常用贮液与溶液

1、.常用贮液与溶液1mol/L 亚精胺 （Spermidine ）: 溶解 2.55g 亚精胺于足量的水中， 使 终体积为10ml。分装成小份贮存于-20 C。1mol/L 精胺（ Spermine ）：溶解 3.48g 精胺于足量的水中，使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20 C。10mol/L 乙酸胺（ ammonium acetate ）：将 77.1g 乙酸胺溶解于水 中，加水定容至 1L 后，用 0.22um 孔径的滤膜过滤除菌。10mg/ml牛血清蛋白（BSA）:加100mg的牛血清蛋白（组分 V或分 子生物学试剂级，无 DNA 酶）于 9.5ml 水中（为减少变性， 须将蛋白加

2、入水中，而不是将水加入蛋白），盖好盖后，轻轻摇动， 直至牛血清蛋白完全溶解为止。不要涡旋混合。加水定容到 10ml， 然后分装成小份贮存于-20 C。1mol/L 二硫苏糖醇（ DTT） :在二硫苏糖醇 5g 的原装瓶中加 32.4ml水，分成小份贮存于-20 C。或转移100mg的二硫苏糖醇 至微量离心管，加 0.65ml 的水配制成 1mol/L 二硫苏糖醇溶液。8mol/L 乙酸钾（ potassium acetate ）:溶解 78.5g 乙酸钾于足量的 水中，加水定容到 100ml 。1mol/L氯化钾（KCl）:溶解7.46g氯化钾于足量的水中，加水定容 到 100ml 。3mol

3、/L 乙酸钠( sodium acetate )：溶解 40.8g 的三水乙酸钠于约90ml 水中，用冰乙酸调溶液的 pH 至 5.2，再加水定容到 100ml 。0.5mol/L EDTA:配制等摩尔的 Na2EDTA 和 NaOH 溶液(0.5mol/L ), 混合后形成EDTA的三钠盐。或称取186.1g的Na2EDTA 2H2O和20g的NaOH,并溶于水中，定容至1L。1mol/L HEPES :将 23.8gHEPES 溶于约 90ml 的水中，用 NaOH 调 pH( 6.8-8.2 )，然后用水定容至100ml。1mol/L HCl :加 8.6ml 的浓盐酸至 91.4ml

4、的水中。25mg/ml IPGT :溶解250mg的IPGT (异丙基硫代-伕D-半乳糖苷)于10ml水中，分成小份贮存于-20 C。1mol/LMgCI2:溶解20.3g MgCI2 6H2O于足量的水中，定容到100ml。100mmol/L PMSF :溶解174mg的PMSF (苯甲基磺酰氟)于足量的异丙醇中，定容到10ml。分成小份并用铝箔将装液管包裹或贮存于-20 C。20mg/ml 蛋白酶 K(proteinase K ):将 200mg 的蛋白酶 L 加入到9.5ml水中，轻轻摇动，直至蛋白酶 K完全溶解。不要涡旋混合。加 水定容到10ml，然后分装成小份贮存于-20 C。10m

5、g/mlRnase （无 DNase）（ DNasefree RNase ）：溶解 10mg的胰蛋白RNA酶于1ml的10mmol/L的乙酸钠水溶液中（pH 5.0 ）。 溶解后于水浴中煮沸15min ,使DNA酶失活。用1mol/L的Tris HCl调pH至7.5，于-20 C贮存。（配制过程中要戴手套）5mol/L氯化钠（NaCI）:溶解29.2g氯化钠于足量的水中，定容至 100ml 。10N氢氧化钠（NaOH）:溶解400g氢氧化钠颗粒于约0.9L水的烧 杯中（磁力搅拌器搅拌），氢氧化钠完全溶解后用水定容至1L。10 % SDS（十二烷基硫酸钠）：称取100gSDS慢慢转移到约含0.9

6、L 的水的烧杯中，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。用水定容至 1L。2mol/L 山梨（糖）醇（ Sorbitol ）:溶解 36.4g 山梨（糖）醇于足量 水中使终体积为 100ml 。100 %三氯乙酸（TCA）:在装有500gTCA的试剂瓶中加入100ml水， 用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。（稀释液应在临用前配制）2.5 % Xgal （5-溴-4-氯-3-吲哚一怜半乳糖苷）：溶解25mg的X gal 于 1ml 的二甲基甲酰胺（ DMF） ,用铝箔包裹装液管，贮存于-20 C。100 xDenhardt 试剂(Denhardt's regent )成分及终浓度配制100ml溶液各

