建立 HIV抗体初筛实验室的方法

1、 实验研究与疾病监测 建立 HIV 抗体初筛实验室的方法吉 逵 张永刚 潍坊出入境检验检疫局 (潍坊 261041 摘要 目的 规范 HI V 抗体初筛实验室的管理 , 提高检测质量 。 方法 根据卫生部制定的 全国艾滋病检测工作规范 及国家质检总局的有关文件 , 对 HI V 抗体初筛实验室的建立的方法进行了研究 。 结果 HI V 抗体初筛实验室必须通过相应的审批程序 ; 具备人员条件和医用设施才能开展 HI V 抗体的检测工作 。检测中要严格执行 HI V 抗体检测程序 ; 选用敏感性 、 特异性 、 功效率较高的试剂并建立实验室质量体系 , 才能提高检测结果的可信度 , 提高实验室的检

2、测质量 。 结论 必须按照规范化的方法建立 HI V 抗体初筛实验室 , 才能保证初筛实验室的工作质量 。关键词 HI V 抗体 ; 实验室 ; 初筛 中图分类号 R512. 91 文献标识码 B 实验室 HI V 抗体特异性检测在 HI V 感染和 AI DS 的临床诊断上起着至关重要作用 。 1997年 9月卫生部制定了 全国艾滋病检测工作规范 从法制 化的角度对艾滋病的检测工作加以规范 。因此 , 在 筹建 HI V 抗体初筛实验室时 , 必须遵守上述规范中 的各项规定 。1 HI V 抗体初筛实验室的建立 (1 根据当地 AI DS 防治工作的需要建立 HI V 抗 体实验室须经相应卫

3、生部门审批同意 (或系统相应 部门批准 方可建立 。初筛实验室须经相应的卫生 行政部门 (或局系统相应部门 组织确认实验室专家 34人评审 , 经审评组审定批准后 , 方能开展 HI V 抗体检测工作 。(2 初筛实验室必须具备的条件 人员条件 有 3名以上医技人员 , 其中中级 卫生技术职称 1名以上 (供血机构的 HI V -抗体检 测人员须有技师以上卫生职称 , 从事病毒检测技术 工作 2年以上 , 并曾在国家或省级 HI V 抗体确认中 心举办的 HI V 抗体检测学习班参加过学习并获得 合格证书 。 必备设施 有独立的试验用房 , 污染区和清 洁区要分开 , 必要时建立半污染区和清洁

4、区 。设立 专门采血室及消毒室 。按照我国 HI V 抗体检测工 作要求 , 要按酶联免疫吸附试验 (E LIS A 测定所需配 备试验器材 , 必须配备酶标读数仪和洗板机 、 精确移 液器 、 普通冰箱 、 低温冰箱 、 离心机及消毒与污物处 理设施 、 安全防护用品和恒温设备 。(3 开展检测工作时要严格执行 HI V 抗体检测 程序 , 严格执行国家规定的各种检测要求 。 检测试剂 初筛用的 HI V 抗体检测试剂必 须是经卫生部注册 , 经过批检检定合格的 HI V12混 合型试剂 , 并在有效期内应用 。阿克苏试剂 (E LIS A 法 、 雅培试剂 (快速纸条法 , 为卫生部首选指

5、定试 剂 。 操作严格按说明书进行 。 检测程序a. 血液标本验收合格后 , 用初筛检测试剂检测 如呈阴性反应 , 则作 HI V 抗体无反应阴性报告 。 b. 初筛检测结果呈阳性反应的标本必须进行重 复检测 , 在复检时用另一种不同原理的检测试剂予 以复检 , 复检阳性反应的标本 , 按规定送确认实验室 确证 (表 1 。表 1 初筛阳性标本复检对比表第 1次检测第 2次原试剂检测第 2次与第 1次不同原理检测结果+ 阴性反应 + 阳性反应 +阳性反应 (4 要严格遵守保密制度 , 妥善保存各种实验记 录 , 不得私自修改或销毁 。未经省卫生行政部门许 可不得向无关人员 , 或单位提供任何情

