伊维菌素亚微乳的制备

1、2010,44(6):2729/赵永星,等 中国兽药杂志#27#注射用伊维菌素亚微乳的制备及其稳定性研究赵永星,张雪晓,孙倩,赵阳,刘卫晶,陈五常111112(1.郑州大学药学院,郑州 450001;2.商丘爱已爱牧动物药业有限公司,河南商丘 476312)收稿日期2010-03-22 文献标识码A 文章编号1002-1280(2010)06-0027-03 中图分类号S859.796摘 要 以大豆磷脂S75、注射用大豆油和Poloxamer188为辅料,采用高压匀质法,制备注射用伊维菌素亚微乳。粒度/Zeta电位测定仪测得其粒径、多分散系数和Zeta电位分别为(174.9?8.7)nm、(0

2、.174?0.021)和(-30.9?1.06)mV;加速稳定性试验后,其外观、pH、粒径、电位和药物含量等均符合要求;局部刺激性较普通注射液轻。结果表明,注射用伊维菌素亚微乳制备工艺简单、稳定性好、刺激性小。关键词 伊维菌素;亚微乳;稳定性;局部刺激性StudiesonPreparationandStabilityofIvermectinSubmicronEmulsionforInjectionZHAOYong-xing,ZHANGXue-xiao,SUNQian,ZHAOYang,LIUWei-jing,CHENWu-chang(1.SchoolofPharmaceuticalScienc

3、es,ZhengzhouUniversity,Zhengzhou450001;2.ShangqiuIGMAnimalPharmaceuticalCo.,Ltd,Shangqiu,Henan476312;China)111112Abstract:Ivermectinsubmicronemulsionforinjectionwaspreparedbyhigh-pressurehomogeneoustechniqueandsoybeanphospholipidsS75,soybeanoilandPoloxamer188wereaddedasexcipients.Theparticlesize,pol

4、ydispersityindexandZetapotentialweremeasuredbyparticlesize/Zetapotentialanalyzer.Theparticlesize,polydispersityindexandZetapotentialwas(174.9?8.7)nm,(0.174?0.021),and(-30.9?1.06)mVrespectively.Afteracceleratedstabilitytes,ttheappearance,pH,particlesize,Zetapotentialanddrugcontentofivermectinsubmicro

5、nemulsionsforinjectionaccordedwiththeinjectionstandards.Thelocalirritantofivermectinsubmicronemulsionforinjectionwaslessthantheordinaryone.Theresultsshowedthatthepreparationtechnologyofivermectinsubmicronemulsionforinjectionwassimple,andithadgoodstabilityandsmallirritation.Keywords:ivermectin;submic

6、ronemulsion;stability;localirritation伊维菌素(Ivermectin,IVM)是新型的广谱、高效、低毒抗生素类抗寄生虫药,对体内外寄生虫特别是线虫和节肢动物均有良好驱杀作用。目前,兽医临床应用的伊维菌素制剂体内血药浓度起伏大,常出现/峰谷0现象,导致其安全性和有效性均较低;该制剂体内有效血药浓度维持时间也较短,2-3需要多次重复给药才能达到治疗目的。亚微乳作为一种新型制剂,具有保护被包封药物、载药量大、提高药物稳定性、延长药物作用时间、靶向性1好、毒副作用少等特点,因此,注射用亚微乳具有很好的应用前景。伊维菌素难溶于水,而注射用亚微乳,可作为水溶性差或油溶性

7、药物的载体,增加其溶解度,提高疗效,降低不良反应,且可延长其作用时间。本研究将伊维菌素制备成注射用亚微乳,并对其稳定性、局部刺激性等进行了考察。1 仪器与试药Agilent1100高效液相色谱仪,配G1379A脱气机、G1311A四元梯度泵、G1316A柱温箱和G1315B4作者简介:赵永星(1971年-),博士,副教授,硕士生导师,从事药物新剂型及药物动力学研究。E-mai:lzhaoyx#28# 中国兽药杂志 2010,44(6):2729/赵永星,等二极管阵列检测器(Agilent公司);DiamonsilTMC18色谱柱(4.6mm150mm,5Lm);T-18型高速匀质仪(IKA-w

8、orks广州);Nano-ZS90型激光纳米粒度分析仪(英国马尔文公司);高压微射流纳米分散仪M-110L(美国Microfluidics公司)。伊维菌素(武汉博锐精细化工有限公司,B1a90%,B195%,批号20081226);伊维菌素注射液(山东XX药业有限公司,批号20090726);注射用大豆油(广州汉方现代中药开发研究有限公司,批号001299);大豆卵磷脂S75(SPC,Lipiod公司);泊洛沙姆188(德国BASF公司);甲醇、乙腈为色谱纯,其他试剂均为分析纯。健康清洁级Sprague-Dawle大鼠,雌雄各半,体重(250?20)g,动物许可证号:SCXK(豫)2005-0

9、001,由河南省实验动物中心提供。2 方法与结果2.1 注射用伊维菌素亚微乳的制备 按文献5报道的方法制备。将伊维菌素(1.0%)、SPC(1.2%)、维生素E(0.08%)加入注射用大豆油(10.0%)中,水浴超声溶解,得到油相;将甘油(2.25%)和泊洛沙姆188(2.0%)溶于18mL注射用水中,得到水相;油水两相加热到60e立即混合,高速匀质(15000r/min)5min,用0.1mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至7.2,得到初乳。初乳采用高压微射流纳米分散仪匀质10个循环(匀质压力18000psi),过0.45Lm滤膜,通氮气灌封,于121e高压灭菌15min,得到O/W注射用伊维

