丹参水溶性成分的提取与纯化

1、33重庆中山医院(400013;33重庆医科大学附属第二医院(4000102008年4月5日收稿丹参水溶性成分的提取与纯化郑奇3林琳33覃伟33关键词:丹参;水溶性成分;提取;纯化中图分类号:R28315文献标识码:A 文章编号:1006-0979(200805-0045-02丹参为唇形科植物丹参Salviz miltiorrhiza Bge 的干燥根及根茎,始载于神农本草经,具有祛瘀止痛,活血通经,清心除烦之功效。它是我国传统医学中常用药物之一,具有悠久的临床应用历史。近几十年来,采用现代医学方法结合化学分子生物学和细胞生物学等多学科的技术手段对丹参进行了较系统的研究,取得了大量新的认识和实

2、验结果,并开发出一系列疗效良好的临床应用药物。1丹参水溶性成分对丹参化学及药理学研究表明1:丹参中的有效成分有两类,一类是脂溶性丹参酮类化合物,如丹参酮A 、隐丹参酮等;另一类是水溶性的丹参酚酸类成分。二十世纪早期的研究主要集中在以丹参酮为代表的脂溶性成分方面,把丹参酮A 作为唯一的药效活性指标成分。但越来越多的研究表明:丹参中水溶性成分具有多种多样的生理活性。丹参水溶性主要有效成分为丹参素(dan shen su ,DSS 、原儿茶醛(protocatechuic aldehyde ,PAH 、原儿茶酸(protocatechuic acid ,PA 、迷迭香酸(Rosmarinic aci

3、d 、紫草酸(lithospermic acid 、丹参酸A 、B 、C 、D 、E 、F 、G 等。丹参素化学名为-3,4-二羟苯乳酸(-3,4-di 2hydroxybenyllactic acid ,是各种丹酚酸的基本化学结构,丹参素能扩张肠系膜微动脉,具有抗血小板聚集抗血栓形成促进纤维蛋白降解及抗心肌缺血作用2。原儿茶醛能显著增加冠状动脉血流量,对抗ADP 所致血小板聚集,并有广谱抗菌作用。丹酚酸A (salvianolic acidA 是一分子丹参素与两分子咖啡酸缩合而成,具有保护肝功能、抗糖尿型肾病等作用。丹酚酸B (salvianolic acidB 为三分子丹参素与一分子咖啡酸

4、缩合而成,具有抗心血管疾病、抗神经性疾病等作用。丹酚酸C (salvianolic acidC 则为二分子丹参素缩合而成。丹参水溶性成分中的迷迭香酸,也是由一分子丹参素和一分子咖啡酸缩合而成,它通过清除或降低超氧化物歧化酶和过氧化酶的作用而起到护肝的作用3。2提取方法211水煎煮法:丹参的提取方法最常用的是水煎煮法。郝淑清等4采取不同时间组合煎煮丹参,测定水溶性成分的含量,表明115h 和1h 组合测得含量最高。唐昌炯在此基础上改进了提取工艺,在其它提取工艺基本相同的情况下,将丹参在用水提取前进行酸碱处理,使丹参素的回收率有了明显提高,可达216%5。212索氏提取:张文婷6等采用适量药材粉末

5、,精密称定,以水作溶剂索氏提取16h 放冷、滤过、定容,测定其含量。陈彦7等采用了超声、煎煮、索氏提取三种处理方法,采用高效液相色谱法,测定丹参药材中丹参素的含量。结果表明,索氏提取可促进水解完全,使测得的丹参素含量最高。索氏提取的方法如下:精密称取丹参粉末(过60目1g ,加水100ml 于圆底烧瓶中,用索氏提取器提取1618h 。213超声提取:由于超声提取法在药材的前处理中普遍应用,故陈彦7等采用超声提取20min ,提取3次,溶剂为水(120提取。刘重芳8等超声提取丹参素的工艺为50HZ ,1h ,12倍量。214回流提取:刘重芳8等以丹参素、原儿茶醛、丹参酮A 为指标提取量综合考虑,

6、丹参如采用回流提取法,以50%乙醇10倍量回流2次,每次115h 的方法较好。215动态温浸法:刘重芳8等经实验表明,采用动态温浸法提取,以90,20倍量水,提取3h 的方法为好。216渗漉法:刘重芳8等以水为溶剂,渗漉液收集24倍量的指标成分含量高。且冰冻的效果比不冰冻的好,即丹参粗粉,加适量的水,使丹参被水浸没,置冰箱冷冻。待结冰后取出,冰溶化后装渗漉筒,收集渗出液。刘重芳8等经上述提取方法的比较,以水溶性成分为指标,采用传统的水煎法的提取效率较好。3纯化311醇沉:醇沉工艺在丹参水溶性成分的纯化中应用广泛,不同醇沉浓度对丹参有效成分含量影响也较大,70%醇沉法在沉去大量杂质同时,水溶性酚

