糖的呈色反应和还原糖的检验

1、实用标准文案精彩文档实验 1 糖的呈色反应和还原糖的检验、实验目的1.学习鉴定糖类及区分酮糖和醛糖的方法。2.了解鉴定还原糖的方法及其原理。、实验原理糖经浓无机酸处理， 脱水产生糠醛或糠醛衍生物。戊糖形成糠醛，己糖则形成羟甲基糠醛。HCCH 0 II拶u H这些糠醛和糖醛衍生物在浓无机酸作用下，能与酚类化合物缩合生成有色物质。与一元酚如a萘酚作用，形成三芳香环甲基有色物质。与多元酚如间苯二酚作用，则形成氧杂蒽 有色物质，反应式如下：H。耗 2 叶咆ii玻H2SO4I */C = CHR =O |、厂tMCH.OH通常使用的无机酸为硫酸。如用盐酸，则必须加热。常用的酚类为a萘酚、甲基苯二 酚、间

2、苯二酚和间苯三酚等，有时也用芳香胺、胆酸、某些吲哚衍生物和一些嘧啶类化合物 等。有人认为，用浓硫酸作为脱水剂时，形成有颜色的产物与酚核的磺化有关，见如下反 应式;C-CHH H:R-CH实用标准文案精彩文档UHOF1（一）糖的呈色反应1.Molish反应（a萘酚反应）本实验是鉴定糖类最常用的颜色反应。糖在浓酸作用下形成的糠醛及其衍生物与a萘酚作用，形成红紫色复合物。在糖溶液与浓硫酸两液面间出现紫环，因此又称 紫环反应。自由存在和结合存在的糖均呈阳性反应。此外，各种糠醛衍生物、葡萄糖 醛酸、丙酮、甲酸、乳酸等皆呈颜色近似的阳性反应。因此，阴性反应证明没有糖类 物质的存在；而阳性反应，则说明有糖存

3、在的可能性，需要进一步通过其他糖的定性 试验才能确定有糖的存在。2.蒽酮反应糖经浓酸水解，脱水生成的糠醛及其衍生物与蒽酮（10一酮一9,10二氢蒽）反应生成蓝一绿色复合物。3.Seliwanof反应（间苯二酚反应）该反应是鉴定酮糖的特殊反应。在酸作用下，己酮糖脱水生成羟甲基糠醛。后者与间苯二酚结合生成鲜红色的化合物，反应迅速，仅需2030s。在同样条件下，醛糖形成羟甲基糠醛较慢。只有糖浓度较高时或需要较长时间的煮沸，才给出微弱的阳 性反应。蔗糖被盐酸水解生成的果糖也能给出阳性反应。4.Bial反应（甲基间苯二酚反应）戊糖与浓盐酸加热形成糠醛，在有Fe3+存在下，它与甲基间苯二酚（地衣酚）缩合，

4、形成深蓝色的沉淀物。此沉淀物溶于正丁醇。己糖也能发生反应，但产生灰绿色甚至 棕色的沉淀物。（二）还原糖的鉴定含有自由醛基（一CHO）或酮基（C=O）的单糖和二糖为还原糖。在碱性溶液中，还原糖能将金属离子（铜、铋、汞、银等）还原，糖本身被氧化成酸类化合物，此性质实用标准文案精彩文档常用于检验糖的还原性，并且常成为测定还原糖含量的各种方法的依据。1.Fehling反应费林试剂是含有硫酸铜与酒石酸钾钠的氢氧化钠溶液。硫酸铜与碱溶液混合加热, 则生成黑色的氧化铜沉淀。若同时有还原糖存在，则产生黄色或砖红色的氧化亚铜沉 淀。上述反应可用下列方程式表示：CHOCOONaII(CHOH(4 2Cu(OH)t

5、+NftOH-(CH0H*4 2CuOH + 2H5OtICH;OHCHjOH2 CuOli Cu3O；+H:0不稻定 氧比亚铜(黄色和红色)在碱性条件下，糖不仅发生烯醇化、异构化等作用。也能发生糖分子的分解、氧化、还原或 多聚作用等。由这些作用所形成的复杂混合物具有强烈的还原作用，因此企图用简单的氧化还原作用来写出反应平衡式是不可能的。为了防止铜离子和碱反应生成氢氧化铜或碱性碳酸铜沉淀，Fehling试剂中加入酒石酸钾钠，它与Cu2+形成的酒石酸钾钠络合铜离子是可溶性的络离子，该反应是可逆的。平衡 后溶液内保持一定浓度的氢氧化铜。费林试剂是一种弱的氧化剂，它不与酮和芳香醛发生反应。CuSO4

6、+ 2NuOM-Cu(OM 4 NiijSO.HC C 0 NnCu+2HjOHC-C-O-K洒石战钾钠錯合铜离子2.Ben edict反应Benedict试剂是Fehling试剂的改良。它利用柠檬酸作为Cu2+的络合剂，其碱性比Fehli ng试剂弱，灵敏度高，干扰因素少，因而在实际应用中有更多的优点。3.Barfoed反应COONii I HC-OHCU(OH)2+HC OHICOOK实用标准文案精彩文档该反应的特点是在酸性条件下进行还原作用。在酸性溶液中，单糖和还原二糖的还原速度有明显差异。单糖在3min内就能还原Cu2+而还原二糖则需20min。所以，该反应可用于区别单糖和还原二糖。当

