细胞培养用液

1、细胞培养用液 针对各种细胞的培养已设计出相应合适的培养基，但都包括最基本的，细胞培养所必须的养分物质搭配，由必须和非必须，、无机盐和作为生长因子、激素与贴壁因子来源的血清组成。有时还会按照某些特别细胞培养的特点，补充这些细胞所依靠的特别成分，如等激素，嘌呤和嘧啶稀少金属等。在大多数培养基中加入酚磺酞作为ph指示剂，以培养基的色彩变幻即刻推断细胞的生长情况，另外在培养基内加入抗生素以使污染降至最低。 一、培养用液的种类与基本要求 （一）种类 培养用液是维护组织细胞生存、生长及举行细胞培养各项操作过程中所需的基本溶液。主要包括平衡盐溶液、培养基和培养用试剂等三大类。平衡盐溶液是细胞培养中常用的基本

2、液体，常用的平衡盐溶液见表1-5；培养基可分为自然培养基及合成培养基；在细胞制备和培养过程中还需用法一些培养用试剂，包括组织消化液、ph调整液和抗生素等。 1，平衡盐溶液平衡盐溶液（balanced salt solution, bss)具有维持渗透压，调控培养环境酸碱平衡的作用，并可供细胞生存所需的能量和无机离子成分，另外尚可作为洗涤组织、细胞以及配制各种培养用液的基础溶液。常用的平衡盐溶液有hanks液和pbs液等。 2培养基培养基是维持体外培养细胞生存和生长的基本溶液，可分为自然培养基和合成培养基两大类。 (1)自然培养基：自然培养基（natural medium）主要来自动物的体液或从

3、组织中分别提取成分，其养分性高，成分复杂，但来源受限，而且存在较大的个体差异。自然培养基的种类无数，包括生物性液体（如各种血清）、组织浸出液（如胚胎浸液）和凝固剂（如血浆）等。 (2)合成培养基：合成培养基（synthetic medium）是对细胞体内生存环境中各种已知物质在体外人工条件下的模拟。这种模拟人或动物体内环境合成的培养基，是在体外经过反复实验和筛选，举行强化和重新组合形成的配方恒定的培养基，给细胞提供了一个近似体内生存的环境，是较为抱负的培养基。但需与自然培养基混合用法，才干使细胞生长和繁殖。常用的培养基有dmem, rpmi 1640和199培养基等。 3培养常用试剂 (1)消

4、化液：常用的消化液有、（edta）和等，它们在制备原代细胞时可消化组织、簇拥细胞；在细胞传代时使细胞脱离瓶壁并使细胞团簇拥成单个细胞。 (2) ph调节液：为了维持培养液恒定的ph，以利于细胞的生长和增殖，常在培养基用法前用ph调整液（常用nahc03）来稳定养分成分，为防止培养基的ph在培养过程中快速变幻，可利用n-2-羟乙基哌嗪-n'-2-乙磺酸（n-2-hydroxyethylpiperazine n' -2-ethanesulfonicacid, hepes）强缓冲液维持ph。 (3)抗生素：用于猎取生物材料时的无菌操作，处理取材于污染环境中的标本材料，以及预防培养物的

5、污染。常用青霉素、和抗真菌素等。 （二）基本要求 由于培养液是细胞生存的环境，其要求严格，对其各种成分都需要细心挑选。 1细胞培养对水的要求水不仅是细胞的主要成分，也是细胞赖以生存的主要环境，养分物质、代谢产物都必需溶解在水中，才干被细胞汲取和排泄。体外培养细胞对水的质量十分敏感，要求很高。水的纯度不够，即使有害元素含量极少，对细胞也会产生不利影响，有时引起细胞中毒死亡。因此配制全部的培养液和各种溶液应用法纯化水。组织培养必需用法玻璃蒸馏器制备的三次蒸馏水。二次蒸馏水或一次蒸馏水可用以清洗器皿或配制普通洗液。试验室纯化水的常用装置有两种： （1)离子交换装置：此装置用离子交换树脂可有效地去除离

6、子，所制得的水称为去离子水。制取去离子水不用燃料、成本低、水质好、操作简便，但不能去除非离子物质或有机质，因此组织培养中很少用法，仅用于冲洗玻璃器皿。 (2)蒸馏水装置：蒸馏水符合组织培养的要求，而且必需用法玻璃蒸馏器制取，因用金属蒸馏器不能彻低排解金属离子，故不符合要求。有时为制取大量高质量纯化水，可用去离子水经玻璃蒸馏器重蒸。组织培养用液需用三蒸水配制。 蒸馏水普通是现用现配，存放时光不宜过长，最好不要超过2周。因空气中的杂质和有毒气体能污染水质，c02也会溶解于水，故存放时要将蒸馏水装满储藏容器，密封瓶口防止空气混入。 2对试剂纯度和质量的要求细胞培养对配液的试剂要求很高，要用法高纯度的

7、物质配制细胞培养用液。试剂常用的纯度有优级纯（特级纯）、分析纯（ar）和化学纯（cd)，细胞培养配液用的物质要挑选分析纯以上级别。无数用于培养用液的化学物质很难溶解，在配制时必需设法使其溶解，而且要按规定的先后挨次配制，称量要精确，要看清化学物质的规格、纯度、结晶水的数量等，切勿搞错。 3培养用液要求严格无菌培养用液的污染绝对要引起细胞培养的失败。在灭菌处理时要考虑化学物质的特性，切勿在灭菌过程中也灭活了化学物质的活性，所以要挑选正确的灭菌法举行有效的处理。关键是要在无菌条件下挺直配制，培养用液多采纳过滤除菌法；因有不少物质的性质不稳定，在高温高压下易产生变性，如葡萄糖在115条件下只能维持1520