血清乙型肝炎病毒e抗原检测作业指导书

1、血清乙型肝炎病毒e抗原检测作业指导书（ELISA）1 .原理在微孔条上预包被被纯化乙肝e抗体（HBeAb）,配以酶标记抗原（HBeAb-HRP）及TMB等其它试剂，采用夹心法原理检测人血清（或血浆）中乙肝e抗原（HBeAg）o2 .标本采集2.1 1采集前病人准备：受检者应空腹2.2 标本种类：血清或血浆2.3 标本要求：采集病人静脉血3nli（可用EDTA抗凝），室温放置不超过4小时，分离血清备用。3 .标本储存：2-8保存不应超过1周，-20不应超过3个月，-70C长期保存，应避免反复冻融。4 .标本运输：密封，室温运输。5 .标本拒收标准：污染、标本量不足、严重溶血或。测检项此作宜不本标

2、血脂.6 .试剂6.1 试剂名称：乙型肝炎病毒e抗原诊断试剂盒6.2 试剂生产厂家：英科新创（厦门）科技有限公司。6 .3包装规格：96Test/Kit6.4 试剂盒组成：HBeAg微孔板,HBeAg酶标记抗原,HBeAg阳性对照血清,HBeAg阴性对照血清，浓缩洗涤液，底物A,底物B,终止液，封口膜，自封袋。6.5 试剂储存条件及有效期：2-8C避光保存，有效期9个月。7 .仪器设备7.4 仪器名称：自动酶标仪7.5 仪器厂家：KHB7.6 仪器型号：ST3608 .操作步骤8.4 平衡：将试剂盒各组分取出，平衡至室温。存封袋封自以时及者余，后封开板孔，微）2518-（.8.5 配液：浓缩洗

3、涤液配制前充分摇匀（如有晶体应充分溶解），浓缩洗涤液和蒸储水或去离子水按1：19稀释后使用。8.6 编号：将微孔条固定于支架，按序编号。8.7 加样：分别用加样器在对照孔中加入阴、阳性对照血清各50?1于相应孔中。8.8 加醐：分别在每孔中加入酶标记抗体50?1,轻拍混匀。8.9 温育：置37温育60分钟，室温平衡5分钟。8.10 洗涤：用洗涤液充分洗涤5次，洗涤完扣干（每次应保持30-60秒的浸泡时间）。8.11 显色：每孔加入底物A、B各50。1,轻拍混匀，置37暗处15分钟。8.12 终止：每孔加终止液50?1,混匀。8.10测定：用酶标仪单波长450nm或双波长450/630nm测定各

4、孔0D值(用单波长测定时需设空白记并，定测成完内钟分30,孔一照对.录结果)。9 .结果判断与分析9.4 临界值(C.0.)的计算：临界值二阴性对照孔0D值NX2.1,阴性对照0D均值大于0.1时应重新试验，小于0.05时以0.05计算。9.5 结果判定：样品0D值S/C.0二1者为HBeAg阳性样品0D值S/C.01者为HBeAg阴性10 .质量控制:每次试验用含量为2NCU/ml的HBeAg质控血清同步检测,S/C0值应在控制范围内；如失控，则要检查试剂效期、储臧温度、试验温度是否正常、操作步骤是否正确，直至重新试验使其在控。11 .参考范围：阴性或阳性12 .临床意义：HBeAg阳性可作

5、为体内HBV处在复制状态及血清具有传染性的一个标志；持续阳性则揭示转为慢性。o好性异特，高度敏灵：能性作操3.1.14 .方法局限性：样品显色深浅与样品中抗原的含量没有一定正相关。15 .注意事项15.1 每板建议设阴阳性对照血清各两孔，设空白对照时，不加样品及酶标记抗体，其余各步相同。15.2 洗涤时各孔均须加满，防止孔口内有游离酶未能洗净。15.3 加试剂前应将试剂瓶翻转数次，使液体混匀。如果滴加，滴加前应弃去12滴。滴加时瓶身应保持垂直，以使滴量准确。注意勿将试剂滴在孔壁上。15.4 所有样品都应按传染源处理。15.5 封口膜使用说明15.5.1 微孔板拆封后，在取出当天所需的微孔条后，其余微孔条可以封口膜封存以避免受潮。在封存时，注意勿把封口膜粘贴到微孔条底部,以免影响其透光性。其免避可，口孔盖覆膜口封以，时育温板孔微15.5.2他因素对实验带来的非预期的影响。15.6 不同品名、不同批号的试剂不可混用，以免产生错误结果。16 .当检测系统（仪器）不能工作时，所采取的补救措施:应保证所有操作步骤正确无误；可以比对阴阳对照，肉眼判读；无法准确判读者，应留样待系统正常后复查。17 .参考文献：中