虫草素检测含量的影响因素研究进展

1、 虫草素检测含量的影响因素研究进展作者:郭宇森, 王雅玲, 赵轶男, 马堃, GUO Yu-sen, WANG Ya-ling, ZHAO Yi-nan, MA Kun作者单位:大连民族学院生命科学学院,辽宁,大连,116600刊名: 广西农业生物科学英文刊名:JOURNAL OF GUANGXI AGRICULTURAL AND BIOLOGICAL SCIENCE年,卷(期:2008,27(z1引用次数:0次参考文献(14条2005(613.夏敏反相高效液相色谱法测定蛹虫草中虫草素的含量期刊论文-淮阴工学院学报 2004(3相似文献(10条1.期刊论文祁波蛹虫草虫草素和虫草多糖综合提取工艺

2、的研究-科技信息2009(20科学2009,37(8究为蛹虫草固体培养基的深加工和再利用以及开发新的虫草素资源提供理论依据和技术指导.3.学位论文许晓炜蛹虫草固体培养基中虫草多糖、虫草素提取分离工艺研究2006固体培养方式目前已被广泛用于蛹虫草的培养,蛹虫草固体培养基中富含菌丝,但因没有成熟的工艺对其中的有效成份进行提取分离,目前在培养结束后固体培养基都被作为废物弃掉,不仅造成资源的浪费,对环境也造成一定的影响.随着蛹虫草培养产业规模的不断扩大,对蛹虫草固体培养基如何加工、利用已成为一个迫切需要解决的问题. 本文根据蛹虫草固体培养基有效成份的理化性质,以蛹虫草固体培养基为原料,对影响有效成份提

3、取的工艺条件进行了研究,通过对提取温度、提取次数、提取时间、料液比应用正交实验设计,最终确定用水80提取三次,120min/次,料液比为1:15的工艺条件为虫草多糖最佳提取工艺条件,并分别采用Sevage法、改良的Sevage法和澄清剂法去除虫草多糖粗品中蛋白,以及DEAE纤维素和葡聚糖凝胶柱层析对虫草多糖进行分离纯化.通过对溶剂浓度、提取次数、提取时间、料液比进行正交实验设计,最终确定用75乙醇超声波提取三次,40min/次,料液比为1:20的工艺条件为虫草素最佳提取工艺条件,并分别采用阴、阳离子交换树脂柱层析和硅胶柱层析对虫草素进行分离纯化.通过采用苯酚一硫酸法和HPLC对提取出的虫草多糖

4、和虫草素进行含量测定,确定了不同纯化方法之间的差异. 对虫草多糖和虫草素提取的工艺条件和路线进行分析,结合生产实际,在小试确定的提取、纯化方法基础上进行以蛹虫草固体培养基为原料提取虫草多糖和虫草素的放大实验,确定了综合提取的工艺条件和路线,即采用热水回流提取法进行初提,用醇沉法分离虫草多糖并以Sevage法除蛋白;以乙醚萃取,用阴离子交换树脂层析法分离、纯化虫草素的工艺路线.经测定,除蛋白后的虫草多糖的纯度均大于50,虫草素精品的纯度均大于97. 本课题来源于生产实际,研究结论为相关企业对蛹虫草固体培养基的加工、利用提供了技术依据.本文用采用不同的碳氮源(玉米淀粉、大米粉、奶粉、豆饼粉组合的培

5、养基,液体发酵蛹虫草,以及不同的氮源固体栽培蛹虫草,采用高效液相色谱法检测菌丝体、子实体、以及不同氮源固体栽培后的培养基残基中腺苷和虫草素的含量。结果表明,在所设定的色谱条件下,腺苷和虫草素可以得到很好的分离,R>1.5,并且在一定浓度范围内具有良好的线性关系;蛹虫草人工固、液体发酵菌丝体以及子实体和残基中都含有含有腺苷和虫草素,且虫草素含量高于腺苷的含量。液体发酵时,玉米淀粉和奶粉组合的培养基发酵蛹虫草所得虫草素和腺苷最高,含量分别可以达到3.229mg·g<'-1>和1.902mg·g-1。在所有组合中用玉米淀粉和奶粉的培养基发酵培养蛹虫草,可

6、以获得最大的生物量,其转化率分高达75.73%。固体栽培时,蛋白胨和麸皮是很理想的氮源,子实体中腺苷和虫草素的含量分别高达1.593mg·g<'-1>和9.171mg·g<'-1>,1.980mg·g<'-1>和8.932mg·g<'-1>。WENG Liang.YU Lian-huai.WANG Shuai.SHEN Fang.JIANG Hong以虫草素和腺苷含量为指标优化蛹虫草人工栽培-江苏农业学报2005,21(4为提高人工栽培蛹虫草中主要活性成分的含量,以虫草素和腺

