气相和液相色谱柱综合管理文件

1、一、 概述：1. 高效液相色谱柱构造：色谱柱由柱管、压帽、卡套（密封环）、筛板（滤片）、接头、螺丝等组成。色谱柱是高效液相色谱的心脏，在高效液相色谱仪的使用中，保持色谱柱的柱效、容量和渗透粉性，延长柱子的使用寿命非常重要。因此对高效液相色谱柱的维护是关键。高效液相色谱柱的分类：液相色谱柱的分离作用是在填料与流动相之间进行的，柱子的分类是依据填料类型而定。· 常见的分配柱填料：碳十八柱（ODS/C18)、碳八柱（MOS/C8）、碳六柱（Hexyl/C6）、 碳四柱（Butyl/C4）、碳一柱（Methyl/C1）、阴离子交换柱（SAX)、 阳离子交换柱（SCX）、苯基柱（Phenyl）

2、、氨基柱（Amino/NH2）、 氰基柱（Cyano/CN/Nitrile）等。· 常见的吸附柱填料：硅胶柱l 正相柱：多以硅胶为柱填料。根据外型可分为无定型和球型两种，其颗粒直径在310 m的范围内。另一类正相填料是硅胶表面键合CN，-NH2等官能团即所谓的键合相硅胶。l 反相柱：主要是以硅胶为基质，在其表面键合十八烷基官能团(ODS)的非极性填料。也有无定型和球型之分。2. 气相色谱柱毛细管色谱柱的组成：毛细管色谱柱由两部分组成管身和固定相。气相色谱柱的种类：有多种类型，从不同的角度出发，可按色谱柱的材料、形状、柱内径的大小和长度、固定液的化学性能等进行分类。色谱柱使用的材料通常

3、有玻璃、石英玻璃、不锈钢和聚四氟乙烯等，根据所使用的材质分别称之为玻璃柱、石英玻璃柱、不锈钢柱和聚四氟乙烯管柱等。按照色谱柱内径的大小和长度，又可分为填充柱和毛细管柱。前者的内径在24mm，长度为110m左右；后者内径在0.20.5mm，长度一般在25100m。在满足分离度的情况下，为提高分离速度，现在也有人使用高柱效、薄液膜的10m短柱。根据固定液的化学性能，色谱柱可分为非极性、极性与手性色谱分离柱等。二、 色谱柱的选型与求购：1. 色谱柱选型1.1高效液相色谱柱如果仪器用来做常规分析，样品种类有限，但分析次数多，则不妨为每一类常规分析配置一根专用柱，这样有助于延长柱子的寿命。·

4、非极性或极性较小的样品可用一般的C18柱· 酸碱性的化合物建议选用填料经封尾钝化过的C18柱，PH范围2-9（12）· 糖类，氨基酸，有机酸，多环芳烃，GPC有专用柱· 超快速柱子-填料粒度<2µm键合相色谱柱· 优点· 固定相稳定，不易流失· 应用广泛，可使用多种溶剂· 消除硅羟基的不良影响· 缺点· pH值不能小于2或大于8· 同样填料，各种牌号色谱柱不尽相同反相HPLC柱（C18）的性能· 常规C18填料的稳定性· 硅胶基质填料· pH范围：2

5、-8 · pH值大于7时键合相粉碎或溶解· pH值小于2时键合相的化学键断裂· 经常用缓冲液 固定相降解· 填料新的键合技术 - PH范围 2-12 - 稳定性好，使用寿命长1.2气相色谱柱柱长度选择 ：分辨率与柱长的平方根成正比。在其他条件不变的情况下,为取得加倍的分辨率需有4倍的柱长。较短的柱子适于较简单的样品,尤其是由那些在结构、极性和挥发性上相差较大的组分组成的样品。一般来说：15m的短柱用于快速分离较简单的样品，也适于扫描分析；30m的色谱柱是最常用的柱长，大多数分析在此长度的柱子上完成；50m、60m或更长的色谱柱用于分离比较复杂的样品。应该

6、注意，柱长增加分析时间也增加。柱内径的选择：柱径直接影响柱子的效率、保留特性和样品容量。小口径柱比大口径柱有更高柱效，但柱容量更小。0.25mm：具有较高的柱效，柱容量较低。分离复杂样品较好。0.32mm：柱效稍低于0.25mm的色谱柱，但柱容量约高60%。0.53mm：具有类似于填充柱的柱容量，可用于分流进样，也可用于不分流进样，当柱容量是主要考虑因素时(如痕量分析)，选择大口径毛细管柱较为合适。液膜厚度的选择 液膜厚度影响柱子的保留特性和柱容量。厚度增加，保留也增加。0.10.2m ：薄液膜厚度的毛细管柱比厚液膜的毛细管柱洗脱组分快，所需柱温度低，且高温下柱流失较小，适用高沸点的化合物的分

