC）等不同的专业学会先后提出了酶活性定量测定的推荐方法，在很大程度上改进了测定结果的一致性，使血清酶测定向标准化迈进了一大步4。同时自动化分析仪的发展是酶的测定变的快速简便

12、。但由于不同厂家不同试剂和仪器的影响，测定同一标本结果的一致性值得思考。本实验采用了Roche、Olympus不同仪器及罗氏、郎道、中生三家试剂（均为干粉），选择3种酶作为观察指标（1975年德国内科协会提出ALT、-GT和CHE三种酶作为肝脏疾病时的过筛实验。三种酶分别反映肝脏的不同病理过程。ALT的升高往往说明肝实质细胞的损伤；-GT升高说明胆汁淤积和对肝的诱导作用；测定CHE可以检查肝脏的蛋白合成功能5。）结果发现同一试剂（罗氏试剂）在不同仪器Roche、Olympus上无显著性差异；同一仪器（Olympus）不同厂家的ALT、-GT无显著性差异，而中生公司生产的CHE与其他2家试剂相比

13、有显著性差异。因为不同厂家、不同配方的试剂、由于底物的性质及浓度、缓冲物质及pH值、工具酶的来源及浓度、激活剂或抑制剂等因素都能影响酶催化活性，是目前酶活性测定中结果缺乏可比 性的主要原因6。中生公司的CHE试剂中丁酰硫代胆碱为7 mmol/L，2-硝基苯甲酸为0.25 mmol/L，磷酸缓冲液pH7.7为50 mmol/L；郎道公司为丁酰硫代胆碱为6 mmol/L，2-硝基苯甲酸为0.25 mmol/L，磷酸缓冲液pH7.7为50 mmol/L；罗氏公司碘化丁酰硫代胆碱为42.5 mmol/L，2-硝基苯甲酸为0.3 mmol/L，磷酸缓冲液pH7.7为60.7 mmol/L。目前，大多数临

14、床实验室在测定血清酶活性时不用校准品，而是根据仪器系统特性，用给定的系数（K值）计算酶活性。一些学术团体（如国际临床化学联合会，IFCC）也已推出了血清酶活性测定的推荐方法及试剂配方，但众多生产厂家生产的试剂间仍不可避免地存在着差别（如底物浓度，缓冲液组成、pH 及浓度，辅酶纯度及浓度），这些因素在不同程度上影响到用K值计算出的酶活性结果。因此造成不同厂家试剂检测时的差异7。有报道通过使用酶学标准物或参考物使血清酶活性测定标准化，为由仪器、试剂和校准品组成的分析系统提供了准确度溯源的依据，同时，也使由于不同系统间差别造成的测定结果的不一致性得到改善8。综上所述，为了使病毒性肝炎血清酶的检测能得

15、到准确的结果，必须在实验前及检测过程中尽量避免各种干扰因素，同时进行实验室检测的标准化，提高各实验室检测结果的可比性、有利于参考范围的统一，在临床诊断、治疗中发挥更大的作用。【参考文献】 1 李传达，袁平京两种丙氨酸转移酶试剂的对比研究及偏倚评估J中华检验医学杂志，2005，10，1082-10832 杨振华影响酶测定的各种因素J长征通讯，1997，6（3）：23 赵娟，牛达勇腺苷脱氨酶和溶菌酶测定在胸腔积液鉴别诊断中的价值J陕西医学检验，2000，15（4）：55-564 LW，JJMWesterhuis，JCM HafkenscheidApoenzyme content of serum aminotransferases in relation to plasma pyridoxal-5-phosphate concentrationClinchem，1983，29：7895 临床生物化学和生物化学检验M第二版，北京：人民卫生出版社，1696 National committee for clini