唾液淀粉酶活性的观察实验报告范文

1、唾液淀粉酶活性的观察实验报告范文篇一：唾液淀粉酶活性观察实验报告2 唾液淀粉酶活性观察实验报告一、实验目的1. 了解环境因素对酶活性的影响及酶的高效性；2. 掌握酶定性分析的方法和注意事项。二、基本原理1. 酶是生物催化剂，具有极高的催化效率，其催化效率比一般催化剂高1061013在生物体内过氧化氢酶能催化 H2O2分解成H20和02,铁粉地H2O2分解也有催化作用，但其效率远低于酶。2. 酶的活性受温度的影响。在一定的温度范围内,温度升高,酶 的活性也会增大。当到了最大值后,此时温度为酶的最适温度,由于 温度过高,酶开始失活,导致酶的效率降低,最后完全失活。3酶的活性受PH值的影响。酶在一定

2、范围的PH值下才有活性， 高于或低于最适PH,都会使酶的活性降低。4. 酶活性常受到某些物质的影响。有些物质能使酶的活性增加, 称为激活剂,有些物质能使酶的活性降低,称为抵制剂。5. 碘液指示淀粉水解程度的不同色变化： 淀粉淀粉酶紫色糊精淀粉酶暗褐糊精淀粉酶红色糊精淀粉酶麦芽糖 +少量葡萄糖 加碘后：蓝色 紫红色 暗褐色红棕色 黄色三、试剂与器材篇二：唾液淀粉酶活性的测定影响唾液淀粉酶活性的研究 摘要：讨论了不同条件下唾液淀粉酶的活性差异， 实验结果表明， 影响唾液淀粉酶活性的因素很多， 必须在适宜的条件下， 才能发挥最佳催化作 用；淀粉酶具有高度专一性，其活性受温度、pH值、激活剂及抑制剂、

3、酶浓度 以及作用时间等多种因素的影响； 每个人产生唾液淀粉酶的量不同， 活性强弱也有 差异。关键词：淀粉酶；活性；温度；抑制剂；激活剂；专一性2 影响唾液淀粉酶的活性的因素（一）实验目的观察淀粉在水解过程中遇碘后溶液颜色的变化。观察温度、pH、激活剂与抑制剂对唾液淀粉酶活性的影响。（二）实验原理人唾液中淀粉酶为a -淀粉酶，在唾液腺细胞中合成。在唾液淀 粉酶的作用下，淀粉水解， 经过一系列被称为糊精的中间产物，最后 生成麦芽糖和葡萄糖。变化过程如下：淀粉t紫色糊精t红色糊精t麦芽糖、葡萄糖淀粉、紫色糊精、红色糊精遇碘后分别呈蓝色、紫色与红色、麦 芽糖和葡萄糖遇碘不变色。淀粉与糊精无还原性，或还

4、原性很弱，对班氏试剂呈阴性反应。 麦芽糖与葡萄糖是还原性糖， 与班氏试剂共热后生成红棕色氧化亚铜 的沉淀。唾液淀粉酶的最适温度为 37-40° C,最适pH为68偏离此最适 环境时，酶的活性减弱。低浓度的CI-离子能增加淀粉酶的活性，是它的激活剂。Cu2+等 金属离子能降低该酶的活性，是它的抑制剂。（三）器材及试剂1、器材：试管、酒精灯、烧杯、恒温水浴锅、量筒、冰浴、玻 璃棒、试管夹、白磁板、试管架、铁三脚架、唾液淀粉酶2、 试剂：1%淀粉溶液、碘液、班氏试剂、0.4%HCI溶液、0.1% 的乳酸溶液、1% NaCI溶液、1% CuSO4溶液、0.1%淀粉溶液（四）操作步骤1、 淀粉

5、酶活性的检测：取一只试管，注入1 %淀粉溶液5mL与 稀释的唾液0.5-2mL。混匀后插入1支玻璃棒，将试管连同玻璃棒置 于37° C水浴中。不是的用玻璃棒从试管中取出1滴溶液，滴加在白 磁板上，随即滴加 1 滴碘液，观察溶液呈现的颜色。此实验延续至溶 液仅表现碘被稀释后的微黄色为止。 记录淀粉在水解过程中， 遇碘后 溶液颜色的变化。向上面的剩余溶液中加2mL班氏试剂，放入沸水中加热10分钟 左右，观察现象2、pH对酶活性的影响：取4支试管，分别加入0.4%盐酸、0.1% 乳酸、蒸馏水与1 %碳酸钠各2mL,再向以上四支试管中各加2mL1% 淀粉溶液及 2mL 淀粉酶试剂，在沸水浴中