7、析。0.250.5m ：常用的液膜厚度。厚液膜：对分析低沸点的化合物较为有利。固定相的选择不同的固定相对不同的分析物的影响不同，根据相似相溶原理，性质越相近，固定相对其的流动阻力越大，其保留时间越长色谱柱就是通过这个原理将不同性质的混合物相互分开的您现在就可以看到其实气相色谱柱的分离效果主要取决于其固定相，柱长度，柱内径，液膜厚度这几个因素，从原理上讲，这几个因素相同的柱子，其分离效果是完全一样的。考虑到这一点，现在您完全根据这个更加本质的依据来选择您的气相色谱柱，而不必一定去购买昂贵的标准指定气相色谱柱。2. 色谱柱的选型与求购根据检验方法或者药典标准中的需求确定色谱柱的柱长、柱内径、填料孔

8、径、填料类型等规格，同时根据方法中色谱条件如流动相比例、PH值、缓冲盐成分、流速等条件来选择合适的品牌和型号。确定好色谱柱的规格、品牌和型号以后，填写求购单报供应部采购。三、 色谱柱的接收与登记：1. 登记台账：色谱柱购入后，首先应检查是否与所求购的规格、品牌和型号一致、是否有出厂检测并且检测合格的证明。检查无误后登记色谱柱台账，其中HPLC柱与GC柱两种色谱柱分开做台账，以便查阅。台账内容包括柱编号、品牌、序列号、型号、填料、购买日期、使用时间、使用范围、停用时间、停用原因。在接收时登记柱编号、品牌、序列号、型号、填料、购买日期；柱第一次使用时（包括活化/老化柱）登记其使用时间及使用范围。2

9、. 色谱柱编号： 色谱柱编号采用代号+流水号的形式，其中气相色谱柱代号为GC1，高效液相色谱柱代号为LC1，编规则如下：QC的第一根气相色谱柱为GC1-001（流水号连续递增，不得跳号）；第一根高效液相色谱柱为LC1-001（流水号连续递增，不得跳号）。四、 色谱柱的使用与维护保养：每根色谱柱应设有使用记录，每次使用前和使用后登记使用的及时信息。液相色谱柱使用登记记录内容包括色谱柱编号、使用范围、色谱柱信息、使用日期、使用目的、使用仪器、使用流动相、使用后维护记录、柱压、柱状态、使用人等信息;气相色谱柱使用登记记录包括色谱柱编号、使用范围、色谱柱信息、使用日期、使用目的、使用仪器、柱状态、使用

10、人等信息。1. 高效液相色谱柱1.1安装柱子在装卸、更换时，动作要轻，接头拧紧要适度。必须防止较强的机械振动，以免柱床产生空隙。 1.1.1拆开柱包装盒，确认色谱柱的类型、尺寸、出厂日期以及柱内贮存的溶剂。拧下柱两端接头的密封堵头放回包装盒供备用。首先应确认柱和仪器的接头以及管路是否匹配。为减少死体积，进样阀、柱子、检测器之间的连接管路内径尽可能使用内径较小的管线，同时控制进样器、色谱柱和检测器之间连接管线的长度。安装色谱柱之前，确认流路系统中的溶 剂是否正常。对分析较复杂的样品建议安装保护柱。 1.1.2按柱管上标示的流动相流向，将色谱柱的入口端通过连接管与进样阀出口相连接。连接管的两端均有

11、空心螺钉及密封用压环。在接管时一定要设法降低柱外死体积。连接管通过空心螺钉、压环后尽量用力插到底，然后顺时针拧紧空心螺钉，直到拧不动为止，再用扳手继续顺时针拧14-12圈，切记不要用力过大。如色谱柱通过流动相加压后有漏液现象，请用扳手继续顺时针拧14圈，直至不漏液为止。为了使色谱柱与仪器系统达最佳的连接效果，应尽量使用与色谱柱接口相匹配的螺帽和锥形接头，如原来的接头长期匹配其他类型的色谱柱，建议在连接新色谱柱前应检查匹配情况，避免造成色谱柱的损坏或因色谱柱不匹配造成的漏液。1.1.3不同公司产品，其接头不同。处理不当时，会造成：· 色谱峰展宽（死体积）使柱效下降、或渗漏·