7、酸损失50%以上,丹参酮A 则损失2/3以上,原儿茶醛亦有损失;60%醇沉法丹参酮A 稍有损失;而50%醇沉法中各有效成分基本不损失9。所以,丹参的第一步醇沉浓度为50%最为适宜。制备复方丹参注射液时,为了提高澄明度,醇沉浓度可提高到60%。但此工艺仍有较多不足,由于丹参酚酸在水溶液中不稳定,在提取时受热而易破坏。醇沉造成的损失高达30%。312醋酸乙酯萃取:张荣泉等10在提取液中,用稀盐酸调节p H =2,用醋酸乙酯萃取4次(分别为药材原粉的115倍,115倍,112倍,112倍,合并萃取液,回收乙酸乙酯。313大孔树脂吸附:周永刚11等采用SIPI905型大孔树脂改进了丹酚酸B 的纯化工艺

8、,具有吸附快,吸附容量大,洗脱率高等优点,比传统的水醇法制备工艺具有非常明显的优势,可以显著提高丹酚酸B 的收率和纯度,而且方法操作简单,树脂再生简便,适合工业化生产,可有利促进丹参制542008年5期剂的发展,具有实用价值。王志平12等选用D -101,D -101+,H107,D301,D17的5种大孔树脂中,经实验表明,D301能够选择性富集丹参提取液中丹参素和原儿茶醛,使经树脂处理的丹参水提液出膏率较未经树脂处理的水提取液降低10倍,固体膏中有效成分的量提高8倍。314高速逆流色谱:高速逆流色谱(HSCCC 是一种基于液-液多级逆流萃取建立的色谱体系,没有固相载体,避免了待分离样品与固

9、相载体表面产生化学反应而变化和不可逆吸附;高速逆流色谱可以直接纯化粗制样品;尤其适于分离极性较大的组分。顾铭13等用国产高速逆流色谱分离纯化丹参,具有可行性。参考文献1陈向荣,陆京伯,石汗平1丹参的药理作用研究新进展J 1中国医院药学杂志12001,21(1:44-45.2杜冠华,张均田1丹参水溶性有效成分丹酚酸研究进展J 1基础医学和临床12000120(5:394-398.3赵淑娟,章国瑛,刘涤等1丹参水溶性酚酸类化合物药理及生物合成途径研究进展J 1中草药,2004,35(3:341-344.4郝淑清,李静,等1丹参制剂中酚酸类成分的含量测定J 1中草药11993;24(10:5275唐

10、昌炯1丹参素提取工艺的探索J 1华西药学杂志,1998,13(2:117.6张文婷,寿优芳,陈碧莲,等1丹参水溶性制剂中丹参素和原儿茶醛含量的考察J 1中国现代应用药学杂志12001;18(4:303-305.7陈彦,贾晓斌,施亚芳,等1不同提取方法测定丹参药材中丹参素含量的比较研究J 1江苏中医药12003,24(6:55-56.8刘重芳,张钰泉,戴居云,等1丹参不同提取工艺比较J 1中成药11999,21(8:385-388.9张玲,于宗渊,徐新刚,等1丹参水醇法提取工艺的研究J 1中成药11995;17(5:1.10张荣泉,王德仁,张蓉,等1丹参水溶性成分提取工艺研究J 1中药材1200

11、1,24(11:818-819.11周永刚,李翔,赵亮,等1大孔树脂吸附法提取丹酚酸B 的应用研究1药学实践杂志12003,21(6:339-341.12王志平,刘玉强,范晋勇,等1大孔吸附树脂富集丹参中水溶性成分的研究1中草药12003,34(10:908-909.13顾铭,欧阳藩,苏志国1高速逆流色谱法分离纯化丹参并尝试制定中药指纹图谱1生物工程学报12003,19(6:710-714.3成都医学院药学实验技术中心(6100832008年4月5日收稿苯妥英钠的合成路线的改进邓晶晶3李婷婷3尤思路3摘要:目的:对苯妥英钠合成路线进行改进。方法:在第一步缩合反应中用无毒的VB1代替剧毒的氰化物

12、,第二步氧化反应中用FeCl36H2O 代替浓硝酸,最后进行环和反应。结论:上述改进具有操作简单、收率高、产品质量好、污染低、耗能低等优点,具有很好的工业化前景。关键词:苯妥英钠;VB 1;FeCl 36H 2O中图分类号:R97116文献标识码:A 文章编号:1006-0979(200805-0046-02苯妥英钠(Phenytoin S odium 又名大仑丁,是二苯乙内酰脲类钠盐,是抗癫痫大发作的首选药物。常用于抗癫痫、抗心律失常、抗三叉神经痛、抗轻度高血压1。因此,具有开发和临床应用的重大意义。苯妥英钠的合成过程一般是以苯甲醛为原料经安息香缩合,氧化和环化三步反应制得。在传统制备中,第1步安息香缩合反应中常用氰化物作为催化剂进行,但因为氰化物及氰化酸的致毒性极强,致毒作用极快,空气中氰化氢含量达3/100000,即可在数分钟内致人死亡,大大增加了危险性;第2步二苯乙二酮的合成中用浓硝酸氧化,产生大量的NO 2气体,腐蚀严重。因此我们改用VB 1(即硫胺代替氰化物进行第1步反应,用FeCl 3作为氧化剂进行第2步反应,具有安全、高效、绿色环保的优点,可作为苯妥英钠的实际合成方案。1材料与方法111仪器与试剂:循环水式真空泵(SH21(III 、三