6、加热，根据生成红棕色沉 淀的多少，说明淀粉水解的强弱。3、温度对酶活性的影响：取3支试管，各加3mL1%淀粉溶液； 另取3支试管，各加1mL淀粉酶液。将此6支试管分为3组，每组 中盛淀粉溶液与淀粉酶液的试管各 1 支，三组试管分别置于 0°C、 37° C与70° C的水浴中。5分钟后，将各组中的淀粉溶液倒入淀粉 酶液中，继续维持原温度条件 5min后，立即加2滴碘液，观察溶液 颜色的变化。根据观察结果说明温度对 酶活性的影响。4、激活剂与抑制剂对酶活性的影响：取 3 支试管，按下表加入 各种试剂。混匀后，置于37° C水浴中的保温。从1号试管中用玻璃

7、棒取出 1 滴溶液，置于白磁板上用碘液检查淀粉的水解程度。 待1 号 试管内的溶液遇碘不再变色后， 立即取出所有的试管， 各加碘液 2滴， 观察溶液颜色的变化，并解释之。1.加入班氏试剂后2.PH 值对酶活性影响： 1 号深红色， 2 号为红棕色， 3 号为砖红 色，4号为偏蓝。因为PH= 1时，超出了淀粉酶有效PH范围，使得 酶完全失活，淀粉没有被分解。2号是因为PH=5时，不是淀粉酶的 最适范围。 3号是因为 PH7时，为淀粉酶分解的最适PH,淀粉被酶迅速分解生成麦芽糖和 葡萄糖。而4号则是因为PH= 9超出了淀粉酶的适宜PH,活性受到 或者是部分失活，使淀粉分解较慢。3. 温度对酶的影响

8、： 1号显紫红色， 2号为淡黄色， 3号为深蓝色。 当温度为 0 度时，蛋白质分子的热运动减慢， 即酶分子的活性受到了 抑制，使酶的活性降低了，淀粉分解减慢，生成紫红色的糊精； 2 号 处于 37 度，接近人体温度，酶的活化性能较高，淀粉被分解成麦芽 糖和葡萄糖就越快，所以是淡黄色，而当温度为 70 度时，由于酶是蛋白质，遇到高温时会失活，所以淀粉 没有被分解。4. 激活剂和抑制剂对酶的影响： 3 号作为对照实验组， 显红棕色， 1号显浅黄色，2号显深蓝色。因为在1号溶液中，NaCI对酶的活性 在增加作用， 激活了淀粉酶， 淀粉酶迅速把淀粉分解成麦芽糖和葡萄 糖，滴加碘液时，溶液显浅黄色，而对

9、照组显示红棕色，表明淀粉被 分解成了糊精，在 1 号中，溶液中的淀粉没有被分解遇碘变蓝，通过 对比 1 和3号， 2 和 3号，由颜色的变化，判断淀粉水解程度为 1<3<2, 说明了 NaCI具有激活作用，CuSO4具有抑制作用。结论：酶催化特定化学反应的蛋白质、RNA或其复合体。是生物催化剂， 能通过降低化学反应的活化能加快反应速率，但不改变反应的平衡点。绝大多数酶的化篇三：淀粉酶活性测定实验报告淀粉酶活性的测定一、研究背景及目的 酶是高效催化有机体新陈代谢各步反应的活性蛋白， 几乎所有的 生化反应都离不开酶的催化， 所以酶在生物体内扮演着极其重要的角 色，因此对酶的研究有着非常

10、重要的意义。 酶的活力是酶的重要参数， 反映的是酶的催化能力， 因此测定酶活力是研究酶的基础。 酶活力由 酶活力单位表征， 通过计算适宜条件下一定时间内一定量的酶催化生 成产物的量得到淀粉酶是水解淀粉的糖苷键的一类酶的总称， 按照其水解淀粉的 作用方式，可分为a -淀粉酶和B -淀粉酶等。a -淀粉酶和B -淀粉酶 是其中最主要的两种，存在于禾谷类的种子中。B-淀粉酶存在于休眠的种子中，而a -淀粉酶是在种子萌发过程中形成的。a -淀粉酶活性是衡量小麦穗发芽的一个生理指标,a -淀粉酶活性低的品种抗穗发芽，反之则易穗发芽。目前，关于a -淀粉酶活性的测 定方法很多种，活力单位的定义也各不相同，