12、解决办法：· 自制相应的转换接头· 或使用以下两种较为通用的接头ü PEEK 材料的通用接头：只需用手拧紧不需要特定扳手，使用压力为5000psi；使用温度不得超过100。PEEK工程塑料的接头，可用在所有类型的色谱柱上的。ü 锥箍及螺母型接头：这种锥箍在不锈钢管上是活动的，因此可以换接不同的色谱系统及色谱柱。1.2使用1.2.1使用前平衡· 在进行样品检测前，先用所保存色谱柱的流动相预先冲洗。反相色谱柱：如流动相有盐份先用510%的甲醇水冲洗再用所使用流动相冲洗。正相色谱柱：用所使用流动相冲洗。对于部门现用的缬沙坦对映异构体色谱柱填料为AGP

13、的色谱柱，不能沾甲醇，故每次实验前先用纯化水不接色谱柱冲洗系统以1.0ml/min流速至少冲洗1h，接上色谱柱再用纯化水以0.3ml/min的流速冲洗色谱柱至少1小时，最后用所使用流动相冲洗色谱柱。建议使用前总冲洗柱体积至少10倍使色谱柱充分平衡。流动相一定要使用色谱级别的溶剂。如使用水相的缓冲液应当天配制以保持新鲜避免细菌产生。· 流动相使用前需用微孔滤膜过滤,消除流动相中颗粒对色谱系和色谱柱的损坏。缓冲液与其他流动相混合后应重新过滤避免溶解度变化造成产生新的沉淀。不应使用纯水作为流动相冲洗C18色谱柱，以免柱性能损坏（添加5%-10%的有机溶剂冲洗色谱柱）。 · 流动相

14、需脱气后使用，可避免因气泡导致的泵和检测器的工作不正常。如果测试时使用的流动相与色谱柱保存使用的流动相有较大区别，应该使用过度分布的形式进行平衡。避免由于流动相的突然变化造成柱压增加过大或流动相缓冲盐结晶造成对色谱柱和仪器系统的损坏。正相色谱柱比反相色谱柱需要更长的平衡时间。1.2.2使用注意事项· 使用时流速和柱压要逐渐增加，进样前检查色谱系统的各个接头是否有漏液· 避免压力和温度的急剧变化及任何机械震动。温度的突然变化或者使色谱柱从高处掉下都会影响柱内的填充状况;柱压的突然升高或降低也会冲动柱内填料，因此在调节流速时应该缓慢进行，在阀进样时阀的转动不能过缓。不要高温下过

15、长时间使用硅胶键合相柱子· 应逐渐改变溶剂的组成，特别是反相色谱中，不应直接从有机溶剂改变为全部是水，反之亦然。· 如使用柱温控制装置时，应注意在通人流动相后才能升温。· 一般说来色谱柱不能反冲，只有生产者指明该柱可以反冲时，才可以反冲除去留在柱头的杂质。否则反冲会迅速降低柱效。· 选择使用适宜的流动相，以避免固定相被破坏。有时可以在进样器前面连接一个预柱，分析柱是键合硅胶时，预柱为硅胶，可使流动相在进入分析柱之前预先被硅胶“饱和”，避免分析柱中的硅胶基质被溶解。· 避免将基质复杂的样品尤其是生物样品直接注人柱内，需要对样品进行预处理或者在进样

16、器和色谱柱之间连接一个保护柱。保护柱一般是填有相似固定相的短柱。保护柱可以而且应该经常更换。· 经常用强溶剂冲洗色谱柱，清除保留在柱内的杂质。在进行清洗时，对流路系统中流动相的置换应以相混溶的溶剂逐渐过渡，每种流动相的体积应是柱体积的20倍左右。 · 色谱柱使用过程中，如果压力升高，一种可能是烧结滤片被堵塞，这时应更换滤片或将其取出进行清洗;另一种可能是大分子进人柱内，使柱头被污染;如果柱效降低或色谱峰变形，则可能柱头出现塌陷，死体积增大。1.3.液相色谱柱的维护1.3.1样品方面· 除去微粒及杂质· 了解样品在流动相中的溶解度ü 如样品的溶剂

17、不是流动相，一定要用流动相试溶解度，防止其在流动相中析出 · 了解样品与色谱柱的基质/填料是否相互作用· 溶剂和样品过滤非常重要，它会对色谱柱、仪器起到保护作用，消除由于污染对分析结果的影响。· 色谱柱：由于填料颗粒很细，色谱柱内腔很小，溶剂和样品中的细小颗粒会使色谱柱和毛细管容易堵塞。· 仪器：溶剂和样品中的细小颗粒会增加进样阀的堵塞和磨损，同时也会增加泵头内的蓝宝石活塞杆和活塞的磨损。样品过滤头的类型：· 30mm 内径：适用于大进样量的过滤，由0.2m 和0.45m 两种规格,材料有纤维素,醋酸纤维,聚四氟乙烯。处理样品体积少于50l。&

