内毒素和外毒素

1、性质外毒素内毒素存在部位由活的细菌释放至细菌体外为细菌细胞壁结构成份，菌体崩解 后释出细菌种类以革兰氏阳性菌多见革兰氏阴性菌多见化学组成蛋白质（分子量27，000900，000）磷脂一多糖一蛋白质复合物（毒性 主要为类脂a）稳定性不稳定，60C以上能迅速破坏耐热，60C耐受数小时毒性作用强，微量对实验动物有致死作用（以ug计量）。各种外毒素有选 择作用，引起特殊病变，不引起宿 主发热反应。抑制蛋白质合成，有 细胞毒性、神经毒性、紊乱水盐代 谢等稍弱，对实验动物致死作用的量比 外毒素为大。各种细菌内素的毒性 作用大致相同。引起发热、弥漫性 血管内凝血、粒细胞减少血症、施 瓦兹曼现象等抗原性强，可

2、刺激机体产生高效价的抗毒 素。经甲醛处理，可脱毒成为类毒 霉，仍有较强的抗原性，可用于人 工自动免疫刺激机体对多糖成份产生抗体，不 形成抗毒素，不能经甲醛处理成为 类毒素1.外毒素产生菌主要是革兰阳性菌中的破伤风梭菌、肉毒梭菌、白喉杆菌、产气荚膜梭菌、A群链球菌、金黄色葡萄球菌等。某些革兰阴性菌中的痢疾志贺菌、 鼠疫耶氏菌、 霍乱弧菌、肠产毒素型大肠埃希菌、铜绿假单胞菌等也能产生外毒素。大多数外毒素是 在菌细胞内合成后分泌至细胞外；也有存在于菌体内，待菌溶溃后才释放出来的，痢疾 志贺菌和肠产毒素型大肠埃希菌的外毒素属此。外毒素的毒性强。1mg肉毒毒素纯品能杀死2亿只小鼠，毒性比KCN大 1万倍

3、。不 同细菌产生的外毒素，对机体的组织器官具有选择作用，各引起特殊的病变。例如肉毒 毒素能阻断胆碱能神经末梢释放乙酰胆碱，使眼和咽肌等麻痹，弓I起眼睑下垂、复视、 斜视、吞咽困难等，严重者可因呼吸麻痹而死。又如白喉毒素对外周神经末梢、心肌等 有亲和性，通过抑制靶细胞蛋白质的合成而导致外周神经麻痹和心肌炎等。多数外毒素不耐热。例如白喉外毒素在58 60C经1 2h，破伤风外毒素在60C经 20min可被破坏。但葡萄球菌肠毒素是例外，能耐100C 30min。大多外毒素是蛋白质，具有良好的抗原性。在% %甲醛液作用下，经一定时间，可以脱去毒性，但仍保有免疫 原性，是为类毒素（toxoid ）。类毒

4、素注入机体后，可刺激机体产生具有中和外毒素作 用的抗毒素抗体。类毒素和抗毒素在防治一些传染病中有实际意义，前者主要用于人工 主动免疫，后者常用于治疗和紧急预防。多数外毒素的分子结构为 A-B模式，即由A和B两种亚单位组成。A亚单位是外毒 素活性部分，决定其毒性效应。B亚单位无毒，能与宿主靶细胞表面的特殊受体结合，介 导A亚单位进入靶细胞。A或B亚单独对宿主无致病作用，因而外毒素分子的完整性是致 病的必要条件。利用B亚单位能与靶细胞受体结合后阻止受体再与完整外毒素分子结合，且 B 亚单位抗原性强；将 B 亚单位提纯制成疫苗，有可能预防相关的外毒素性疾病。根据外毒素对宿主细胞的亲和性及作用方式等，