11、国内外测定a -淀粉酶活 性的方法常用的有凝胶扩散法、 3 ,5-二硝基水杨酸比色法和降落值 法 。这 3 种方法所用的材料分别是新鲜种子、 萌动种子和面粉 ,获得 的a -淀粉酶活性应该分别是延二、实验原理萌发的种子中存在两种淀粉酶，分别是a -淀粉酶和B -淀粉酶，B -淀粉酶不耐热，在高温下易钝化，而a -淀粉酶不耐酸，在 pH3.6下则发生钝化。本实验的设计利用B -淀粉酶不耐热的特性，在高温 下（70C）下处理使得B -淀粉酶钝化而测定a -淀粉酶的酶活性。酶活性的测定是通过测定一定量的酶在一定时间内催化得到的 麦芽糖的量来实现的，淀粉酶水解淀粉生成的麦芽糖，可用3,5-二硝基水杨酸

12、试剂测定， 由于麦芽糖能将后者还原生成硝基氨基水杨酸的 显色基团，将其颜色的深浅与糖的含量成正比， 故可求出麦芽糖的含 量。常用单位时间内生成麦芽糖的毫克数表示淀粉酶活性的大小。 然 后利用同样的原理测得两种淀粉酶的总活性。 实验中为了消除非酶促 反应引起的麦芽糖的生成带来的误差， 每组实验都做了相应的对照实 验，在最终计算酶的活性时以测量组的值减去对照组的值加以校正。在实验中要严格控制温度及时间， 以减小误差。 并且在酶的作用 过程中，四支测定管及空白管不要混淆。三、材料、试剂与仪器实验材料：萌发的小麦种子（芽长 1 厘米左右） 仪器：722光栅分光光度计 （编号 990695）DK-S24

13、型电热恒温水浴锅（编号L-304056）离心机（TDL-40B）容量瓶：50ml x 1, 100ml x 1小台秤 研钵具塞刻度试管：15ml x 6试管：8支 移液器 烧杯 试剂： 1%淀粉溶液（称取 1 克可溶性淀粉，加入 80ml 蒸馏水，加 热熔解，冷却后定容至100ml）;pH5.6的柠檬缓冲液：A液（称取柠檬酸20.01克，溶解后定容至1L） B液（称取柠檬 酸钠 29.41 克，溶解后定容至 1L）取A液5.5ml、B液14.5ml混匀即为pH5.5柠檬酸缓冲液； 3，5-二硝基水杨酸溶液（称取 3，5-二硝基水杨酸 1.00 克， 溶于 20ml 1M 氢氧化钠中，加入 50

14、ml 蒸馏水，再加入 30 克酒石酸 钠，待溶解后，用蒸馏水稀释至100ml，盖紧瓶盖保存）； 麦芽糖标准液（称取 0.100 克麦芽糖，溶于少量蒸馏水中， 小心移入 100ml 容量瓶中定容）； 0.4M NaOH四、实验步骤1. 酶液的制备称取 2 克萌发的小麦种子与研钵中， 加少量石英砂，研磨至匀浆， 转移到 50ml 容量瓶中用蒸馏水定容至刻度，混匀后在室温下放置， 每隔数分钟振荡一次，提取 15-20分钟，于 3500转/分离心 20分钟， 取上清液备用。2. a -淀粉酶活性的测定 取 4 支管，注明 2 支为对照管，另 2 支为测定管 于每管中各加酶提取液液1ml,在70C恒温水

15、浴中（水浴温 度的变化不应超过士 0.5C）准确加热15min，在此期间B -淀粉酶钝 化，取出后迅速在冰浴中彻底冷却。 在试管中各加入1ml柠檬酸缓冲液 向两支对照管中各加入4ml 0.4M NaOH,以钝化酶的活性 将测定管和对照管置于40C （士 0.5C）恒温水浴中准确保温 15min再向各管分别加入40C下预热的淀粉溶液2ml，摇匀，立即放 入40C水浴中准确保温5min后取出，向两支测定管分别迅速加入4ml0.4M NaOH,以终止酶的活性，然后准备下步糖的测定。3.两种淀粉酶总活性的测定取上述酶液 5ml 于 100ml 容量瓶中， 用蒸馏水稀释至刻度 （稀释 倍数视样品酶活性大

16、小而定， 一般为 20 倍）。混合均匀后， 取 4 支管， 注明 2 支为对照管， 另 2 支为测定管， 各管加入 1ml 稀释后的酶液及 pH5.6柠檬酸缓冲液1ml,以下步骤重复a -淀粉酶测定的第及第 的操作。4. 麦芽糖的测定 标准曲线的制作取15ml具塞试管7支，编号，分别加入麦芽糖标准液（1mg/ml）0、 0.1、0.3、0.5、0.7、0.9、1.0毫升，用蒸馏水补充至 1.0ml，摇匀后 再加入3，5-二硝基水杨酸1ml，摇匀，沸水浴中准确保温5min，取 出冷却，用蒸馏水稀释至15ml，摇匀后用分光光度计于520nm波长 下比色，记录消光值，以消光值为纵坐标，以麦芽糖含量为