7、加热时间过长，非还原性二糖被水解也能呈现阳性反应， 如蔗糖在10 min内水解而发生反应。还原二糖浓度过高时，也会很快呈现阳性反应，若 样品中含有少量氯化钠也会干扰此反应。三、实验试剂和材料仪器1.测试糖液2%阿拉伯糖，葡萄糖，果糖，麦芽糖，蔗糖，1%淀粉溶液和2种未知糖液。2.试剂1Molish氏试剂称取a萘酚2克，溶于95%乙醇中并定容到100ml。注意临用前，新鲜配制，贮于棕色瓶中。2蒽酮(Anthrone)试剂溶解0.2g蒽酮于100mL浓硫酸(A.R.，比重1.84，含量95%)中。当日配制、使用。3Fehli ng氏试剂试剂A:将34.5g硫酸铜(CuSO45H20)溶于500ml

8、。蒸馏水中。试剂B:将125g氢氧化钠和137g酒石酸钾钠溶于500mL蒸馏水中，储于带橡皮塞瓶中。临用时，将试剂A和B等量混合。4Ben edict氏试剂溶解85g柠檬酸钠(Na3C6HO,HH20)及50g无水碳酸钠于400ml。水中；另溶8.5g硫酸铜于50mL。热水中。将硫酸铜溶液缓缓倾人柠檬酸钠一碳酸钠溶液中，边加边搅，如有沉淀，可过滤本试剂可长期使用。如放置过久，出现沉淀可取用其上清液。5Bial氏试剂溶解1.5g地衣酚(orcin01)于500mL，浓盐酸并加2030滴10%三氯化铁溶液。6Seliwa noff氏试剂实用标准文案精彩文档溶解50mg问苯二酚(resorcin01

9、)于100rnl.盐酸(盐酸：水=1:2V/V)中。临用前配制。盐酸浓度不宜超过12%，否则，它将导致糖形成糠醛或其衍生物。7浓硫酸。3.器材试管，试管架，煤气灯和沸水浴等。四、实验方法（一）糖的呈色反应1.Molish反应取8支已标号的试管，分别加入各种测试糖液lmL（约15滴），再各加入Molish试剂2滴，摇匀。逐一将试管倾斜，分别沿管壁慢慢加入浓硫酸I mL,然后，小心竖直试管，使糖液和硫酸清楚地分为两层，观察交界处颜色变化。如几分钟内无呈色反应，可在热水浴中温热几分钟。记录各管出现的颜色，说明原因，检定未知糖液。2.蒽酮反应取8支标号的试管，分别加入ImL蒽酮溶液，再将测试糖液分别滴

10、加到各试管内，混匀，观察颜色变化，鉴定未知糖液。3.Seliwanof反应取试管8支，编号，各加人Seliwanoff试剂ImL。再依次分别加入测试糖液各4滴， 混匀，同时放人沸水浴中，比较各管颜色变化及出现颜色的先后顺序，分析说明原因。注意蔗糖的反应。4.bial反应将2滴测试糖液加到装有1ml Bial试剂的试管中，沸水浴中加热，观察颜色变化.如遇到未知糖呈色不明显，可以3倍体积水稀释，并加入1ml戊醇,摇动，醇液呈蓝色，即为阳 性反应。（二）还原糖的鉴定1.Fehling反应取8支试管，各加Fehling试剂A和B各lmL。摇匀后，分别加人测试糖液各4滴，沸水浴煮23min，取出冷却，观

11、察沉淀和颜色的变化。2. Ben edict反应于8支试管中先各加入Ben edict试剂2ml,再分别加入测试糖各4滴，沸水浴中煮2-3mi n,冷却后，观察颜色变化实用标准文案精彩文档3. barfoed反应分别加入测试糖液2-3滴到含有1ml Barfoed试剂的试管中，煮沸约3min,放置20min以上，比较各管颜色变化及红色出现的先后顺序.五、注意事项1. Molisch反应非常灵敏，0 .001%葡萄糖和0 .0001%蔗糖即能呈现阳性反应。 因此， 不可使碎纸屑或滤纸毛混入样品中。 过浓的果糖溶液，由于硫酸对它的焦化作用， 将呈现 红色及褐色而不呈紫色。需稀释糖溶液后重做。2.果

12、糖在Seliwanof。试剂中反应十分迅速，呈鲜红色，而葡萄糖所需时间长，且只能产生黄色至淡红色。戊糖亦与Seliwa noff试剂反应，戊糖经酸脱水生成糠醛，与间苯二酚缩合。生成绿色到蓝色产物。3.酮基本身并没有还原性，只有在变为烯醇式后，才显示还原作用。4.糖的还原作用生成氧化亚铜沉淀的颜色决定于颗粒的大小，Cu20颗粒的大小又决定于反应速度。反应速度快时，生成的CU2O颗粒较小，呈黄绿色；反应慢时，生成的CU2O颗粒较大，呈红色。有保护胶体存在时，常生成黄色沉淀。实际生成的沉淀含有大小不同的CU2O颗粒，因而每次观察到颜色可能略有不同。溶液中还原糖的浓度可以从生成沉淀的多 少来估计，而不能依据沉淀的颜色来区别。5. Barfoed反应产生的Cu2O沉淀聚集在试管底部，溶液仍为深蓝色。应注意观察试管底 部红色的出现，它与