蛋白结合率相关知识

1、蛋白结合率相关知识Prepared on 22 November 2020蛋白结合率相关知识血浆蛋口结合率：药物与血浆蛋口结合的程度，即血液中与 蛋白结合的药物占总药量的百分数。血浆蛋口结合率为可逆性疏松结合，结合型药物分子量增大，不 能跨膜转运、代谢和排泄，并暂时失去药理活性，某些药物可在 血浆蛋口结合部位上发生竞争排挤现象。药物分子与血浆蛋口结 合的特点（和药物与受体萤口结合情况相似）：具有饱和性与可 逆性、结合物无活性、有竞争置换现象。药物进入循环后，有两种形式:结合型药物：药物与血浆蛋口结合。特点:（1）暂时失去药理活性。（2）体积增大，不易通过血管壁，暂时“储存”于血液中。意义.结合

2、型药物起着类似药库的作用。药物进入相应组织 后也与组织蛋口发生结合，也起到药库作用，影响药物作用和作 用维持时间长短，一般蛋白结合率高的药物体内消除慢，作用维 持时间长。游离型药物：未被血浆蛋口结合的药物。特点：能透过生物膜，进入到相应的组织或靶器官，产生效 应或进行代谢与排泄。药物与血浆蛋白结合方式:酸性药物与口蛋0结合：华法林.、磺胺类药物主要与血浆 口蛋口结合，三环类抗抑郁药、氯丙嗪也与口蛋白结合。碱性药物与al-糖蛋口结合，B-糖蛋白和虽然量比口蛋口少 很多，但在癌症.关节炎.心肌梗死等疾病中可增高，能与奎宁 结合。特点:(1)可逆性药物与血浆蛋口的结合是可逆的，极少数是共价结合(如烷

3、药物在血液中转运时，结合型与游离型药物快速达到动态平 衡。游离型药物f透过生物膜f血液中游离型药物浓度降低f结 合型药物，释岀游离型药物。(2)饱和性血浆中蛋口有一定的量，与药物的结合有限，因此，药物与 血浆蛋口结合具有饱和性。当药物浓度大于血浆蛋口结合能力时f饱和f游离型药物急 剧增加f毒性反应。某些病理情况下，血浆蛋口过少(如肝硬化.慢性肾炎)、 变质(如尿毒症)f药物与血浆蛋白结合减少f毒性反应。有些 药物在老年人中呈现较强的药理效应，与老年人的血浆蛋口减少 有关。(3) 竞争性两种药物f竞争结合同一蛋口f置换f游离型药物浓度增加 f导致中毒。如：保泰松f结合型双香豆素f游离型f浓度增加

4、f出血倾 向。与内源性代谢物竞争与血浆蛋口结合，如磺胺药f置换胆红 素一新生儿核黄疸症。此外，注射口蛋口可与药物结合而影响疗效。血浆蛋白与药物结合时，血浆蛋白在体内的各种作用暂时消失, 但是与药物分离之后，血浆蛋白各种性质基本不变，继续发挥原 来的作用。血浆蛋白结合率的测定测定磺胺陀唳钠在不同动物体内的血浆蛋口结合率。2、实验原理将蛋口置于一个隔室内，用半透膜将此隔室与另一隔室隔开。蛋口等大分子不能通过此半透膜，但系统中游离配基可自由通过。当达到平衡时半透膜两侧自由配基的浓度相等。若系统中自由配基 的总量己知，测定不含蛋口隔室中自由配基的浓度，即可推算与蛋 口结合的配基量。具有游离氨基的磺胺药