17、横坐标绘 制标准曲线。 样品的测定取 15ml 具塞试管 8支，编号，分别加入步骤 2 和 3中各管的溶 液各1ml，再加入3, 5-二硝基水杨酸1ml，摇匀，沸水浴中准确煮沸 5min，取出冷却，用蒸馏水稀释至15ml，摇匀后用分光光度计于520nm 波长下比色，记录消光值，根据标准曲线进行结果计算。五、数据整理及计算上表中前 4行数据为实验的原始数据。 以表中前两行数据绘制标 准曲线（见下页），计算上表中第4行数据（各样品的OD值）均值， 填入上第5行中，根据标准曲线的方程，计算第 5行OD值所对应的 麦芽糖浓度，填入最后一行，如上表。根据以上的数据整理的结果， 结合以下公式计算两种淀粉酶

18、的活 性：淀粉酶活性（毫克麦芽糖克1鲜重分钟 1）（ A A' ）样品稀释总体积样品重（ g） 5（B B'）样品稀释总体积淀粉酶活性（毫克麦芽糖克 1 鲜重分钟 1 ）样品重（ g） 5A a -淀粉酶测定管中的麦芽糖浓度A' a -淀粉酶对照管中的淀粉酶的浓度B （a -+ B -）淀粉酶总活性测定管中的麦芽糖浓度B' （a-+ B -）淀粉酶总活性对照管中的麦芽糖浓度计算结果如下：a -淀粉酶活性（毫克麦芽糖克 -1 鲜重分钟 -1 ）（a -+ B -）淀粉酶活性（毫克麦芽糖克-1鲜重分钟-1） （3 -淀粉酶 活性-1 鲜重分钟 -1）六、结果分析七、

19、思考题1、酶活力测定实验的总体设计思路是什么？实验设计的关键你 认为是什么？为什么？ 答：利用酶的专一性或酶活力的影响因素抑 制除待测酶以外的其它酶活性， 通过测酶促反应的产率推算酶活力大 小。关键在于抑制其它酶的活力而不影响测定酶， 这样可以减小或避 免其它酶产物给测定结果带来的误差。2、本实验最易产生对结果有较大误差影响的操作是哪些步骤？ 为什么？怎样的操作策略可以尽量减少误差？答：浸提步骤。70C温度或15min时间控制不严格不准确则可 能导致B淀粉酶未完全钝化使测得活性偏大。应严格控制温度和时 间。70C水浴后需要立即冰浴，否则B淀粉酶复性使测得a淀粉酶 活性结果偏大。向测定管中加入

20、NaOH时应迅速，否则酶与底物继 续反应使结果偏大。3、-淀粉酶活性测定时70C水浴为何要严格保温15分钟？保温 后为何要立即于冰浴中骤冷？答：由于-淀粉酶不耐热，在70C下处理一定时间可以钝化，严 格保温 15 分钟可以达到理想的钝化效果，时间过长， -淀粉酶活性也 会受到影响；时间不足， -淀粉酶钝化不完全。保温后立即骤冷是为 了通过剧烈的温变改变 -淀粉酶的结构以防止在随后的反应中复性， 这样就保证了在随后的40C温浴的酶促反应中-淀粉酶不会再参与催 化反应。此外我认为冰浴使酶迅速降温， 便于严格控制高温处理时间 的长短。4、pH5.6柠檬酸缓冲液的作用？各管于 40C水浴准确保温15分

21、 钟的作用？答：酶实验体系的 pH 值变化或变化过大，会使酶活性下降甚至 完全失活。加入pH5.6的缓冲液调至酶促反应的最适 pH,同时稳定溶液的pH不至于在反应过程中大幅波动。40C水浴准确保温15分钟为调整酶促反应的最适温度5、众多测定淀粉酶活力的实验设计中一般均采取钝化 -淀粉酶的 活力而测 -淀粉酶和测总酶活力的策略，为何不采取钝化 -淀粉酶活力 去测-淀粉酶活力呢？这种设计思路说明什么？答：B淀粉酶与a淀粉酶的催化特性是有差异的。B淀粉酶主要作用于直链淀粉的a -1 , 4-糖苷键，而且仅从淀粉分子外围的非还原 性末端开始，切断至a -1,6-键的前面反应就停止了；而a淀粉酶则无 差别地作用于直链淀粉与支链淀粉的a -1, 4-糖苷键，所以B淀粉酶 需要a淀粉酶淀粉