18、#183; 13mm 内径：适用于范围广的过滤，由0.2m 和0.45m 两种规格,材料为纤维素。· 3mm 内径：适用于小进样量的过滤，由0.2m 和0.45m 两种规格。处理样品体积为7l。 1.3.2流动相、溶剂方面1.3.2.1使用的溶剂(必须为色谱级别溶剂)· 除去微粒· 纯度的要求a) 超纯水，梯度实验时水中有机杂质含量要低（建议走空白检验）b) 缓冲液的pH值，在填料的允许范围内c) 缓冲液（盐）的浓度d) 溶剂：色谱纯，并与填料相匹配e) 溶剂中的杂质含量f) 注意溶剂的相容性，避免使用不相容的溶剂 · 流动相对样品的溶解度有机溶剂或水的

19、比例· 不干净的溶剂或在溶剂瓶中长菌的溶剂会阻塞溶剂过滤器以及色谱柱。· 含水流动相最好在实验前配制，尤其是夏天使用缓冲溶液作为流动相不要过夜。· 遵从下列建议可以提高性能，延长溶剂过滤器和色谱柱的寿命：a) 使用无菌溶剂瓶避免溶剂长菌。b) 用滤膜过滤溶剂去除微生物。c) 每两天甚至更短时间更换过滤溶剂。d) 避免溶剂瓶直接日照。e) 向溶剂中加入0.0001-0.001M的叠氮化钠。· 避免使用下列对不锈钢有腐蚀性的溶剂：a) 􀁺卤化物碱金属溶液和相应的酸溶液。b) 􀁺高浓度的无机酸例如：硝酸和硫酸。c)

20、48698;能够形成卤素自由基或酸的氯化试剂及其混合物。d) 􀁺含有过氧化物的色谱级醚必须用氧化铝干燥剂。e) 􀁺在有机溶剂中的有机酸溶液。f) 􀁺含有强络合剂的溶液。g) 􀁺四氯化碳和异丙醇或THF混合液。1.3.2.2选择合适的滤膜· 聚四氟乙烯滤膜：适用于所有溶剂，酸和盐，并无任何可溶物。· 醋酸纤维滤膜：适用于水基溶剂，不适用于有机溶剂，推荐用于蛋白质和其相关的样品。· 尼龙66滤膜：适用于绝大多数有机溶剂和水溶液，可用于强酸、70%乙醇、二氯甲烷、不适用于DMF二甲基甲酰胺·

21、; 再生纤维素滤膜：具有蛋白质吸收低，同样适用于水溶性样品和有机溶剂。注意：1）每张滤膜只能用一次。 2）水相和有机相不要搞混。1.3.2.3脱气目的：排除溶解在流动相中的氧气和氮气流动相使用前必须进行脱气处理 ，以除去其中溶解的气体（如O2），以防止在洗脱过程中当流动相由色谱柱流至检测器时，因压力降低而产生气泡。气泡会增加基线的噪音，造成灵敏度下降，甚至无法分析。溶解的氧气还会导致样品中某些组份被氧化，柱中固定相发生降解而改变柱的分离性能。若用FLD，可能会造成荧光猝灭。脱气方法：氦气脱气、回流加热脱气、真空脱气、超声脱气。· 氦气脱气法：利用液体中氦气的溶解度比空气低，连续吹氦脱

22、气，效果较好，但成本高。· 加热回流法：效果较好，但操作复杂，且有毒性挥发污染· 抽真空脱气法：易抽走有机相。· 超声脱气法：流动相放在超声波容器中，用超声波振荡10-15min，此法效果最差。在线真空脱气法：LC 真空脱机利用膜渗透技术， 在线脱气，智能控制，无需额外操作，成本低，脱气效果明显优于以上几种方法，并适用于多元溶剂体系。1.4常见问题及可能存在的原因1.4.1柱压过高Ø 色谱柱方面：· 微粒堵塞ü 样品ü 流动相ü 密封垫· 柱床膨胀· 不可逆吸附· 细菌生长Ø

23、 仪器方面：柱压过高问题，不一定都是色谱柱问题！· 系统反压问题ü 阻尼器堵塞ü 进样器堵塞ü 管路或连接口堵塞ü 在线过滤器不干净ü 保护柱· 压力传感器不准确· 流速是否错误?1.4.2柱效低Ø 色谱柱方面：· 色谱柱被污染· 过滤片部分堵塞ü 样品、流动相或密封垫的细小颗粒造成的堵塞· 色谱柱内的死体积ü 流动相pH值及组成不合适造成固定相流失ü 流速急剧变化造成固定相物理损坏ü 机械震动造成固定相产生裂缝ü 柱床收缩或