6、况 。初筛检 测结果不是最终结果 , 不得向受检者宣布阳性结果 。 (5 要加强 HI V 抗体初筛实验室的质量管理 。 在技术上要精益求精 , 对实验室工作人员进 行上岗业务培训 。实验室按照质量保证 、 质量控制 和质量评价方案实施细则开展工作 。 8 1 在平时要按接触阳性标本做好预防性感染工 作 。实验室应建立安全操作 、 消毒 、 复核报告等制 度 , 并严格执行 。 质量保证 是指保证实验结果正确性的整个 程序 , 是实验室的最佳工作方式 。它包括可靠的实 验方法 , 复核实验记录的正确性 。 质量控制 对结果可信程度的检验 。 每次实 验必须进行质量控制 , 才能保证结果可靠性

7、。失控 时结果不可靠 , 必须重做 , 并找出失控原因 。 每次实验都要进行质量监控 。 一般采用内部 对照及外部对照进行实验室监控 。 最理想的外部对 照设阳性 、 弱阳性临界值及阴性标本对照可取得正 确可信的结果 , 可信度达到 99%为最佳 。2 HI V 抗体检测试剂的评价 HI V 抗体特异性实验室诊断方法发展的快 , 目 前国内外诊断试剂 、 方法数十种 , 究竟哪一种方法最 好 ? 这是一个重大的研究课题 。 我国国家参比实验 室为此做了大量科学可靠的选择工作 , 对全国艾滋 病检测工作起了重要的指导作用 ; 同时卫生部提出 了首选试剂 、 方法的要求 , 各地各部门必须遵照执

8、行 。 通常用于评价试剂质量的重要指标有敏感性 、 特异性 、 功效性 、 值 、 可信度 、 预期值等 , HI V 抗体 初筛实验室工作人员必须熟练地掌握 。2. 1 敏感性 敏感性是指该试剂可以检出样本中 特异抗体最小含量的能力 。必须选择敏感性高 , 在 初感染者血样标本中含少量的特异抗体时能检测出 阳性结果 , 对早发现 、 早治疗起到良好的作用 。 使假 阴性率降到最低限度 , 使阳性正确度达到 98%以上 为理想合格试剂 。敏感性 =真阳性 (真阳性 +假阴性 ×100%。 2 特异性 是指该实验方法能准确的区分非感 染团体的能力 , 也就是不产生假阳性反应 。在实验

9、过程中选用的方法特异性强 , 可提高检测结果的可 信度 。 目前 HI V 血清筛选试剂的特异性没有一种 为 100%, 所以对阳性标本血清要采用另一种原理 的试剂重做试验 , 以求更高的特异性 。如果检测试 剂特异性差 , 出现大量的假阳性 , 会使检测结果不可 信 , 一定要引起初筛实验室高度重视 。所用试剂特 异性应达 98%以上 , 方可在初筛实验室使用 。 特异性 =真阴性 (真阴性 +假阳性 ×100%。 2. 3 功效率 (性 功效率是指能准确的区分真阳 性和真阴性结果的能力 , 就是说不产生假阳性 、 假阴 性结果 。 功效率是将敏感性与特异性相结合的一种 综合质量

10、, 要求功效率达 98%为比较理想的指标 。 功效率 =(真阳性 +真阴性 (真阳性 +假阳性 +真阴性 +假阴性 ×100%。如 :在 100份血样中 , 有 5份为感染者 ,95份为 非感染者 , 记实结果 5个阳性 (有 4个为真阳性 95份阴性 (94份真阴性 。计算 :功效率 =(4+94 (4+1+94+1 ×100% =98%2. 4 值 虽然大多数试剂用特异性和敏感性指 标进行评价 , 但定量评价为更佳 。 E LIS A 试验的评 价 OD 值能否接近切点是非常重要的指标 , 阳性 值高表明确认阳性标本能力好 ; 阴性 值高表明确 认阴性能力高 。在测 值

11、时样品在 50份以上才有 代表性 。2. 5 预期值 预期值是考虑人群中感染率分布因 素 , 分为阳性预期值和阴性预期值 。阳性预期值 (PPV =真阳性 (真阳性 +假阳性 ×100%。阴性预期值 (NPV =真阴性 (真阴性 +假阴 性 ×100%。3 建立艾滋病实验室质量体系 为确保艾滋病实验室的工作质量 , 确保检测结 果的正确性 , 公正性 、 科学性 , 按卫生部及国家质检 总局有关文件要求 , 并参照 IS O IEC17025 标准的检 测实验室能力的通知要求 , 结合本实验室实际 , 制 定出质量体系文件 , 指导艾滋病检测工作 。3. 1 质量方针 科学

