高效液相色谱法测定补中益气口服液中黄芪甲苷的含量

1、HPLC-ELSD法测定补中益气口服液中黄芪甲苷的含量潘渭樵1，陈珂2（1.湖州市食品药品检验所，浙江 湖州 313000；2.湖州新农农业科技开发有限公司，浙江 湖州 313000）摘要：目的 建立高效液相色谱蒸发光散射检测法测定补中益气口服液中黄芪甲苷的含量测定方法。方法 采用色谱柱为SHIM PACK CLC-ODS C18 (6.0mm×150mm，5m；流动相为乙腈水（32:68）；流速为1.0ml·min-1，柱温为30；蒸发光散射检测器参数：漂移管温度 100，氮气流速：2.7 ml·min-1。结果 黄芪甲苷进样浓度在0.5044g20.176g范

2、围内的对数值与峰面积的对数值呈良好线性关系,r=0.9993；平均回收率为99.43%，RSD=1.26%(n=9。结论：本方法简便、准确、重复性好，适用于补中益气口服液的质量控制。关键词：高效液相色谱蒸发光散射检测法；黄芪甲苷；补中益气口服液Determination of Astragoloside in Buzhongyiqi Oral Liquid by HPLC-ELSDPan Wei-Qiao 1, Ke Chen 2 (1. Huzhou institute for food and drug control, Huzhou, Zhejiang 313000, China; 2.

3、 Huzhou Agriculture Agricultural Science and Technology Development Co., Ltd., Huzhou, Zhejiang 313000, China;Abstract: Objective: To establish an HPLC-ELSD method for determination of Astragaloside in Buzhongyiqi Oral Liquid .Methods: The column was SHIM PACK CLC-ODS C18 (6.0mm × 150mm, 5m; mo

4、bile phase of acetonitrile - water (32:68; the flow rate of 1.0ml min-1, the column temperature is 30 ; ELSD parameter: drift tube temperature of 100 , nitrogen flow rate: 2.7 ml min-1. Results: The sample astragaloside concentration range of 0.5044g20.176g logarithm of the logarithm of peak area wa

5、s linear; r=0.9993; average recovery, RSD =1.26% (n = 9. Conclusion: The method is simple, accurate, reproducible, and suitable for quality control of Buzhongyiqi Oral Liquid.Keywords: HPLC-ELSD; Astragaloside ; Buzhongyiqi Oral Liquid补中益气口服液由黄芪（蜜炙）、党参、甘草（蜜炙）、当归、白术（炒）、升麻、柴胡、陈皮、生姜、大枣等药材经加工制成的口服液。具有补中

6、益气，升阳举陷的功效1。黄芪是君药，其主要成分为黄芪甲苷，控制黄芪质量，即可控制本品的质量。有关黄芪甲苷的分析方法报道，有薄层-紫外可见分光光度法、薄层扫描法等。但方法繁琐，误差大，重现性不好，采用高效液相色谱蒸发光散射检测法，避免紫外末端吸收的影响，方法简便、准确、重复性好，可用于该制剂的质量控制。1 仪器与试药1.1 仪器 Agilent1200高效液相色谱仪（美国安捷伦公司），Alltech2000-ELSD蒸发光散射检测器（美国奥泰公司），RE-2000A旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂。1.2 试药 黄芪甲苷对照品（供含量测定用，中国药品生物制品检定所，批号：110781-200613

7、；规格20mg）；补中益气口服液（浙江大东吴药业有限公司，规格10ml/支，批号：090608、 091018、 091201）；乙腈为色谱纯，水为重蒸馏水，其余试剂均为分析纯。2 方法与结果2.1 色谱条件色谱柱为SHIM PACK CLC-ODS C18 (6.0mm×150mm，5um；流动相为乙腈水（32:68）；流速为1.0ml·min-1，柱温为30；蒸发光散射检测器参数：漂移管温度 100，氮气流速：2.7 ml·min-1。2.2 溶液制备对照品溶液的制备：精密称取经五氧化二磷干燥24h的黄芪甲苷对照品12.61mg，置25ml量瓶中，加甲醇溶解并

8、稀释至刻度，摇匀，即得（浓度为0.5044mg/ml）。供试品溶液的制备：精密量取本品25ml，置分液漏斗中，用水饱和的正丁醇振摇提取4次，每次40ml，合并正丁醇液，用氨试液充分洗涤2次，每次40ml，正丁醇液用旋转蒸发仪80蒸干，残渣加用甲醇使溶解并转移至10ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得2。图1对照品色谱图 图2 供试品色谱图 图3 阴性对照色谱图2.3标准曲线的制备精密吸取黄芪甲苷对照品溶液（浓度为0.5044mg/ml）各1l、3l、5l、10l、20l、40l，分别注入液相色谱仪，按“2.1”项下色谱条件进行测定，以峰面积的自然对数值为纵坐标，黄芪甲苷进样量的自然对数值为

9、横坐标，绘制标准曲线，得回归方程Y=1.2136X+5.6728，r=0.9993。结果表明，黄芪甲苷在0.5044g20.176g范围内线性关系良好。2.4精密的试验精密吸取对照品溶液20ul，连续进样6次，按“2.1”项下色谱条件进行测定。结果，RSD=0.53%。2.5 重复性试验2.6 稳定性试验取同一份供试品溶液分别于2，8，16，24，48h注入液相色谱仪各20ul，以黄芪甲苷的峰面积计算，结果，RSD=0.96%。表明该方法稳定性良好。2.6 加样回收率试验表1 回收率试验结果编号 原含量 加入量 测定值 回收率 平均回收率 RSD（mg） （mg） （mg） （%） （%） （

10、%）1 1.0627 1.0088 2.0615 99.012 1.0627 1.0088 2.0764 100.493 1.0627 1.0088 2.0512 97.994 1.0627 1.2610 2.3041 98.445 1.0627 1.2610 2.2984 97.99 99.43 1.26 6 1.0627 1.2610 2.3065 98.647 1.0627 1.5132 2.5895 100.908 1.0627 1.5132 2.5913 101.029 1.0627 1.5132 2.5816 100.382.8 样品含量测定分别取批号为090608、 091018

11、、 091201样品，照“”项下方法制备供试品溶液，照“2.1”项下色谱条件进行测定，以黄芪甲苷峰面积按外标两点对数值进行计算。结果见表2。表2样品含量测定结果批号 黄芪甲苷含量/g·ml-1090608 79.28091018 82.13 091201 70.853 讨论笔者对口服溶液中黄芪甲苷的提取条件进行考察，参考了中国药典2005年版一部黄芪含量测定项下提取方法，比较了将样品用以水饱和的正丁醇液提取，氨试液洗脱，正丁醇液旋转蒸发蒸干，加甲醇溶解进样；与样品用以水饱和的正丁醇液提取，氨试液洗脱，正丁醇液旋转蒸发蒸干，残渣加水溶解，通过D101大孔柱树脂吸附洗脱，洗脱液蒸干，加甲醇溶解进样。结果不经D101大孔柱树脂吸附洗脱的样品在黄芪甲苷保留时间处无杂质峰干扰，分离度好，而通过D101大孔柱树脂吸附洗脱的样品，受实验操作影响较大，回收率较低。在样品的蒸干过程中，使用旋转蒸发仪较理想，即缩短实验时间，而且热稳定性又好。本文中用于样品含量测定的方法是外标两点对数法，本法适用于ELSD检测方法的含量测定。即以高、低浓度对照品通过lgA=klgC+b（式中A为峰面积，C为质量，k、b均为常数）计算出k和b的数值，再通过测得样品的峰面积计算样品含量。参考文献1