10、菌素亚微乳。制备的注射用伊维菌素亚微乳外观均呈白色、不分层、不挂壁、均匀致密,为流动性较好的白色液体,表观无油花。取注射用伊维菌素亚微乳用水适当稀释后,采用粒度/Zeta电位测定仪测得其粒径、多分散系数和Zeta电位分别为(174.9?8.7)nm、(0.174?0.021)和(-30.9?1.06)mV。注射用伊维菌素亚微乳的粒径分布如图1所示。2.2 注射用伊维菌素亚微乳的稳定性2.2.1 伊维菌素含量测定 采用高效液相色谱仪测定。色谱条件:流动相为甲醇B水=90B10,流速1mL/min,柱温30e,检测波长245nm,进样量20LL。取注射用伊维菌素亚微乳液2mL,置200mL容量瓶,

11、加甲醇15mL,涡旋混匀使伊维菌素亚微乳液溶解,用甲醇稀释至刻度,摇匀,过滤。精密量取续滤液20LL,注入液相色谱仪,记录色谱图。按上述方法配制对照品溶液、伊维菌素亚微乳溶液、空白亚微乳溶液,分别注入高效液相色谱仪,记录色谱图(图2)。结果表明,伊维菌素的保留时间为10.9min,亚微乳中的辅料不干扰药物的测定,该方法专属性好。A.空白亚微乳;B.对照品;C.伊维菌素亚微乳图2 伊维菌素色谱图取伊维菌素对照品溶液,用甲醇配制一系列浓度(0.228、0.456、2.28、4.56、9.12、11.4Lg/mL),分别注入高效液相色谱仪,记录峰面积。以峰面积1,/mL),2010,44(6):27

12、29/赵永星,等 中国兽药杂志#29#性回归方程为A=47.055C-0.0361,r=1。表明伊维菌素在0.22811.4Lg/mL范围内有良好的线性关系。采用该方法测定注射用伊维菌素亚微乳液中伊维菌素的平均百分含量为98.8%。2.2.2 加速稳定性试验 根据5兽药稳定性试验技术规范6中药物加速试验的规定进行稳定性试验。将三批注射用伊维菌素亚微乳液置于30e、相对湿度65%的恒温恒湿箱中,于第0、1、2、3和6个月取出样品,考察乳剂的外观、粒径、pH值及亚微乳中药物的含量变化,结果如表1所示。由实验结果可知:注射用伊维菌素亚微乳液稳定性好,各项指标均符合要求。表1 注射用伊维菌素亚微乳液稳

13、定性试验结果(?s,n=3)时间/月01236外观均一乳白色液体,不分层,无油花均一乳白色液体,不分层,无油花均一乳白色液体,不分层,无油花均一乳白色液体,不分层,无油花均一乳白色液体,不分层,无油花pH值6.46?0.266.51?0.286.41?0.336.35?0.326.38?0.21粒径/nm174.9?1.3179.4?3.7186.6?3.6183.8?3.9189.8?2.7含量/%98.899.298.898.398.63 讨论注射用伊维菌素亚微乳制备工艺简单、载药量和稳定性高、质量可控,适合工业化生产,且克服了现有注射剂和脂肪乳剂的缺点。本研究制备的亚微乳粒径控制在纳米级

14、,所以该亚微乳不仅可直接用于肌肉和皮下注射,而且也可用于静脉注射。乳滴间电荷的斥力作用是影响亚微乳稳定性的一个重要因素,乳滴表面荷电量直接影响粒子间斥力势能和溶剂化作用的大小,而乳滴的Zeta电位是乳滴6表面带电情况的表征。当Zeta电位的绝对值为25mV或高于25mV时,乳滴间的斥力超过London吸引力,乳滴分散性高并且体系稳定。本研究制备的亚微乳Zeta电位绝对值为30.9mV,所以该制剂稳定性高。此外,注射用伊维菌素亚微乳可较好地增加药物的溶解性,延长药物在体内的作用时间,并且具有缓控释、提高药物的治疗效果、降低毒副等作用。参考文献:1 蒲文兵,杨帆,宋刚华,等.伊维菌素(维力加)注射

15、液对羊体内外寄生虫的驱虫试验J.中国动物传染病学报,2009,17(1):54-57.2 赵永星,赵阳,刘卫晶,等.注射用伊维菌素亚微乳液:中国,201010114739.7P.2010-02-26.3 伍冶,金中辉,赵宝凯,等.兽用可注射缓释制剂研究进展J.中国兽药杂志,2009,43(4):42-46.4 ZhaoYX,GaoJQ,SunXY,etal.EnhancedNuclearDeliveryandCytotoxicActivityofHydroxycamptothecinUsingO/WEmu-lsionsJ.JPharmPharmSc,i2007,10(1):61-70.5 华海

16、婴,刘琳,赵永星,等.紫苏醇亚微乳的制备及其RP-HPLC定量方法的研究J.中国医药工业杂志,2008,39(6):447-450.6 WashingtonC.TheElectrokineticPropertiesofPhospholipidSta-bilizedFatEmulsionsVI.ZetaPotentialsofIntralipid20%inTPNMixturesJ.IntJPharm,1992,87(1/3):167-174.7 RolandI,PielG,DelattreL,etal.SystematicCharacterizationofOil-in-waterEmulsionsforFormulationDesignJ.Pharm,2003,263(1/2):85-94.IntJ72.3 注射用伊维菌素亚微乳的局部刺激性试验根据兽药5实验临床试验技