高效薄层扫描法测定蛛网膜下腔出血患者脑脊液中血小板活化因子

1、高效薄层扫描法测定蛛网膜下腔出血患者脑脊液中血小板活化因子王 荣 张新江 胡晓丽 赵兴红兰州军区后勤部药物研究所 甘肃兰州 兰州军区总医院 甘肃兰州兰州军区医学高等专科学校 甘肃兰州摘要 建立了测定蛛网膜下腔出血患者 脑脊液中血小板活化因子 质量浓度的高效薄层扫描方法薄层板为高效硅胶 板 展开剂为 氯仿 Ú 甲醇 Ú 水 Ú Ú 下层液展开 显色剂为 Ù 磷钼酸溶液 展开距 扫描波长 方法的线性范围 Ù 相关系数 最小检测质量浓度 Ù 平均回收率 运用所建立的方法测定了 例 患者发病后脑脊液和 例非神经系统疾病患者脑脊液中

2、的质量浓度及其变化规律 为临床提供了诊断依据关键词 高效薄层扫描法 血小板活化因子 蛛网膜出血患者 的脑脊液中图分类号 文献标识码 文章编号前言血小板活化因子 是一种脂类介质它是 年由 等 研究兔过敏反应过程中发现的后来 等 研究兔的脊髓缺血组织发现 缺血神经组织的 水平比正常的高 倍 中枢神经组织尤其是缺血的神经组织亦可产生大量的 因此 与脑缺血之间的关系越来越受到重视 但测定脑脊液中 的方法未见文献报道本文建立了一种特异 灵敏 准确测定蛛网膜下腔出血 患者脑脊液中 质量浓度的方法 有助于阐明脑缺血的某些病理机制 为其防治提供了新的依据 测定得到了满意的结果材料和方法仪器及试药岛津 型薄层扫

3、描仪 岛津 型积分仪标准对照品 购自美国 公司 高效硅胶 板 青岛海洋化工厂 其余试剂均为分析纯 色谱条件高效硅胶 板 展开剂 氯仿 Ú 甲醇 Ú 水 Ú Ú 摇匀放置过夜 用下层液展开 显色剂 Ù 磷钼酸溶液 展开距 扫描波长 点样 样品处理蛛网膜下腔出血组 例 男 例 女 例 蛛网膜下腔出血 发病患者 诊断符合 年全国脑血管会议标准 均经头颅 扫描证实 发病后 天腰穿采集脑脊液 将采集的脑脊液立即离心 取上清液 加入甲醇 振摇 再次离心离心后加入氯仿 和水 充分振摇 离心分出氯仿相 下保存对照组 例 男 例 女 例 为同期住院手术的非神经系

4、统疾病患者 无心 脑 肾 肺部疾病腰麻时收集脑脊液 脑脊液处理的方法同上薄层展开时 将真空抽干保存于 下的样品标本用氯仿溶解 容量瓶定容结果展开在上述色谱条件下点样 薄层展开图及薄层扫描图见图 图 中 依次为 标准对照品 对照组 蛛网膜下腔出血 发病患者脑脊液展开行为良好 斑点边缘清晰 无拖尾现象标准曲线在同一块高效板上用 标准对照品点样 个点 使其质量浓度为 Ù 展开剂展开后显色 扫描 测定斑点峰面积 求得回归方程为 为峰面积 为点样的质量浓度 相关系数 测得的最小质量浓度为 Ù 方法精密度及回收率在同一块高效板上 点一定质量浓度的 标第 卷第 期色 谱 年 月 收稿日期

5、 修回日期 图 标准对照品 对照组 和患者脑脊液 色谱图 - - - 脑脊液薄层展开图 脑脊液薄层扫描图准对照品 共 个点 按上述方法展开 显色 扫描每隔 依法在不同板上点样 测定日内结果见表 同时连续 天依法在不同板上点样 测定日间误差见表 回收率是在同一块高效板上分别点上一定量的发病组脑脊液 发病组脑脊液加标准对照品 标准对照品 点两个剂量的不同点 共 个点 按上述方法展开 显色 扫描 计算 的量 测得回收率为 结果见表 该方法精密度好 日内误差为 日间误差为 表 测定方法的精密度和回收率 质量浓度 Ù日 内日 间回收率平均稳定性试验稳定性试验包括两部分 一部分是 从脑脊液中提取

6、后在冰箱中 冷冻保存不同时间的稳定性 另一部分是 配制成氯仿溶液后在室温下放置不同时间的稳定性提取后用氮气吹干 样品置于 冰箱中存放 分别于 天取出按试验方法测定 份 表明 样品在 下至少可保存一个月将上述保存于 冰箱中的脑脊液配置成氯仿溶液 容量瓶密封放置于室温 分别于立即 天 天点样 说明配制成氯仿的 溶液密封存放于室温下 天内仍很稳定样品脑脊液中的测定按上述方法测定了 例蛛网膜下腔出血患者的脑脊液及 例对照组脑脊液中的 质量浓度 见表 例蛛网膜下腔出血患者的脑脊液中 变化规律见图 表 蛛网膜出血患者及对照组脑脊液中定量分析结果 编号测定组质量浓度 Ù 对照组 未检出 图 例患者

7、脑脊液中质量浓度的变化 讨论半衰期短 仅为 不宜捕获 且正常人的脑脊液中不存在 本文采用高效薄层色谱法 抽取脑脊液后立即用甲醇除去蛋白 破坏乙酰水解酶的活性 直接测定 患者发病后脑脊液中的 防止 失活 提高了灵敏度所建立的方法可一次测定多个脑脊液样品 回收率及灵敏度均较高 重复性好 比 或 法价廉同时发现 对酸 温度较稳定 多次用磷钼酸显色 加热至 并不影响 的活性 与 等 报道第 期 王 荣等 高效薄层扫描法测定蛛网膜下腔出血患者脑脊液中血小板活化因子的结果相符是目前发现的最强的促血小板聚集物 后极易并发脑血管痉挛 引起脑缺血研究表明 可引起血脑屏障破坏 脑血管收缩 此外 可通过促使颗粒白细胞释放白三烯等活性物质间接引起脑血管痉挛 使脑血流量减少 故而推测 与 后脑血管痉挛有关通过对 例 患者发病后 天脑脊液中的 测定并与 例非神经系统疾病患者进行了比较发现 对照组脑脊液中 均为阴性 由于 不能通过血脑屏障 所以正常人脑脊液中不含有 及其乙酰水解酶而发病组在不同时期内的 质量浓度呈现不同的趋势初步证明 后脑脊液中 的质量浓度明显增加 发病后第二周最明显 说明可能参与了脑血管痉挛 脑缺血的发病过程也可预测 患者易在第二周内发病 与临床实际脑血管痉挛发病在 的第二