24、干枯Ø 仪器方面：· 连接不好造成死体积ü 进样器ü 检测器ü 管路，连接口ü 保护柱ü 在线过滤器堵塞· 流动相问题：色谱柱未平衡好· 进样量太大1.4.3实验的重复性差Ø 色谱柱方面：· 色谱柱被污染· 流动相pH值及组成不合适造成键合相流失· 样品溶剂不同或样品本身不稳定Ø 仪器方面问题：· 梯度实验时平衡时间不足· 温度波动· 流动相组成改变· 样品溶剂不同· 样品稳定性不好· 方法的开发

25、不好ü 缓冲液的pH值不合适ü 缓冲液的缓冲能力不足1.4.4回收率低，不出峰· “不可逆”吸附· 固定相过强或流动相过弱· 非特异性吸附1.5高效液相色谱柱清洗1.5.1新购液相色谱柱活化新购入液相色谱柱和长时间未使用的液相色谱柱最好用强溶剂在低流量下（0.2-0.3ml/min）冲洗10倍柱体积。冲洗时柱出口端不得接检查器，以免未知杂质对检查器造成影响。活化色谱柱后需要在色谱柱使用记录上记录：活化所用溶剂，活化所用流速及活化了多长时间。硅胶色谱柱柱体积计算公式：V=*r2*l-*r2*l*0.6/dr：柱内径 l：柱长 0.6为硅胶堆积密度

26、 d：无孔硅胶密度约为2.32g/ml常用色谱柱柱体积规格柱体积(ml)如以0.3ml/min冲洗，时间如下3.9*150mm5.313h4.6*250mm12.316.8h4.6*150mm7.394.1h3.9*300mm10.625.9h3.0*150mm3.141.7h3.0*200mm4.192.3h4.0*100mm3.722.1h 1.5.2对于污染后高效液相色谱柱的清洗因为高效液相色谱柱是消耗品，随着使用时间或进样次数的增加，当柱效降低：主要特征性现象有柱压基本正常，但出现拖尾峰、秃峰、分叉峰、前延峰、峰变宽、基线漂移、理论板数降低、分离度降低等。可以对色谱柱进行再生。再生过程

27、必须随时关注柱压变化，柱压过高易导致硅胶变形与开裂及键合相极性端连接顺序紊乱，同时要保证再生时间足够。反相柱的再生： 一般情况下，顺接色谱柱，按如下溶剂顺序及条件冲洗：95%水-5%甲醇（或乙腈）（1.0ml/min，1h以上）100甲醇（1.0ml/min，1h以上）100乙晴（1.0ml/min，1h以上）75乙晴-25异丙醇（0.5ml/min，10倍柱体积以上）100异丙醇（0.5ml/min，10倍柱体积以上）100二氯甲烷（0.5ml/min，10倍柱体积以上）100正己烷（0.5ml/min，10倍柱体积以上，根据实际情况可忽略）100%异丙醇（0.5ml/min，20倍柱体积以

28、上）95%水-5%甲醇（或乙腈）（0.5ml/min，30min；再升至1.0ml/min，10倍柱体积以上）检测用流动相平衡2h或至基线平稳，进样测试。在冲洗过程中，随时关注柱压变化，确保不超过4000psi；若超出，可通过降低流速，升高柱温来调整，具体操作可咨询具备相关专业知识背景和实践经验的人士。若上述方法效果不理想，可按如上溶剂顺序和条件，先反接色谱柱冲洗再顺接色谱柱，用100%乙腈以1ml/min流速冲洗约2h再用与流动相同比例的水-有机相以1ml/min流速冲洗约30min最后用流动相平衡2h或至基线平稳，进样测试即可。· 正相柱再生：顺次以正己烷、异丙醇、二氯甲烷、甲醇

29、作流动相冲洗色谱柱每步注意平衡溶剂的顺序，不要颠倒每种流动相流经色谱柱的量为20-30倍柱体积(因异丙醇的粘度较大，冲洗过程中请随时注意调整冲洗的流速)，用甲醇冲洗完后，再以相反的顺序冲洗色谱柱。要注意上述溶剂必需严格脱水。· 离子交换柱的再生：长时间在高pH值和高离子强度缓冲溶液中使用，将导致色谱柱离子交换能力降低。用稀酸缓冲溶液冲洗，可使阳离子柱再生;反之，用稀碱缓冲溶液冲洗，可使阴离子柱再生。以上色谱柱的再生方法并不是绝对的标准方法，使用者可根据自己的实际经验和目的，选择合适的并能溶解柱内污染物的溶剂作流动相，按正方向或反方向的冲洗。2. 气相色谱柱2.1气相色谱柱安装2.1.

