临床研究用间充质干细胞制剂分期检测项目对照表

1、临床研究用间充质干细胞制剂分期检测项目对照表一、背景介绍间充质干细胞（MSC）由于来源方便、安全性相对较好等优点，目前较所有其它干细胞产品的研发发展更加迅猛。加拿大、韩国等国家的药品监管机构已批准了超过4种不同来源间充质干细胞制剂作为药物上市，国内也有数家公司正在进行间充质干细胞制剂的注册申报工作，目前有3家获批IND。一般来说，间充质干细胞具有跨胚层的多向分化潜能，表 现为向骨、软骨、脂肪、肌、神经等细胞分化的能力，而且具有调节免疫应答的特性，在临 床研究中主要用于治疗移植物宿主排斥反应（GVHD ）、骨关节炎、肝纤维化、糖尿病、结肠炎和红斑狼疮等疾病。然而，作为细胞治疗产品，间充质干细胞从

2、其获取、扩增、体外复杂操作、冻存、使用 等不同环节，都可能存在外在和内在的风险因素。另外，间充质干细胞的分离、培养、扩增 等体外操作过程尚缺乏标准化规程，导致不同的间充质干细胞制剂之间的特性，特别是生物学效应差异性较大。为了更有效地对间充质干细胞制剂进行质量控制，确保其安全、有效和质量可控，小编在干细胞制剂质量控制及临床前研究指导原则（试行稿（以下简称指导原则）的指导下，结合深圳市地方标准临床研究用人脐带来源间充质干细胞制剂规范整理出来了全面的间充质干细胞质量评价体系和相应的检验方法。临床研究用间充质干细胞制剂分期检测项目对照表细胞产品质控项目汇总项目分类检测项目标准要求研发阶段检验生产制备阶

3、段检验出厂检验型式检验HBsAg （ELISA 法）HBsAg 阴性是是否否病原体HBcAb （ELISA 法）HBcAb 阴性是是否否筛查，HBV-DNA （PCR 法）HBV-DNA 阴性是是否否既往病HCVAb （ELISA 法）HCVAb 阴性是是否否史（特HCV-RNA （PCR 法）HCV-RNA 阴性是是否否别是患HIV （I +nAb （ELISA法）HIV （ I + n Ab 阴性是是否否杓严重传染性HIV-1 RNA （ PCR 法）HIV-1 RNA 阴性是是否否疾病）CMV-IgM （ELISA 法）CMV-IgM 阴性是是否否和家族史（有Anti-TP （TRUST

4、 或TPPA 法）Anti-TP 阴性是是否否明确遗EBV-IGM （ELISA 法）EBV-IGM 阴性是是否否传性疾HTLV （ ELISA 法）HTLV阴性是是否否病）6-磷酸葡萄糖脱氢酶2500 到 5800是是否否谷丙转氨酶ALT 040U/L是是否否外观要性状乳白色至淡黄色的澄明液体是是是是求可见异物无肉眼可见异物（如沉淀、絮状物等）是是是是组织再促血管形成功能血管静脉内皮细胞在4 h形成血管环数37个/10000个细胞是否否是切匕匕 目生巨噬细胞极化将产品与巨噬细胞共培养24h后，与巨噬细胞对照组相比，培养液上清中 TNF- a ,IL-1 0水平应下降，是否否是TGF- 0 ,

5、 IL-10水平应上升，且差异具有统计学意义（P< 0.05 ）抗凋亡功能收集培养产品 24h后上清液，培养成纤维细胞，与普通培养基组相比，成纤维细胞凋亡比例应下降，且差异具有统11学意义（P< 0.05 ）是否否是分化能力成骨细胞向成骨细胞分化后，被茜素红染成红色或被冯库萨染成黑色，染色面积占总面积的比例50%是否否是成软骨细胞向成软骨细胞分化后，形成的软骨球表卸或石蜡切片被甲苯胺蓝染成蓝色或被II型胶原蛋白抗体染色，染色面积占总面积比例80%是否否是成脂肪细胞向成脂肪细胞分化后，被油红氧染成红色，染色面积占总面积的比例 50%是否否是基本性能细胞形态贴壁状态下为梭形是是否是贴壁

6、生长率12小时内可贴壁检测，贴壁细胞数应占总接种细胞数的80%以上。是是否是细胞数量每个使用单位（100ml ± 5ml）产品含有的细胞数量应为（2.0 5.0） X107t是是是是细胞活率产品发放前细胞活率95%产品在 28c环境下保存 6h内，细胞活率>90%;产品在 1825c环境下保存 4h内，细胞活是是是是率90%细胞表面标志物CD73+、CD105+ 和 CD90+R 95%CD45+ 、CD34+ 、CD14+ 、CD19+ （或 CD79a ）和HLA-DRY 2%是是是是群体倍增时间细胞群体倍增时间应大于8h且小于48h是是否是集落形成率集落形成率10%是是否

7、是细胞周期产品的G0/G1期细胞含量应大于80%且小于 90%,G2-M 期 5%是是否是端粒酶活性产品的两代次细胞端粒酶活性差异10%是是否是安全性能无菌检测不得检出是是是是支原体检测不得检出是是是是内毒素检测<0.5EU/ml是是是是外源病毒因子检测不得检出是是是是核型异常率检测核型异常的细胞 0%具有相同核型异常的细胞10%复发性核型异常 5%是是是是致瘤性检测免疫缺陷小鼠体内注射 3个月不可形成肿瘤；软琼脂克隆形成率，不得检出克隆是是否是异常毒性检测试验动物无肝肾毒性且不可死亡是否是是残留物检测抗生素不得检出外源DNA残留量 100Pg广品制备1小时内（加入人白蛋白"前）悬液蛋白质不得检出悬液磷酸盐不得检出是否是是三、小结近年来，间充质干细胞（以下简称“ MSC”）已经被广泛应用于科学研究和临床研究试验，对退行性疾病、免疫失调疾病等取得了较好的临床治疗效果，具有十分广阔的临床应用前景。间充质干细胞的生物安全性、稳定性和均一性对其临床应用至关重要。然而，目前国内外尚无临床研究用间充质干细胞