氨基酸的分离鉴定—纸层析法ppt课件

1、氨基酸的分别鉴定纸层析法一、实验目的 掌握氨基酸纸层析的方法和原理，学会分掌握氨基酸纸层析的方法和原理，学会分析待测样品的氨基酸成分。析待测样品的氨基酸成分。 二、实验原理 纸层析是以滤纸为惰性支持物的分配层析。滤纸层析是以滤纸为惰性支持物的分配层析。滤纸纤维上的羟基具有亲水性，吸附一层水作为纸纤维上的羟基具有亲水性，吸附一层水作为固定相，有机溶剂为流动相。当有机相流经固固定相，有机溶剂为流动相。当有机相流经固定相时，物质在两相间不断分配而得到分别。定相时，物质在两相间不断分配而得到分别。 溶质在滤纸上的挪动速度用溶质在滤纸上的挪动速度用RfRf值表示：值表示： Rf=Rf=原点到层析斑点中心

2、的间隔原点到层析斑点中心的间隔/ /原点到溶剂前原点到溶剂前沿的间隔沿的间隔 在一定的条件下某种物质的在一定的条件下某种物质的RfRf值是常数。值是常数。RfRf值值的大小与物质的构造、性质、溶剂系统、层析的大小与物质的构造、性质、溶剂系统、层析滤纸的质量和层析温度等要素有关。本实验利滤纸的质量和层析温度等要素有关。本实验利用纸层析法分别氨基酸。用纸层析法分别氨基酸。 三、实验器材 1 1大烧杯大烧杯5000mL5000mL：1 1只只/ /组组 2 2培育皿：培育皿：1 1只只/ /组。组。 5 5层析滤纸长层析滤纸长20cm20cm、宽、宽12cm12cm的的 滤纸：滤纸：1 1张张/ /

3、组。组。 6 6直尺、铅笔直尺、铅笔 7 7电吹风：电吹风：1 1只只/ /组。组。 8 8托盘、双面胶：托盘、双面胶：1 1套套/ /组。组。 9 9手套：手套：1 1双双/ /组。组。 1010塑料薄膜：公用。塑料薄膜：公用。 1111量筒：量筒：50mL50mL，1 1只只/ /组。组。 四、实验试剂 1 1扩展剂：扩展剂： 将将4 4体积正丁醇和体积正丁醇和1 1体积冰醋酸放入分液漏斗中，体积冰醋酸放入分液漏斗中，与与3 3体积水混合，倒入分液漏斗充分振荡，静置体积水混合，倒入分液漏斗充分振荡，静置后分层，弃去下层水层。再按后分层，弃去下层水层。再按0.1%0.1%浓度的比例浓度的比例

4、参与质量相当的茚三酮。参与质量相当的茚三酮。 2 2氨基酸溶液：氨基酸溶液： 1 1、0.25%0.25%蛋氨酸规范溶液：准确称取蛋氨酸规范溶液：准确称取0.125g 0.125g 蛋蛋氨酸，氨酸， 溶于溶于50mL 50mL 蒸馏中，摇匀、充分溶解。蒸馏中，摇匀、充分溶解。 2 2、0.25%0.25%组氨酸规范溶液：准确称取组氨酸规范溶液：准确称取0.125g 0.125g 蛋蛋氨酸，溶于氨酸，溶于50mL50mL蒸馏水中，摇匀、充分溶解。蒸馏水中，摇匀、充分溶解。 3 3、 0.25%0.25%待测溶液：准确称取待测溶液：准确称取0.125g 0.125g 待测样待测样品，品， 溶于溶于

5、50mL 50mL 蒸馏中，摇匀、充分溶解。蒸馏中，摇匀、充分溶解。 实验试剂 五、实验操作 检查培育皿能否枯燥、干净；假设否，将其洗检查培育皿能否枯燥、干净；假设否，将其洗净并置于枯燥箱内净并置于枯燥箱内120120烘干。烘干。 1 1平衡：剪一大块塑料薄膜铺在桌面上，将平衡：剪一大块塑料薄膜铺在桌面上，将层析缸或大烧杯到置于塑料薄膜上，再把盛有层析缸或大烧杯到置于塑料薄膜上，再把盛有约约20mL20mL展层溶液的小烧杯置于倒置的层析缸或展层溶液的小烧杯置于倒置的层析缸或大烧杯内，用塑料薄膜密封起来，平衡大烧杯内，用塑料薄膜密封起来，平衡20min20min。2规划：带上手套，取规划：带上手