30、1选择石墨垫石墨 (100%) 450：通用于各种毛细管色谱柱，适用于FID, NPD, ECD检测器。装取方便，可重复使用。不适用于MS 或氧敏感的检测器。Vespel (85%/15%) 350：对于各种毛细管色谱柱通用，推荐使用于MS 或氧敏感的检测器。不可重复使用。Vespel (100%) 280：适用于定温操作。装取方便，可重复使用 若使用于NPD，升温程序会引起环聚物流失。金属 >450：适用于金属填充柱，耐高温，不可重复使用。O-型环 250：适用于玻璃填充柱，低温。2.1.2毛细管色谱柱的切割在聚酰亚胺涂层上轻轻地划出一道划痕，不要尝试割开毛细管玻璃推荐工具: 钻石或人

31、造钻石割刀、蓝宝石切割工具、陶瓷片目镜不可使用: 剪刀、锉刀2.1.3毛细管柱安装前检查项目（1）检查气瓶压力以确保有足够的载气、尾吹气和燃气。载气的纯度不低于99.995；（2）清洁进样口，必要时更换进样口密封垫圈，进样口衬管和隔垫；（3）检查检测器密封垫圈，必要时更换。如有必要，清洗或更换检测器喷嘴；（4）仔细检查柱子是否有破损或断裂。2.1.4毛细管的安装（1）从柱架上将色谱柱两端各拉出大约0.5 m，以用于进样口和检测器安装，避免色谱柱锐折；（2）在柱两端安装柱接头和石墨密封垫圈，向下套柱接头和密封垫圈，离端口大约厘米；（3）标记和切割柱子。在柱距两端大约cm处用标记笔标记，拇指和食指

32、尽量靠近切割点抓牢，轻轻地拉并弯曲柱子, 柱会很容易折断。如果柱子不容易折断，不要用力强行折，换个在离柱端更远的地方再刻一下，使其折断口处光滑。为确保柱两头切口截面没有聚酰亚胺和玻璃碎片, 可用放大镜检查切口；（4）在进样口安装色谱柱时，先查看仪器说明书找到正确的插入距离，并且用涂改液把这个距离标出来。将色谱柱插入检测器，用手指拧紧柱螺帽直到它固定住色谱柱，然后再拧螺帽1/4-1/2圈，这样当加压时色谱柱不会从接头脱出来； （5）打开载气，确定合适的流速。设定柱头压力，分流比和隔垫吹扫至合适的水平。如果使用分流和不分流进样口，检查清洗分流阀至ON(开)状态，确认载气流过色谱柱，将色谱柱一端浸入

33、丙酮瓶中检查是否有气泡； （6）将色谱柱安装到检测器上时，查看仪器说明书所提供的正确插入距离； （7）检查有无泄漏。在未仔细检查色谱柱有无泄漏之前对柱子不能加热； （8）清洗系统中的氧气至少数10 min，如果色谱柱被打开暴露到空气中很长时间（几天），那么需要更长时间（12h）来清洗系统以排除所有的氧气； （9）设定正确的进样器和检测器温度； （10）设定正确的尾吹气和检测器气流。点火、打开检测器至ON状态下； （11）注射非保留物质甲烷（FID）、乙晴(NPD)、二氯甲烷(ECD)、空气(TCD)、氩气（质谱）以检验进样器是否正确安装。如果出现对称峰则安装正确，如果有峰拖尾，重复进样口安装程

34、序。2.2气相色谱柱的良好用法· 柱的使用温度要尽量比柱的耐热温度低，这样可以延长柱的使用寿命，减低检测器的噪声级。· 除去载气中氧（特别是使用极性柱时）。使用高纯度的气体（99.999%以上）气瓶更换时特别注意不要混入空气。氧气净化器装在GC前面。· 不要使难于挥发的成分进入柱内充分做好试样的前处理使用柱衬管和石英棉安短的前置柱，一次性使用（毛细管柱）2.3气相色谱柱的维护2.3.1毛细管柱的老化2.3.1.1平时老化 （1）在比最高分析温度高20或最高柱温（温度更低者）的条件下老化柱子两小时，如果在高温10min后背景不下降，立即将柱子降温并检查柱子是否有泄漏

