脂类细胞化学——苏丹Ⅲ染色法

1、 山东大学实验报告 2011年 10月 28 日 姓名 程开源 系年级 2010级临床医学八年制 组别 同组者 孙琳 科目 分子细胞生物学 题目 脂类细胞化学苏丹染色法 学号 201000232012 【实验目的】了解脂肪染色的原理、操作步骤及脂类标本制片原理。【实验原理】脂肪是体内储存能量和供给能量的重要物质，根据其性质可以分为中性脂肪、脂肪酸、胆固醇、鞘磷脂等。很多细胞都含有脂肪，游离状态的脂肪呈小滴状悬浮于细胞质内，比较显著的如肝细胞。脂肪小滴可以集合，将细胞质及细胞核挤到一旁，如脂肪细胞。如果组织中脂肪过多，将会影响其正常功能。如脂肪肝。脂肪不溶于水，易溶于浓乙醇、苯、氯仿和乙醚等，因

2、此制作脂类标本一般不用石蜡切片，而用冰冻切片或者铺片法以保存脂类，固定多用甲醛类固定液。其染色方法有脂溶性染料显示法、化学显示法和特异染色法等。脂溶性染料显示法利用苏丹染料中的苏丹III、苏丹IV或者苏丹黑等溶于脂类，而使脂类显色的原理显示脂类，使用时，要注意选择溶剂，要求既要溶解苏丹染料，又不溶掉脂肪。苏丹染料是偶氮染料，它对脂类的显示是一种简单的物理变化。苏丹染料是一种脂溶性染料，易溶于乙醇但更易溶于脂肪，所以当含有脂肪的标本与苏丹染料接触时，苏丹染料即脱离乙醇而溶于该含脂肪结构中而使其显色。脂肪染料一般选用有机溶剂做溶剂，丙酮和乙醇对染料和脂肪都是很好的溶剂，这样可以染色大的脂肪积累块，

3、但是小的脂肪滴会溶解。60%异丙醇当溶剂，可以减轻脂类的溶解。丙二醇或磷酸三乙酯不会溶解脂类物质，但是能溶解染料，是比较理想的溶剂。用这些溶剂配的染料溶液要过滤以去掉沉淀，防止蒸发，因蒸发会引起染料在材料中积累。常用相同溶剂洗掉多余的染料，然后再用水洗，可以防止多余的染料在材料中沉淀。用锇酸固定的脂肪不溶于无水乙醇、二甲苯等类似的液体，可用于石蜡切片，但是脂肪的标本一般不用石蜡切片或火棉胶包埋，而用如下方法：冰冻切片明胶包埋冰冻切片铺片法【实验材料】1. 试剂：苏丹染液：将0.15克苏丹溶解于100ml70%酒精或纯丙酮和70%酒精混合液中（各50ml），充分摇匀，放入冰箱保存，由于苏丹难溶，

4、需每天拿出进行摇匀，几天即可。临用时过滤，所得滤液即为饱和浓度。70%乙醇溶液甲醛钙2. 器具：显微镜，载玻片，盖玻片，胶头滴管，镊子，剪刀3. 材料：小鼠【实验步骤】1. 断头法处死小鼠，置于解剖盘中，剪开腹腔，用镊子提起小肠将盖玻片紧贴于肠系膜，用剪连同盖玻片和其上粘的肠系膜取下，反扣于已滴加甲醛钙的载玻片上，固定20分钟。2. 吸蒸馏水滴入载玻片与盖玻片之间冲洗，用滴管不断吸去液体以去除固定液。3. 用70%乙醇溶液代替蒸馏水重复步骤2的操作，再进行一次冲洗。4. 用苏丹染色30分钟5. 吸去溢出染液，擦净盖玻片表面及周边，用显微镜观察。【实验结果】1目镜10x 物镜40x脂肪细胞是圆球形，内充满橘红色脂类物质。细胞核呈指环状偏靠细胞膜边缘。2.目镜10x 物镜40x脂肪细胞内充满橘黄色物质【实验结果分析与注意事项】1. 在40x镜观察时，单个细胞的染色效果不明显，其中可能是由于所取小鼠的肠系膜过厚，多层细胞堆积在一起。另外，显微镜的质量亦会影响观察的效果。1. 在进行观察之前，应当用吸水纸尽可能地吸取染液后再进行观察，这样