细菌鞭毛染色及运动性观察

1、 细菌鞭毛染色及运动性观察郭森 200900140029 09级生命基地 周二下午摘要：本实验以苏云金芽孢杆菌和假单胞菌为实验菌种，分别将其制备成菌液并制片。而后，使用鞭毛染色法（用硝酸银染液A液和B液进行染色）对其染色，之后用光学显微镜的油镜观察细菌鞭毛的形态；使用压滴法并用美兰染色后，之后用光学显微镜的高倍镜观察细菌的活体运动。实验结果我们并没有观察到鞭毛结构，但在实验中已大致掌握相关实验操作。关键词：苏云金芽孢杆菌；假单胞菌；鞭毛染色法；压滴法前言：鞭毛是细胞的纤细丝状运动“器官”。鞭毛的有无、数量及着生方式也是细菌分类的重要指标。鞭毛直径一般为1030nm，只有用电镜才能观察到。若要用

2、普通光学显微镜观察，必须使用鞭毛染色法。因此在本实验中，要观察细菌鞭毛形态，就要使用鞭毛染色法。本实验使用染液的是硝酸银染液A液和B液；而观察细菌的运动性时要使用压滴法就要用美兰染色。本实验选用的的菌种是具周生鞭毛的苏云金芽孢杆菌和具端生鞭毛的的假单胞菌，均可使用两种方法进行观察。本实验报告先介绍了本次实验的实验材料与方法，然后是对实验的结果与分析进行描述，最后是总结性的小结部分。1 材料与方法1、1 材料1、1、1 菌种苏云金芽孢杆菌，假单胞菌。1、1、2 溶液和试剂硝酸银鞭毛染液（A、B液），0.01%美兰水溶液。1、1、3 仪器和其他用品普通光学显微镜，擦镜纸，酒精灯，载玻片，双层瓶（内

3、装香柏油和二甲苯），接种环，试管架，镊子，吸水纸，滴管等。1、2 步骤和方法1、2、1 菌液制备无菌操作用接种环由普通变形菌1418h牛肉膏蛋白胨半固体新鲜培养物平板上挑取数环菌落边缘菌体，悬浮于12ml无菌水中制成轻度浑浊的菌悬液，不能剧烈震荡。1、2、2 鞭毛染色1、2、2、1 制片取一滴菌悬液滴到洁净载玻片一端，倾斜玻片，使菌悬液缓慢流向另一端，用吸水纸吸去多余菌悬液，自然干燥。1、2、2、2 染色滴加硝酸银染液A液覆盖菌面35min后用蒸馏水充分洗去A液。用硝酸银染液B液洗去残留水分后，再滴加B液覆盖菌面数秒至1min，其间可用微火加热，当菌面出现明显褐色时，立即用蒸馏水冲洗，自然干燥

4、。1、2、2、3 镜检使用光学显微镜中的油镜镜检1、2、3 压滴法1、2、3、1 制片取一滴菌悬液滴到洁净载玻片中央，取一洁净盖玻片让其一端紧靠液滴的一端缓慢放下，避免产生气泡。1、2、3、2 染色取一滴美兰水溶液，滴到盖玻片一端，倾斜玻片，并用吸水纸在盖玻片另一端吸引美兰水溶液使之对菌体染色充分，最后用吸水纸吸去多余水分。1、2、3、3镜检使用光学显微镜中的高倍镜进行镜检2 结果与分析2、1 实验结果在对我制作的两个鞭毛染色的玻片进行观察时，我并没有发现鞭毛结构；而使用压滴法进行观察时，也没有观察到假单胞菌的运动。（见图1图3）图 1 鞭毛染色后苏云金芽孢杆菌显微观察图（10x100）图2鞭

5、毛染色后铜绿假单胞杆菌显微观察图（10x100）图3 压滴法观察铜绿假单胞杆菌显微观察图（10x40）2、2 结果分析根据实验结果，首先，苏云金芽孢杆菌结构呈细长状，多为链型，假单胞菌为椭圆状，多单个分布。然后，鞭毛染色失败的原因主要有以下几点：一、在配制菌液时，为了使其混合均匀，震荡用力过大，冲洗时水流也比较大，导致鞭毛脱落；二、对于硝酸银染液B液，我并没有很好的控制时间，基本上都超时了。对于压滴法，可能是因为美兰使用过多加上没有在第一时间进行观察，所以导致假单胞菌死亡，导致制片失败。因此，本次实验现象表明，在实验中应当多注意操作的规范性，注意操作细节。3 小结本次实验要求我们使用鞭毛染色法

6、和压滴法对细菌的鞭毛形态和其运动性进行观察。因此在实验中我们首先接触到了鞭毛染色法和压滴法，因此经过实验后对其大致操作基本上已经了解。但是在实验中还有很多需要注意的地方，并且我对实验结果不满意，这其中也有很多的原因。首先，本实验中的注意事项：（1） 选用活跃生长期菌种进行鞭毛染色，老龄菌鞭毛易脱落。（2） 载玻片必须清洁、光滑、无油迹，否则菌液不能散开，造成菌体堆积，鞭毛相互纠缠而难以看清，而且染色后背景脏乱。（3） 制片过程中条件要温和，不能剧烈震荡、涂抹菌液，也不能采用加热法进行固定，否则鞭毛易脱落。（4） 按要求配制合格的染液。（5） 硝酸银染液B液染色时间的掌握是本实验能否成功的关键环节。然后，在本实验中，我做的染色结果并不让我满意，因为菌体中鞭毛大都已脱落，而且染色后观察菌体并不很清楚。在实验中，我有很多不足，首先是我的载玻片上油迹比较多，而我多次进行清洁后效果可能仍然不佳，这可能是观察不清楚的原因；然后，我在配制菌液时用力幅度可能过大，导致菌液震荡比较厉害，因此可能会导致鞭毛的脱落；最后，我在进行硝酸银B液染色时同时对上一个玻片进行观察，在时间上染色时间应该过长，这可能是导致实验不大成功的关键原因。因此，在本实验中以上方面我都需要改进。另外，除了使