5、可分成神经毒素、细胞毒素和肠毒 素三大类。细菌的外毒素多数为A-B型分子结构，这类外毒素的作用机制不完全相同，又可分 为几种类型：(1)具腺苷二磷酸核糖基转移酶活性的毒素：这类毒素通过转移烟酰胺腺苷二核 苷中的腺苷二磷酸(ADP核糖，核糖基化真核细胞中腺苷环化酶复合物中的鸟嘌呤核苷 结合蛋白。例如百日咳毒素和铜绿假单胞菌毒素A靶向的延伸因子-2 (EF-2)是三磷酸结合蛋白；肉毒梭菌C2毒素使肌动蛋白结合至腺苷三磷酸；肉毒梭菌C3毒素即ADP核糖基转移酶，靶向小分子鸟苷三磷酸结合蛋白Rho和Raco这类毒素都为A-5B结构，即每一外毒素分子由1个A亚单位和5个B亚单位组成。包括有霍乱肠毒素、大

6、肠埃希菌 不耐热肠毒素、百日咳毒素等。(2) RNA糖基化酶毒素：这类毒素的分子结构式为 A-5B。例如痢疾志贺菌产生的 志贺毒素和大肠埃希菌 0157： H7 产生的 Vero 毒素。它们的 A 亚单位与蓖麻毒素蛋白的 A 亚单位具有同源性。A亚单位的N糖苷酶，直接作用于靶细胞核糖体的 60S亚单位，使 28S RNA近 3 /端的特殊嘌呤残基脱嘌呤。PA和LF则使动物迅速死亡。PA和EF或LF反应产生完全的曰(3) 钙调节蛋白依赖性腺苷酸环化酶毒素：炭疽毒素属此类毒素。它由保护性抗 原(PA)、水肿毒素(EF)和致死毒素(LF)三部分组成。单一组分无毒性，PA和EF 可引起实验动物皮肤水肿

7、， 水肿毒素或致死毒素，符合 A-B结构模式。水肿因子是一种钙调节蛋白依赖性腺苷酸环 化酶，进入靶细胞后导致cAMP水平增高。致死毒素是炭疽病死亡的主要毒力因子，它可 能是一种金属蛋白酶。(4)具锌结合内肽酶活性的神经毒素：这类毒素的代表是肉毒神经毒素(BoNT)，其结构和功能与破伤风痉挛毒素(TeTx)相似。BON1和TeTx产生时为单一多肽，经蛋白 酶水解成由二硫键连接的双链毒素。100kDa重链与神经元受体结合，50kDa轻链封闭神 经递质的释放。这两种毒素均为锌内肽酶，其靶分子是神经元膜内的小突触泡蛋白(synaptobrevin )，毒素可将之切割、降解而失活。锌内肽酶活性位于这些毒

8、素的轻链， 若锌结合基序发生突变则其活性丧失。(5)其他梭菌外毒素：艰难梭菌可产生毒素 A (肠毒素)和毒素B (细胞毒素)。 毒素A和B的靶分子是Rho,其作用机制尚不清楚。外毒素的分子结构不是 AB 型模式的尚有：(1)损伤细胞膜的毒素：有两种类型。一种具有磷脂酶活性。例如产气荚膜梭菌 的a毒素是磷脂酶C;金黄色葡萄球菌的P毒素是鞘磷脂酶；水肿梭菌的 P毒素是卵 磷脂酶等。这些毒素消化靶细胞膜的磷脂组分而引起细胞溶解。另一种是毒素本身嵌进 细胞膜，使形成小孔。例如金黄色葡萄球菌 a 毒素通过在靶细胞上打孔而损伤细胞；产 气荚膜梭菌P毒素与金黄色葡萄球菌a毒素具有同源性，是一种孔形成毒素；链