35、； （2）如果用Vespel密封垫圈的话，老化完后重新检查密封程度；（3）注射非保留物质以确定合适的平均线速度。2.3.1.2在新购入气相色谱柱也必须按2.3.1.1方法进行操作。在新柱老化时不得接检测器，以免新柱内的杂质对检测器造成污染。2.3.1.3老化色谱柱后需要在色谱柱使用记录上记录：老化所用温度及老化了多长时间。2.3.2使用注意事项在使用毛细管柱过程中，主要是防止固定液流失，因为固定液流失会使柱效能降低。事实上色谱柱固定液流失是自然的、是热力学平衡过程。色谱柱固定液聚硅氧烷通过聚合物本身的取代基形成环状分子。聚合物碎片之间由于取代基作用也可形成一些短键聚合物碎片。当这些碎片从色谱柱

36、流出，它们会被检测到，从而导致信号的增强。在毛细管柱使用的全过程中这种反应一直发生。因此，所有的色谱柱都有不同程度的流失。氧是导致严重柱流失的主要因素，在色谱分析时尽量减少色谱仪气路系统氧的含量、使用好材料的部件以及选择正确的操作条件，可降低柱固定液的流失，延长柱子使用寿命。· 下面介绍几点注意事项：（1）使用高纯度的载气。氧气含量不宜高于1 x10-6g/g；（2）利用净化器可以除去较低级别气体中的氧和碳氢化合物杂质。通常杂质含量可减少到100 x10-6g/g或更少；（3）聚合物材料通常不稳定。因此，调节器主体，阀盘座，密封圈和隔膜应首选金属材料；（4）管线只能使用没有油或其它污

37、染物的铜管或不锈钢管，推荐使用制冷级铜管。（5）形圈或其它聚合物垫圈的阀最好用有焊接金属、波纹形密封垫。（6）整个系统必须无泄露，并且确保样品中不存在非挥发性物质。因氧和污染物对固定液的分解有催化作用，会导致柱流失增强；（7）在柱子安装后加热柱箱之前，柱子必须用干净的载气清洗15 min。如果色谱仪是新的，或进样器和仪器管线进行维护或修理过，仪器应当再清洗15至30 min；（8）各种固定液的热稳定性不一样，柱流失对背景信号的影响随固定液种类和所受温度变化而变化。当柱箱温度接近于柱温的上线时柱流失也会增加。所以应当尽量在较低的温度下工作以延长柱子的使用寿命；（9）一旦柱子损坏，由于固定液降解的

38、程度不同，重新老化后有可能改善柱性能。2.4毛细管柱污染后清洗 2.4.1色谱工作者涉及两种类型污染：第一种不能洗脱的非挥发性物质；第二种最终能从柱子洗脱出来的半挥发性物质。柱子污染的症状为，产生吸附，出现鬼峰、脱尾峰、前延峰，发生分解，造成柱固定相过度流失和柱选择性改变。潜在的污染源包括：注射的样品、橡胶隔膜和金属垫碎屑、载气和捕集器中杂质以及其它来自外部如器皿和注射器中的杂质。2.4.2首先，最容易的补救方式是通过切除前端盘绕的色谱柱（大约50cm）。如果污染物位于柱子前端，那么色谱柱的性能会立即得到改 善。如果柱 性能没有得到改善，则可以判定污染物没有位于柱子的前端，下一步骤就是清洗进样

39、系统。进样口石英衬管将是造成柱子污染的主要原因，要及时更换清洗。如果进样口石英衬管没有污染，而且污染物又不位于柱子的前端，那么，可以判定整个柱子的固定相遭到严重污染。冲洗柱子通常会洗脱出绝大多数非挥发性和半挥发性组分。如果固定相是化学键合性质的，通常用有机溶剂冲洗，色谱柱是安全的。溶剂冲洗并不破坏键合型固定相。不过，要避免在Carbowax 或DB-Wax这样的腊质性固定相上用甲醇和水作溶剂冲洗，在管柱说明书上通常会注明可以使用哪些有机溶剂来清洗。最佳方式是采用一组溶剂依次进行柱冲洗。通常，最佳溶剂组为10ml甲醇，10ml二氯甲烷和10ml正己烷溶剂。如果必须用水去除盐类的话，那么在用甲醇冲

40、洗之前，先用10ml水进行冲洗。冲洗的方式是按照正常载气流速的反方向，从检测器端至进样口端方向进行冲洗。在所有冲洗结束之后，色谱柱重新使用之前，要用氮气通过柱子吹干30min至45min。在柱子加温之前，要用载气慢速吹干以防止损害固定相。2.4.3柱冲洗时应注意：柱固定相膜厚度2m 会出现溶胀现象冲洗时，要将柱子一端插入冲洗溶剂内，加压载气源将冲洗液从柱内洗脱出。冲洗柱子是去除污染物的最佳方式，但一般情况下，绝大多数人还喜欢选择高温老化方式去除柱内污染物。因为高温老化比较简便，因此也是一种去除污染物的有效方法。不过应注意，高温老化色谱柱也不是经常有效的，因为它仅仅去除挥发性和半挥发性组分。如果