7、成分的用量2% 聚蔗糖（Ficoll, 400 型）2%聚乙烯吡咯烷酮（PVP-40）2%BSA （组分 V）水2g2g2g加水至总体积为100ml依照上表称取各组分，溶于水中定容。过滤除菌及杂质，分装成小份于-20 C贮存。10 x标准 DNA 连接酶缓冲液（standard DNA ligase buffer ）（粘端、平端连接）配制10ml溶液各成分的用成分及终浓度旦量0.5mol/L Tris-HCl5ml 1mol/L 贮液100mmol/L MgCI21ml 1mol/L 贮液100mmol/L DTT1ml 1mol/L 贮液2mmol/L ATP200ul 100 mmol/L

8、 贮液5mmol/L盐酸亚精胺（可选）50ul 1 mmol/L 贮液0.5mg/ml BSA （组分 V）（可选）0.5ml 10 mg/mL 贮液水2.25ml将配制好的缓冲液分装成小份，贮存于-20 C100 mmol/L dNTP 溶液(dNTP solutions )可以购买到100mmol/L纯dNTPs贮液，-80 C可贮存至少6个月10mmol/L dNTP 混合液成分及终浓度配制20ul溶液各成分的用量10mmol/L dATP2ul 100 mmol/L dATP 贮液10mmol/L dCTP2ul 100 mmol/L dCTP 贮液10mmol/L dGTP2ul 1

9、00 mmol/L dGTP 贮液10mmol/L dTTP2ul 100 mmol/L dTTP 贮液水12ul20 % PEG 8000/2.5M NaCl成分及终浓度配制10ml溶液各成分的用量质量浓度为20 %聚乙二20g醇50ml 5 mol/L 氯化钠 或14.6g固体2.5mol/L氯化钠氯化钠水补足100ml加聚乙二醇于含有氯化钠的烧杯中， 加水至终体积100ml，用磁力搅拌器搅拌溶解。20 XSSC成分及终浓度配制1L溶液各成分的用量300mmol/L 柠檬酸三钠（二水）3mol/L氯化钠水88.2g175.3g补足1L溶解柠檬酸三钠（二水）和氯化钠于约0.9L水中，加几滴1

10、0N NaOH 溶液调pH为7.0，用水补足体积至1L。DEPC （焦碳酸二乙酯）处理水加100ul DEPC于100ml水中，使DEPC的体积分数为0.1 %。在37 C温浴至少12h，然后在15 psi条件下高压灭菌20min，以使残 余的DEPC失活。DEPC会与胺起反应，不可用DEPC处理Tris缓冲 液。甲酰胺（deionized formamide ）直接购买或加Dowex XG8混合树脂于装有甲酰胺的玻璃烧杯中，用 磁力搅拌器轻轻搅拌1h，可去除甲酰胺中的离子。经 Whatman 1号 滤纸过滤除去树脂后分成小份，充氮气于-80 C贮存（防止氧化）。磷酸缓冲液（phosphate

11、 buffer ）按照下表所给定的体积，混合1 mol/L的磷酸二氢钠（单碱）和1mol/L 磷酸氢二钠（双碱）贮液，获得所需pH的磷酸缓冲液。配制1 mol/L 的磷酸二氢钠（NaH2PO4H2O）贮液：溶解138g于足量水中，使终体积为1L;1mol/L磷酸氢二钠（Na2HPO4）贮液：溶解142g于足量水中使终体积为1L1mol/L磷酸二氢钠（ml）1mol/L磷酸氢二钠（ml）最终pH值8771236.08501506.18151856.27752256.37352656.46853156.56253756.65654356.75104906.84505506.93906107.033

12、06707.12807207.2TE （用于悬浮和贮存DNA）成分及终浓度配制100ml溶液各成分的用量10mmol/L Tris HCl1mmol/L EDTA水1ml 1mol/L Tris-HCl (pH7.4-8.0 ,25 °C)200ul 0.5 mol/L EDTA (pH 8.0 )98.8mlTris 缓冲液（Tris-HCI buffer ）将121g的Tris碱溶解于约0.9L水中，再根据所要求的pH （25 C下） 加一定量的浓盐酸（11.6N），用水调整终体积至1L。浓盐酸的体积（ml）pH8.69.0148.8218.628.58.4388.2468.05

13、67.8667.671.37.4767.2】.电泳缓冲液、染料和凝胶加样液电泳缓冲液50 XTris-乙酸（TAE）缓冲液成分及终浓度配制1L溶液各成分的用量2mol/L Tris 碱1mol/L乙酸100 mmol/L EDTA水242g57.1 ml的冰乙酸(17.4mol/L )200ml 的 0.5 mol/L EDTA(pH 8.0)补足1L5 XTris-硼酸(TBE)缓冲液成分及终浓度配制1L溶液各成分的用量445 mmol/L Tris 碱445 mmol/L 硼酸盐10 mmol/L EDTA水54g27.5g硼酸20 ml 的 0.5 mol/L EDTA (pH8.0)补