5、在酸性介质中与亚硝酸发生重氮化反应 后，可与厂（1蔡基）乙二胺产生偶合反应生成紫红色偶氮染料，与经过同样处理的磺胺药标准液比较，用721分光光度计比色法测出 组织中和不同时间的血液中磺胺陀噪浓度。由于亚硝酸不稳定，在实验中，用三氯醋酸与亚硝酸钠反应制 的得。剩余的过量亚硝酸影响测定，用氨基磺酸胺分解除去。3、实验材料 1、实验动物兔子一只。2、设备与器械712分光光度计、管状半透膜（周长5cnb长约12cm）、丝线、广口瓶、移液器。3、药物与试剂 10%磺胺喀唏钠注射液15%三氯醋酸溶液%亚硝酸钠溶液%氨基磺酸胺溶液%二盐酸N- （1蔡基）-乙二胺溶液磺胺陀唏钠贮存标准液磺胺陀噪钠应用标准液4

6、、试验方法1、试剂的制备%二盐酸N-（1蔡基）-乙二胺溶液：溶于95%乙醇约400Q1L 中，再用乙醇稀释至500ml,棕色瓶于冰箱中保存透析液（PBS）：的磷酸盐缓冲液，内含磺胺咗噪钠应用标准液：10%磺胺喀噪钠注射液U1溶于约80ml3%三氯醋酸溶液再定容于100ml容量瓶中备用 2、血浆制备兔心脏米血，肝素抗凝，以3000rpm离心lOmin,取上清液即 为血浆。3s透析将管状半透膜一端折為，用纱线扎紧，保留结扎线段lOcDl左 右，以调节袋内外液而在同一水平，加血浆样品于上述半透膜袋 内，并扎紧口袋另一端，袋口不得污染血浆。将两端扎紧的半透膜 置于盛有透析液的30ml广口瓶中，用袋两端

7、线段调节袋内外液面, 加ml的磺胺喀噪钠溶液于各瓶袋外透析液中。置广口瓶于冰箱中, 平衡透析约60h左右。吸出袋外透析液少许，加等量磺基水杨酸试 剂，无浑浊，说明无血浆蛋口漏出。取出半透膜，用滤纸吸干袋外 壁透析液，小心解开透析袋，使袋内血浆流入干净试管。4、用重氮化-偶合比色法测定袋内外溶液中磺胺药浓度。取袋内外溶液各，加水；加15%三氯醋酸4inl,混匀，静置2min过滤，取试管3支，各加入滤液5mL,为测定管；取试管3支，加入空口对照液5mL,为空口管；取试管3支，加入应用标准 液5mL,为标准管，在以上各管中各加入%亚硝酸钠溶液，混匀，放.置3mim各加入%氨基磺酸胺溶液，混匀，放置2

8、min各加入%二盐 酸（1蔡基）-乙二胺溶液，充分混匀，放置lOmin,用721分光 光度计在550nm波长处比色：以空口管校正光密度到0点，读取标 准管和测定管光密度，并用公式计算:测定管光密度游离磺胺药含量（mg%）=X应用标准液浓度X样品稀释倍数 标准管光密度5. 计算血浆蛋口结合率。Dt-Dffb=XlOO%Dtfb：血浆蛋口结合率;Dt：血药总浓度（透析袋内血浆药物浓度）；Df：游离药物浓度（透析袋外缓冲液中药物浓度）五.实验结果表一：标准管和测定管光密度的测定结果样一样二样三平均值 透析袋外透析袋内标准液游离磺胺药含量的计算 计算得：透析袋内药物浓度=inl透析袋外药物浓度二Dll3s药物血浆蛋口结合率的计算结果:兔J fb=%六、结果讨论与总结1、分光光度计的使用操作。rti于应该使用一套比色杯来测定吸光度，而在实际操作中比色杯使用混乱，而且并没有做到严格的润洗，所以吸光度的测量存在较大 的误差。分光光度计的使用应该注意的事项:（1）为了防止光电管疲劳。不测定时必须将比色皿暗箱盖打开，使光路切断，以延长光电管使用寿命。（2）拿比色皿时，手指只能捏住比色JIIL的毛玻璃面，不要碰比色川L的透光而，以免沾污。（3）清洗比色川L时，一般先用水冲洗，再用蒸饰水洗净。每次做完实验时，应立即洗净比