7、苷含量为检测指标进行蛹虫草优化栽培研究,在采用Cm-1菌株、以20%豆粕为氮源、水料比为1.4的条件下,可获得子实体产量为每瓶42.2 g、子实体中虫草素含量为 4.46 mg·g-1的栽培效果,虫草素含量超过了以蚕蛹为寄主的蛹虫草(2.83 mg·g-1,表明植物蛋白完全可以用作栽培蛹虫草的氮源,同时证实采收子实体后的培养基中仍含有大量虫草素,可作为提取虫草素的原料.6.学位论文毛先兵深层培养药用蕈菌蛹虫草生产虫草素的研究2004蛹虫草(Cordyceps militaris是我国传统的名贵药用蕈菌(medicinal mushroom,现代医学研究表明虫草素(cordy

8、cepin是其重要的生物活性成分,大规模深层培养蛹虫草生产虫草素具有重要的应用价值.本论文首先通过摇瓶培养,优化了深层培养蛹虫草生产虫草素的碳源和氮源,实验结果表明,葡萄糖和蛋白胨最有利于虫草素合成.进一步通过中心组合设计和响应面分析,优化了碳氮比.结果在优化的培养基(葡萄糖和蛋白胨浓度分别为42.0 g/L和15.8 g/L中,虫草素产量达到345.4±8.5 mg/L,比对照提高了35%.本论文详细研究了氧供应对蛹虫草细胞生长和虫草素生产的影响,揭示氧供应是蛹虫草生产虫草素培养过程的一个重要因子.本研究所获得的结论有利于大规模培养蛹虫草高效率生产虫草素,所提出的NH<,4&

9、gt;<'+>补加策略、低培养液pH环境的重要性以及两阶段DO控制策略可能对其它蕈菌的深层培养具有借鉴作用.ZHONG Yun-jun用蛹虫草固体发酵法高效生产虫草素的研究-中国中药杂志2008,33(19目的:研究并建立用蛹虫草固体发酵方式高效生产虫草素的最佳方法.方法:通过对不同菌株在固体发酵过程中各生长期的虫草素含量变化进行跟踪测定以及正交旋转组合设计、正交试验设计等方法埘影响虫草素产量和含量的各影响因子(包括菌种、生长期、培养基配方和环境条件等进行系统优化.结果:JF-1是虫草素生产的最佳菌株,现蕾期是收获提取虫草素的最佳时期;最佳的培养基配方为水料比1.1:1(m

10、L·g-1,营养水中酵母膏、蛋白胨、葡萄糖的用量分别为22.6,6.0,25.4 g·L-1,营养水pH 6.6;最佳的环境条件为:光照强度4 400 lx,每日光照时间18 h,温度1822.结论:用以上方法固体发酵生产虫草素,经过约13 d的培养,培养基中虫草素达到0.60%,比传统液体发酵方法的最高产量高近2倍,并且培养时间缩短2 d.2003,33(510.学位论文王军蛹虫草固体栽培及下脚料深加工工艺研究2009本研究课题深入而系统地研究了蛹虫草固体栽培技术和蛹虫草栽培下脚料中虫草多糖和虫草素的提取纯化工艺、检测方法、结构鉴定以及虫草多糖和虫草素综合提取的工艺路线,

11、得到了满意的结果。 1、蛹虫草固体栽培需从优良菌种的选择、培养料的科学配制以及栽培的精心管理等几个环节加以注意,方可获得优质、高产。 2、蛹虫草栽培下脚料中虫草多糖的提取,热水提取法优于超声波水提法;虫草素的提取,超声波酒精提取法略优于热水提取法、酒精热回流提取法和超声波水提取法。 3、通过对影响虫草多糖和虫草素提取率的单因素进行分析,并通过四因素三水平的正交实验分析,最终确定用水80热回流提取3次,90min/次,料液比为1:20的工艺条件为提取虫草多糖的最佳工艺条件;确定用75%乙醇超声波提取三次,20min/次,料液比为1:10的工艺条件为提取虫草素的最佳工艺条件。 4、对影响虫草多糖与虫草素提取的工艺条件进行分析并进行综合利用提取放大试验得到综合提取工艺路线。结论为从蛹虫草栽培下脚料中综合提取虫草多糖和虫草素时应用20倍量的水,80热回流提取3次,每次2小时,提取液经醇沉法将虫草多糖和虫草素分开,采用Sevage法除去虫草多糖中的蛋白获得虫草多糖粗品;将醇沉上清液加入1%活性炭于60水浴中脱色30min,得虫草素提取液,在用阴离子交换树脂层析法分离、纯化虫草素得虫草素精品。经苯酚-硫酸法和HPLC法测定,除蛋白工序后得到的虫草多糖收率均大于5.28%,纯度