9、球菌溶素o是结合于靶细胞膜胆固醇的孔形成毒素，在寡聚化后形成小孔。( 2)激素样作用的毒素：例如大肠埃希菌耐热肠毒素ST-1 能活化肠粘膜上的鸟苷环化酶，使cGMP水平增加，导致腹泻。细菌外毒素中，有一类具有超抗原( superantigen )作用。这些超抗原性外毒素主 要是葡萄球菌肠毒素A-E、毒性休克综合征毒素-1、链球菌致热外毒素A-C等。这些毒素 是强力的有丝分裂原，能活化一大群T细胞。它们结合至抗原递呈细胞上的 MHCH类分子， 以及T细胞受体P区刺激T细胞，产生和释放大量IL-1、IL-2、TNF-a和IFN- 丫等细 胞因子。超抗原性外毒素引起的病症有毒性休克综合征、猩红热、食

10、物中毒等，也可能 与一些自身免疫病有关，例如毒性休克综合征患者常伴有关节炎、滑膜炎等并发症。2内毒素是革兰阴性菌细胞壁中的脂多糖( lipopolysaccharide,LPS )组分，只有当细菌死亡裂解或用人工方法破坏菌体后才释放出来。螺旋体、衣原体、支原体、 立克次体亦有类似的LPS有内毒素活性。内毒素的分子量大于10万，其分子结构由O特异性多糖、非特异核心多糖和脂质A 三部分组成。强酸或强氧化剂加温煮沸 30min 才灭活。不能用甲醛液脱毒成类毒素。 可产生相应抗体，但中和作用较弱。、TNF-a及趋化因炎症反应等对内毒素耐热，加热100C经1h不被破坏；需加热至160C经2-4h，或用强

11、碱、 内毒素注射机体IL-1 、 IL-6内毒素LPS能刺激巨噬细胞、血管内皮细胞等产生 子等。小量内毒素诱生的这些细胞因子，可导致适度发热、微血管扩张、 宿主有益的免疫保护应答。但当革兰阴性菌进入血循环发生败血症时，内毒素大量释出， 诱生的细胞因子过量，常致患者休克甚至死亡。高浓度的内毒素也可激活补体替代途径， 引发高热、低血压，以及活化凝血系统，最后导致弥散性血管内凝血( disseminated intravascular coagulation,DIC ) .脂质A是内毒素的主要毒性组分。不同革兰阴性菌的脂质 A结构虽有差异，但基本 相似。因此，不同革兰阴性菌感染时，由内毒素引起的毒性

12、作用大致类同。(1)发热反应：极微量(15ng/kg )内毒素就能引起人体体温上升，维持约4h后恢复。其机制是内毒素作用于巨噬细胞等，使之产生 IL-1 、 IL-6 和 TNF-a 这些具有 内源性致热原(en doge nous pyroge ns )的细胞因子。它们再作用于宿主体下丘脑体温调 节中枢，促使体温升高发热。(2)白细胞反应：注射内毒素后，血循环中的中性粒细胞数骤减，系与其移动并 粘附至组织毛细血管有关。12h后，LPS诱生的中性粒细胞释放因子(neutrophil releasing factor )刺激骨髓释放中性粒细胞进入血流，使数量显着增加，且有左移现 象。但伤寒沙门菌

13、内毒素是例外，始终使血循环中的白细胞总数减少，机制尚不清楚。(3)内毒素血症与内毒素休克：当血液中细菌或病灶内细菌释放大量内毒素入血时，可导致内毒素血症(endotoxemia)。内毒素作用于巨噬细胞、中性粒细胞、内皮细胞、血小板、补体系统、凝血系统等并诱生TNF-a、IL-1、IL-6、IL-8、组胺、5-羟色胺、前列腺素、激肽等生物活性物质，使小血管功能紊乱而造成微循环障碍，表现为微 循环衰竭和低血压、组织器官毛细血管灌注不足、缺氧、酸中毒等。严重时则导致以微 循环衰竭和低血压为特征的内毒素休克。(4) Shwartzman现象与DIC:将革兰阴性菌培养物上清或杀死的菌体注射入家兔 皮内，824h后再以同样或另一种革兰阴性菌行静