14、足1L染料1%溴酚蓝(bromophenol blue )加1g水溶性钠型溴酚蓝于100ml水中，搅拌或涡旋混合直到完全溶解。1 %二甲苯青 FF(xylene cyanole FF)溶解1g二甲苯青FF于足量水中，定容到100ml10mg/ml 的溴化乙锭（ethidium bromide ）小心称取1g溴化乙锭，转移到广口瓶中，加100ml水，用磁力搅拌器搅拌直到完全溶解。用铝箔包裹装液管，于4C贮存。凝胶上样液（gel loading solutions ）6 x碱性凝胶上样液（室温贮存）成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量0.3 N氢氧化钠6 mmol/L EDTA18 %聚蔗糖（4

15、00型）0.15 %溴甲酚绿0.25 %二甲苯青FF水300ul 10N氢氧化钠120ul0.5mol/LEDTA(pH8.0 )1.8g15mg25mg补足到10ml6 x聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存）成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量0.15 %溴酚蓝0.15 %二甲苯青FF5 mmol/L EDTA15 %聚蔗糖（400型）水1.5ml 1 %溴酚蓝1.5ml 1 %二甲苯青 FF100ul0.5mol/LEDTA(pH8.0 )1.5g补足到10ml6 x溴酚蓝/二甲苯青/聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存）成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量0.25 %溴酚蓝2.5ml 1 %溴酚蓝0.

16、25 %二甲苯青FF2.5ml 1 %二甲苯青 FF15 %聚蔗糖（400型）1.5g水补足到10ml6 X甘油凝胶上样液（4 C贮存）成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量0.15 %溴酚蓝0.15 %二甲苯青FF5 mmol/L EDTA50 %甘油水1.5ml 1 %溴酚蓝1.5ml 1 %二甲苯青 FF100ul0.5mol/LEDTA(pH8.0 )3ml3.9ml6 X蔗糖凝胶上样液（室温贮存）成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量0.15 %溴酚蓝0.15 %二甲苯青FF5 mmol/L EDTA40 %聚蔗糖水1.5ml 1 %溴酚蓝1.5ml 1 %二甲苯青 FF100ul0

17、.5mol/LEDTA(pH8.0 )4g补足到10ml10 X十_烷基硫酸钠/甘油凝胶上样液（室温贮存）成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量0.2 %溴酚蓝20mg0.2 %二甲苯青FF20mg200 mmol/L EDTA4ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)0.1 % SDS100ul 10 % SDS50 %甘油5ml水补足到10ml三.常用培养基LB培养基将下列组分溶解在0.9L水中:蛋白胨10g酵母提取物5g氯化钠10g如果需要用1N NaOH （1ml）调整pH至7.0，再补足水至1L。注: 琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。SOB培养基

18、将下列组分溶解在0.9L水中：蛋白胨20g酵母提取物5g氯化钠0.5g1 mol/L氯化钾2.5ml用水补足体积到1L。分成100ml的小份，高压灭菌。培养基冷却到 室温后，再在每100ml的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁。SOC培养基成分、方法同SOB培养基的配制，只是在培养基冷却到室温后，除 了在每100ml的小份中加1ml灭过菌的1mol/L氯化镁外，再加2ml 灭菌的1mol/L葡萄糖（18g葡萄糖溶于足够水中，再用水补足到100ml，用0.22um的滤膜过滤除菌）。TB培养基将下列组分溶解在0.9L水中：蛋白胨12g酵母提取物24g甘油4ml各组分溶解后高压灭菌。冷却到60

19、C,再加100ml灭菌的170mmol/LKH2PO4/0.72 mol/L K2HPO4 的溶液（2.31g 的 KH2PO4 禾口12.54gK2HPO4溶在足量的水中，使终体积为100ml。高压灭菌或用0.22um的滤膜过滤除菌）。2 XYT培养基将下列组分溶解在0.9L水中:蛋白胨16g酵母提取物10g氯化钠4ml如果需要用1N NaOH (1ml)调整pH至7.0，再补足水至1L。注: 琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。YPD培养基将下列组分溶解在0.9L水中:蛋白胨20g酵母提取物10g葡萄糖20g 1用水补足体积为1L后，高压灭菌。建议在高压灭菌之前，对色氨酸 营养缺陷型每升培养基添加1.6g色氨酸，因为YPD培养基是色氨酸 限制型培养基。为了配制平板，需要在高压灭菌前加入20g琼脂粉。四.常用抗生素氨苄青霉素(ampicillin)( 100mg/ml)溶解1g氨苄青霉素钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小 份于-20 C贮存。常以25ug/ml 50ug/ml的终浓度添加于生长培养 基。羧苄青霉素( carbenicillin )(50mg/ml )溶解0.5g羧苄青霉素二钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20 C贮存。常以25ug/ml 50ug/ml的终浓度添加于生长 培养基。