41、污染物粘附在进样口或污染物是非挥发性的，那么长期高温老化色谱柱则难以解决这一问题。事实上，高温老化色谱柱所带来的弊病远远大于解决这一问题获得的好处。如果污染物是活性和非挥发性的，那么长期高温老化色谱柱则会缩短柱子的使用寿命。由此，这种高温老化也可以聚合某些污染物，导致色谱柱永久性损伤。高温老化色谱柱一般不超过1h至3h。色谱工作者应当认识到：只有半挥发和挥发性组分可以去除，当认为一根柱子被污染时，首先考虑的是应该对柱子进行冲洗，然后如果必要的话，才考虑高温老化方式。避免污染的方法首先在于预防。所有样品都含有残留物，并且每一个样品组分会经过一段时间后发生改变。无论如何精心操作，每一个样品肯定会比

42、上次注射进样时发生轻微改变。理由是分析样品中含有反应性或挥发性组分。化学催化剂及某些溶质其本身限制了柱子的使用寿命。具体表现为：酯类趋向于发生皂化反应；盐酸和内酯易发生水解反应；环氧化物在酸或碱环境中易发生开环反应。适当的样品制备可最低限度减少色谱系统内的污染。在进样口石英衬管内放置石英棉，可预防柱子非挥发性残留物的污染。应注意在每次分析之前，要确认溶剂是无污染的，注射器是干净的，样品存放器皿和容器是清洁的。如果固定相已经在化学性质上发生改变或损伤，那么没有什么方法可以将柱子恢复到它的原始状态。2.5常见问题2.5.1峰丢失（进样后没有峰出现）· 注射器有毛病，采用新注射器做验证&#

43、183; 未接入检测器或检测器不起作用，检查设定值。· 进样温度太低，检查温度，并根据需要调整。· 柱温温度太低，检查温度，并根据需要调整。· 无载气流量，检查压力调节阀，并检查泄露，验证柱样品流速。· 柱断裂，如果柱断裂是在柱进样口端或检测器末端，是可以补救的，切去断裂部分，重新安装。2.5.2前沿峰· 柱超载，减少进样量。· 两个化合物共洗脱，提高灵敏度和减少进样量，使温度降低1020，以使峰分开。· 样品冷凝，检查进样口和柱温，如有必要可以升温。· 样品分解，采用失活化进样器衬管或调低进样器温度。2.5.3拖

44、尾峰· 进样器衬套或柱吸附活性样品：更换衬套。如解决不了就将柱进样端截12cm，再重新安装。· 柱或进样器温度太低：升温（不要超过柱最高使用温度）。进样器温度应比样品最高沸点高20。· 两个化合物共洗脱：提高灵敏度和减少进样量，使温度降低1020，以使峰分开。· 柱已损坏：请更换柱。· 柱污染：将柱进样端截去12cm，再重新安装。2.5.4只有溶剂峰· 注射器有毛病：采用新注射器验证。· 不正确的载气流速（太低）：检查流速，如有必要，调整之。· 样品浓度太稀：请提高仪器灵敏度，或增加注入量。· 柱箱温度太

45、高：检查温度并根据需要调整。· 柱不能从溶剂中分离出组分：更换高膜厚的色谱柱或不同极性。· 栽气泄露：检查泄露处（肥皂水）。· 进样器衬套或柱吸附活性样品：更换衬套。如解决不了就将柱进样端截去12cm，再重新安装。2.5.5宽溶剂峰· 由于柱子安装不当，在进样口产生死体积：重新安装柱。· 进样技术差（进样太慢）：采用快速平稳进样技术。· 进样器温度太低：提高进样器温度。· 样品溶剂与检测相互影响二氯甲烷/ECD：更换样品溶剂。· 柱内残留样品溶剂：调整或清洗。· 隔垫清洗不当：调整或清洗。· 分流比不正确分流排气流速不足：调整流速。2.5.6假峰· 柱吸附样品，随后解吸：更换衬管，如不能解决问题，就从柱进样口端去掉12圈，再重新安装。· 注射器污染：用新的注射器及干净的溶剂试一试，如假峰消失，就将注射器冲洗几次。· 样品进样量太大：减少进样量。· 进样技术太差、进样太慢：采用快速平稳的进样技术。2.5.7过去工作良好的柱出现未分辨峰· 柱温不对：检查并调整温度。· 不正确的载气流速：检查并调整流速。· 样品进样量太大：减少样品