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文档简介

1、唾液淀粉酶的活性观察【实验目的】1. 了解环境因素对酶活性的影响及酶的高效性。2. 掌握酶定性分析和注意事项。【基本原理】酶是生物催化剂,具有极高的催化效率,具催化率比一般催化剂高io6io13。 在生物体内,过氧化氢酶能催化过氧化氢很快地分解成为HO和Q,使H2Q不致在体内大量积累。铁粉也是过氧化氢分解反应的催化剂, 但其催化效率仅为过氧 化氢的100亿分之一。酶的催化作用受到温度的影响。在一定的温度范围内,随着温度的升高,酶 促反应速度增加,直至最大值。由于酶是一种蛋白质,温度过高会导致酶的失活, 因此,反应速度到达最高值以后,温度继续升高,酶促反应速度反而急剧下降, 直至完全停止酶促反应

2、。反应速度达到最大值时的温度称为酶作用的最适温度。酶活性受环境pH值的影响。通常各种酶只有在一定的pH值范围才表现出活 力。酶活性达到最高的pH值,称为最适pH值。低于或者高于最适pH值时,酶 的活性均降低或者失去活性。唾液淀粉酶的最适 pH值为6.8。酶活性受环境中某些物质的影响,有些物质能使酶的活性增加,称为激活剂; 有些物质能使酶的活性降低,称为抑制剂。值得注意的是,激活剂和抑制剂不是 绝对的,有些物质在低浓度时为酶的激活剂,而在高浓度时则为该酶的抑制剂。 例如,0.9%的氯化钠是唾液淀粉酶的激活剂,但氯化钠达到1/3饱和度时就可抑 制唾液淀粉酶的活力。本实验以唾液淀粉酶为材料来观察环境

3、因素对酶活性的影响情况。唾液中含有a -淀粉酶,该酶属于内切酶。淀粉在该酶的催化作用下或随着时间的延长而 出现不同程度的水解产物,从而得到各种糊精乃至麦芽糖、少量葡萄糖等产物。而碘液能指示淀粉的水解程度,淀粉及淀粉不同程度的水解产物遇到碘可呈 蓝色、紫色、暗褐色和红色,而麦芽糖遇碘液则不呈颜色反应。如图所示:淀粉酶淀粉酶淀粉紫色糊精暗褐色糊精红色糊精芽糖+少量葡萄糖加碘后:蓝色紫红色暗褐色红棕色黄色(碘本身颜色)【实验试剂、材料和器材】(一)试剂(1)0.5%淀粉溶液:称取 0.5g 可溶性淀粉,加入少量蒸馏水调成糊状,然后缓慢倒入沸腾的 60mL 蒸馏水中,搅动煮沸1min。冷却至室温后加水

4、至100mL置冰箱中存放。(2)碘液:称取2g碘化钾溶于5mL蒸馏水中,随后加1.2g碘,待碘溶解后,加蒸馏水至 200mL混合均匀后保存于棕色瓶中,用前稀释 5倍。(3)不同pH值溶液A液 0.2mol/L Na 2HPO溶液:称取35.62 gNazHPG 12HO,溶于蒸馏水后定 容至 1000mL。B液一一0.1 mol/L柠檬酸溶液:称取21.01g 一水柠檬酸,溶于蒸馏水后定容至1000mL。 pH3.8缓冲液一一取 A液71.0mL、B液129.0mL混合而成。 pH6.8缓冲液一一取 A液145.5mL、B液54.5mL混合而成。 pH8.0缓冲液一一取 A液194.5mL、B

5、液5.5mL混合而成。( 4) 1%( W/V) CuSO4 溶液:称取无水硫酸铜1g (或者称取五水硫酸铜约1.5625g),溶解后用蒸馏水稀释至100mL。(5)0.9% (W/V NaCl 溶液:称取氯化钠 0.9g ,溶解后用蒸馏水稀释至 100mL。(6)2% HO溶液。(7)铁粉(二)材料马铃薯(生的,熟的各一份)(三)仪器白比色板,恒温水浴箱,制冰机,电炉,电子天平,棕色试剂瓶,研钵,试管(30mL,刻度吸管(移液枪),烧杯,容量瓶,水果刀,计时表,一次性杯子等 【操作步骤】(一)唾液淀粉酶的制备每人先用自来水水漱口,将口腔内的食物残渣清除干净。然后用一次 性杯子取蒸馏水约20m

6、L含入口中,做咀嚼动作34分钟,以分泌较多的唾 液。将口腔中的蒸馏水吐入干净的小烧杯中,此即为稀释的唾液淀粉酶液。(二)酶的高效性及环境因素对酶活性的影响1. pH对酶活力的影响 取3只试管编号,按表1操作。表1 pH值酶活力的影响mL编号123pH=3.8缓冲溶液3pH=6.8缓冲溶液3pH=8.0缓冲溶液30.5%淀粉溶液111唾液淀粉酶111将上述各管溶液混匀后在37C水浴中保温5min每隔1min,从2号试管中取出1滴溶液置于白瓷板上,检查淀粉水解程度用碘液检查淀粉的水解程度,待溶液不再变色时,从水浴中取出所有试管向各管中均加碘液12滴,摇匀观察,记录并解释各管的现象2.温度对酶活性的

7、影响取3只试管编号,按表2操作。表2温度对酶活力的影响编号123淀粉酶液(mL0.50.50.5pH6.8的缓冲溶液(mL1110.5%淀粉溶液(mL111反应温度C, 10mi n)037100取出各试管冷水冷却向各管中均加碘液13滴,摇匀观察,记录并解释各管的现象3. 酶的激活剂和抑制剂对酶活性影响取3只试管编号,按表3操作表3酶的激活剂和抑制剂对酶活性的影响mL编号1230.9%NaCI 溶液11%CuSOg 液1蒸馏水10.5%淀粉溶液111唾液淀粉酶液111将上述各管溶液混匀后在37 r水浴中保温检查淀粉水解程度每隔1mi n,从1号试管中取出1滴溶液置于白瓷板上,用碘液检查淀粉的水解程度,待溶液不再变色时,从水浴中取出所有试管向各管中均加碘液匀 摇 ,2观察,记录并解释各管的现象【注意事项】(1)做pH值对酶活性的影响实验项目时,为确保实验的效果,各试剂加完 后再加唾液淀粉酶液。(2)做

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