6、套，取宽约宽约12cm、高约、高约20cm的层析滤纸一张。在纸的层析滤纸一张。在纸的下端距边缘的下端距边缘2cm处悄处悄然用铅笔划一条平行于然用铅笔划一条平行于底边的直线底边的直线A，在直线，在直线上做上做3个记号个记号 ，记，记号之间间隔号之间间隔3cm，这就，这就是原点的位置。另在距是原点的位置。另在距左边缘左边缘1cm处画一条平处画一条平行于左边缘的直线行于左边缘的直线B，在在B线上以线上以A、B两线的两线的交点为原点标明刻度交点为原点标明刻度以厘米为单位，参以厘米为单位，参见左图。见左图。 3 3点样：用毛细管将各氨基酸样品分别点在点样：用毛细管将各氨基酸样品分别点在中间中间3 3个记

7、号个记号上，风干后再点一次。每点上，风干后再点一次。每点在纸上分散的直径，最大不超越在纸上分散的直径，最大不超越3 mm3 mm。每人须。每人须点点3 3个样，其中个样，其中2 2个是知样，个是知样，1 1个是待测样品。个是待测样品。 4 4层析：用双面胶将滤纸粘成筒状，点层析：用双面胶将滤纸粘成筒状，点样面向外，纸的两侧边缘不能接触且要坚样面向外，纸的两侧边缘不能接触且要坚持平行，参见图持平行，参见图3-33-3。向培育皿中参与扩展。向培育皿中参与扩展剂，使其液面高度到达剂，使其液面高度到达1cm1cm左右，将点好样左右，将点好样的滤纸筒直立于培育皿中点样的一端在的滤纸筒直立于培育皿中点样的

8、一端在下，扩展剂的液面在下，扩展剂的液面在A A线下约线下约1cm1cm，罩上，罩上大烧杯，仍用塑料薄膜密封。当展开剂上大烧杯，仍用塑料薄膜密封。当展开剂上升到升到8 810cm10cm，取出滤纸，剪断双面胶连线，取出滤纸，剪断双面胶连线，立刻用电吹风热风吹干。立刻用电吹风热风吹干。 5 5显色：用喷雾器显色：用喷雾器在通风厨中向滤纸上在通风厨中向滤纸上均匀喷上均匀喷上0.1%0.1%茚三酮茚三酮正丁醇溶液，然后立正丁醇溶液，然后立刻用热风吹干，即可刻用热风吹干，即可显出各层析斑点，参显出各层析斑点，参见左图。见左图。 6 6计算各种氨基酸的计算各种氨基酸的RfRf值，并判别混合样值，并判别混

9、合样品中都有哪些氨基酸，各人将本人的实验结果品中都有哪些氨基酸，各人将本人的实验结果贴在实验报告上，见表贴在实验报告上，见表3-23-2。 7 7以层析时间为横坐标，扩展剂上升高度以层析时间为横坐标，扩展剂上升高度为纵坐标画图，求出扩展剂上升到为纵坐标画图，求出扩展剂上升到18cm18cm时所需时所需求的时间。求的时间。 8 8将微量注射器内外用蒸馏水清洗干净，将微量注射器内外用蒸馏水清洗干净，倒掉用过的展层液和平衡液，将培育皿洗净，倒掉用过的展层液和平衡液，将培育皿洗净，整理好桌面上的仪器和试剂，并留意清洁本人整理好桌面上的仪器和试剂，并留意清洁本人的操作台，请教师验收，实验报告当场交给教的操作台，请教师验收，实验报告当场交给教师。师。 计算：计算：Rf=Rf=