食品中环己基氨基磺酸钠(甜蜜素)的测定（一）

1、食品中环己基氨基磺酸钠(甜蜜素)的测定（一） gb 5009.97-2016规定了食品中环己基氨基磺酸钠测定的三种办法，包括气相色谱法、液相色谱法和液相色谱-质谱/质谱法。 (一)气相色谱法 气相色谱法适用于饮料类、蜜饯凉果、果丹类、话化类、带壳及脱壳熟制坚果与籽类、水果罐头、果酱、糕点、面包、饼干、冷冻饮品、果冻、复合调味料、腌渍蔬菜、腐乳等食品中的测定。气相色谱法不适用于白酒中该化合物的测定。 1.测定原理 食品中用水提取，在介质中与亚硝酸反应，生成环己醇亚硝酸酯，利用气相色谱氢火焰离子化检测器举行分别及分析，保留时光定性，外标法定量。 2试剂和仪器 (1)试剂 正庚烷ch3(ch2)5c

2、h3、(nacl)、：沸程为3060。 (naoh)溶液：40g/l。 溶液：200g/l。 k4fe(cn)6·3h2o 溶液：150g/l。称取折合15g，溶于水并稀释至100ml，混匀。 硫酸锌(znso4·7h2o)溶液：300g/l。称取折合30g，溶于水并稀释至100 ml，混匀。 (nano2)溶液：50g/l。称取25g，溶于水并稀释至500ml,混匀。 标准储备液(5.00mg/ml )：精确称取0.5612g环己基氨基磺酸钠标准品(纯度99%)，加水溶解并定容至100ml，此溶液1.00ml相当于环己基氨基磺酸5.00mg。置于14冰箱中保存，可保存12

3、个月。 环己基氨基磺酸钠标准用法液(1.00mg/ml )：精确移取20.0ml环己基氨基磺酸钠标准储备液用水稀释并定容至100ml。置于14冰箱中可保存6个月。 (2)仪器及设备 气相色谱仪(配氢火焰离子化检测器)。 涡旋混合器，离心机(转速)4000r/min)，超声波振荡器，样品粉碎机，10ul微量注射器，恒温水浴锅，天平(感量1 mg, 0.1mg)。 3.测定步骤 (1)取样及样品处理 液体试样：一般液体试样：摇匀后称取25.0g试样(如需要可过滤)，用水定容至50ml备用。 含co2的试样：称取25.0g试样于烧杯中，60水浴加热30min以除去co2，放冷，用水定容至50ml备用

4、。 含酒精的试样：称取25.0g试样于烧杯中，用naoh溶液调至弱碱性ph 78, 60水浴加热30min以除去酒精，放冷，用水定容至50ml备用。 固体、半固体试样：低脂、低蛋白样品(果酱、果冻、水果罐头、果丹类、蜜饯凉果类、浓缩果汁、面包、糕点、饼干、复合调味料、带壳熟制坚果和籽类、腌渍蔬菜等)：称取打碎、混匀的样品3.005.00g于50ml离心管中，加30ml水，振摇，超声提取20min,混匀，离心(3000r/min) 10min，过滤，用水分次洗涤残渣，收集滤液并定容至50ml，混匀备用。 高蛋白、高脂样品(酸乳、雪糕、冰淇淋等奶制品及豆制品、腐乳等)：冰棒、雪糕、冰淇淋等分离放置

5、于250 ml烧杯中，待溶化后搅匀，称取样品3.005.00g于50ml离心管中，加30ml水，超声提取20min，加2ml亚铁氰化钾溶液混匀，再加入2ml硫酸锌溶液，混匀，离心(3000r/min)10min，过滤，用水分次洗涤残渣，收集滤液并定容至50 ml ,混匀备用。 高脂样品(奶油制品、海鱼罐头、熟肉制品等)：称取打碎、混匀的样品3.005.00g于50ml离心管中，加入25 ml石油醚，振摇，超声提取3 min，再混匀，离心(1000r/min以上)10min，弃石，再用25ml提取一次，弃石油醚，60水浴挥发除去，残渣加30ml水，混匀，超声提取20min，加2ml溶液混匀，再加

6、入2ml溶液，混匀，离心(3000r/min) 10min，过滤，用水分次洗涤残渣，收集滤液并定容至50ml,混匀备用。 (2)试样衍生化精确移取处理好的液体试样、固体、半固体试样溶液10.0ml于50ml带盖离心管中。离心管置试管架上冰浴5 min后，精确加入5.00ml，再加入2.5 ml溶液，2.5 ml硫酸溶液，盖紧离心管盖，在冰浴中放置30min，期间振摇35次；加入2.5g，盖上盖后置涡旋混合器上振荡1 min，低温离心(3000r/min )10min分层，或低温静置20min至澄清分层后取上清液，放置于14冰箱中保存备用。 (3)标准溶液系列的制备及衍生化精确移取1.00mg/

7、ml标准溶液0.50、1.00、2.50、5.00、10.0、25.0ml于50ml容量瓶中，加水定容，配成标准溶液系列浓度为0.01、0.02、0.05、0.10、0.20、0.50mg/ml, 临用时配制以备衍生化。精确移取系列标准溶液10.0ml举行衍生化，办法同步骤(2)。 (4)色谱条件 色谱柱：弱极性石英毛细管柱(内涂5苯基甲基聚硅氧烷，30m×0.53mm×1.0um)或等效柱。 柱温升温程序：初温55保持3min, ioc/min升温至90保持0.5min, 20'c/min升温至200保持3min。 进样口：温度230；进样量1ul，不分流/分流进

8、样，分流比1:5(分流比及方式可按照色谱仪器条件调节)。 检测器：氢火焰离子化检测器(fid)，温度260。 载气：高纯氮气，流量12.0ml/min，尾吹20ml/min。 氢气：30ml/min；空气330ml/min(载气、空气流量大小可按照仪器条件举行调节)。 (5)测定办法分离吸取1ul经衍生化处理的标准系列浓度上清液，注入气相色谱仪中，测得不同浓度被测物的相应峰面积值，以浓度为横坐标，以环己醇亚硝酸酯和两峰面积之和为纵坐标，绘制标准曲线。 在彻低相同的条件下进样1 ul经衍生化处理的试样待测液上清液，保留时光定性，测得峰面积，按照标准曲线得到样液中的组分浓度；试样上清液响应值若超出线性范围，应用正庚烷稀释后再进样分析，平行测定次数不少于两次。 4结果计算 式中x试样中环己基氨基磺酸的含量，g/kg; p由标准曲线计算出定容样液中的浓