12、公正 、 准确及时 、 精益求精 , 要 维护实验室的正确性和权威性 。3. 2 质量体系 适用于本室的质量控制和质量保 证 。 质量体系基本要素应为 :(1 组织与管理 ;(2 文件控制 ;(3 人员配备 、 培训及职责分工 ;(4 实验场所及仪器设备 ;(5 仪器的校准及仪器操作规程 ;(6 质量控制的建立 ;(7 样品的管理 ;(8 检验结果报告及记录 。3. 3 保密制度 建立实验室保密制度 , 加强保密意 识 , 规定保密范围 。3. 4 规章制度 建立实验室规章制度 , 使工作制度 化 、 实验规范化 。规章制度的重点 : 9 1 实验研究与疾病监测 合资企业职工超声诊断肾脏占位性

13、病变结果分析夏 青 刘 震 青岛市中心医院 (青岛 266001田晓青 山东国际旅行卫生保健中心 (青岛 266001 摘要 目的 评价超声诊断肾占位性病变的临床价值 。 方法 用 LOGI Q400型和 A LOK ASS D -1100型灰阶超声诊断仪 , 对进行健康体检的 4380名合资企业职工的肾脏行常规扫查 。 结果 共检出肾占位性病变 148例 , 检出率 3. 38%。 其中经 CT 、 X 线肾盂造影 、 手术及病理证实的 73例 , 误诊 2例 , 漏诊 1例 , 准确率为 97. 79%。 结论 超声检查对肾占位性病变的诊断正确率高 , 定位准确 , 是既准确可靠又经济的检

14、查方法 。关键词 肾脏占位性病变 ; 超声检查 ; 企业职工 中图分类号 R692 文献标识码 B 肾脏占位性病变可分为囊性占位和实性占位 2大类 , 前者主要是指肾囊肿 , 后者主要是指肾肿瘤 , 90%以上为恶性 。 为了解合资企业职工发生肾占位 性病变的情况 ,1998年 9月2002年 7月 , 青岛市 纺织医院与山东国际旅行卫生保健中心联合在对纺 织系统合资企业职工进行健康体检时 , 采用超声诊 断仪进行肾脏常规扫查 , 现将检查结果报告如下 :1 对象与方法1. 1 检查对象 :纺织系统合资企业职工 , 共计 4380人 。 1. 2 检查仪器 LOGI Q400型和 A LOK

15、ASS D -1100型灰阶超声诊断仪 , 探头频率为 3. 5MHZ 。诊断标 准参照周永昌 , 郭万学主编 超声医学 。1. 3 检查方法 患者取俯卧位 、 仰卧位 、 或左右侧 卧位 , 经背部及侧腰部位纵 、 横 、 冠状切面扫查 。2 结果2. 1 检出率与准确率 在接受检查的 4380名合资企 业职工中 , 共发现肾占位性病变者 148例 , 检出率为 3. 38%。 其中有 73例 , 后被 CT 、 X 线肾孟造影、 手术及病 理所证实 ; 误诊 2例 ; 漏诊 1例 , 准确率达 97. 97%。 (1 艾滋病实验室管理制度 ;(2 艾滋病实验室消毒及污物处理制度 ;(3 艾

16、滋病实验室个人防护制度 , 清场处理制 度 ;(4 艾滋病实验室意外事故处理制度 ;(5 艾滋病实验室重要仪器 , 如 :酶标仪 、 洗板 机 、 高压灭菌器 、 计算机等操作规程的建立 ;(6 实验操作规程的建立 :HI V 抗体标准操作规 范 , 血液 (血清 采集及保存操作规程 ;(7 建立艾滋病实验室档案管理办法 ;(8 建立必要的登记记录 :低温冰箱 、 普通冰箱 、 保温箱及实验室等温度记录卡及仪器使用记录 , 检 验原始记录及质控记录及质控图等主要记录 。 艾滋病实验室检测结果的可信度受到各方面因 素的影响 , 在试验过程中 , 应注意各个环节 , 有一个 小问题的疏忽会直接影响检测结果的可信性 。 在实 验过程中应提高影响结果可信度的各个因素的可信 度 , 并将其定为每个检测工作人员的神圣职责 。参 考 文 献1 中华人民共和国卫生部 . 全国艾滋病检测工作规范 . 北京 :人民卫 生出版社 ,19972 康来仪 . 艾滋病防治手册 . 上海 :上海医