蛋白质和氨基酸的呈色反应-ppt课件

1、一、实验目的一、实验目的1 1、了解蛋白质和氨基酸的呈色反响原理、了解蛋白质和氨基酸的呈色反响原理2 2、学习几种常用的鉴定蛋白质和氨基酸的方、学习几种常用的鉴定蛋白质和氨基酸的方 法。法。3 3、了解呈色反响在定性和定量分析中的运用。、了解呈色反响在定性和定量分析中的运用。一双缩脲反响一双缩脲反响1、原理、原理 一切蛋白质或二肽以上的多肽都有双缩脲反响，但有双缩一切蛋白质或二肽以上的多肽都有双缩脲反响，但有双缩脲反响的物质不一定都是蛋白质或多肽。脲反响的物质不一定都是蛋白质或多肽。2、试剂1尿素210%氢氧化钠溶液31%硫酸铜溶液42%卵清蛋白溶液3、操作1 取少量尿素结晶，放在枯燥试管中。

2、用微火加热使尿素熔化，尿素放出氨 。熔化的尿素开场硬化时，停顿加热，构成双缩脲。冷后，加10%氢氧化钠溶液约1ml，振荡混匀，再加1%硫酸铜溶液1滴，再振荡。察看出现的粉红颜色。添加要防止过量硫酸铜，否那么，生成的蓝色氢氧化铜能掩盖粉红色。 2向另一试管加卵清蛋白溶液约1ml和10%氢氧化钠溶液约2ml，摇匀，再加1%硫酸铜溶液2滴，随加随摇。察看紫玫瑰色的出现。剂i二茚三酮反响二茚三酮反响 2 2、试剂、试剂1 1蛋白质溶液蛋白质溶液 新颖蛋清：水新颖蛋清：水=1:9)100ml=1:9)100ml 2 20.5%0.5%甘氨酸溶液甘氨酸溶液3 30.1%0.1%茚三酮水溶液茚三酮水溶液4

3、40.1%0.1%茚三酮茚三酮- -乙醇溶液乙醇溶液3 3、操作、操作1 1取取2 2支试管分别参与蛋白质溶液和甘氨酸溶支试管分别参与蛋白质溶液和甘氨酸溶液液1ml1ml，再各加，再各加0.5ml 0.1%0.5ml 0.1%茚三酮水溶液，混匀，茚三酮水溶液，混匀，在沸水浴中加热在沸水浴中加热1212分钟，察看颜色由粉色变紫分钟，察看颜色由粉色变紫色再变蓝。色再变蓝。2 2在一小块滤纸上滴一滴在一小块滤纸上滴一滴0.5%0.5%甘氨酸溶液，甘氨酸溶液，风干后，再在原处滴一滴风干后，再在原处滴一滴0.1%0.1%茚三酮乙醇溶液，茚三酮乙醇溶液，在微火旁烘干显色，察看紫红色斑点的出现。在微火旁烘干

4、显色，察看紫红色斑点的出现。剂i剂i三黄色反响三黄色反响1、原理、原理2 2、试剂、试剂1 1鸡蛋清溶液鸡蛋清溶液2 2头发头发 3 3指甲指甲 4 40.5%0.5%苯酚溶液苯酚溶液 5 5浓硝酸浓硝酸 6 60.3%0.3%色氨酸溶液色氨酸溶液7 70.3%0.3%酪氨酸溶酪氨酸溶液液8 810%10%氢氧化钠溶液氢氧化钠溶液33、操作、操作 向向6 6个试管中分别按下表参与试剂，察看各管出个试管中分别按下表参与试剂，察看各管出现的景象，有的试管反响慢可略放置或用微火加现的景象，有的试管反响慢可略放置或用微火加热。待各管出现黄色后，于室温下逐滴参与热。待各管出现黄色后，于室温下逐滴参与10

5、%10%氢氧化钠溶液至碱性，察看颜色变化。氢氧化钠溶液至碱性，察看颜色变化。剂i管管 号号1 12 23 34 45 56 6材材 料料（滴）（滴）蛋白蛋白质质溶液溶液4 4指甲指甲 少许少许头发头发 少许少许0.5%0.5%苯酚苯酚4 40.3%0.3%色氨色氨酸酸4 40.3%0.3%酪氨酪氨酸酸4 4浓硝酸浓硝酸（滴）（滴）2 2404040404 44 44 4现现 象象 剂i四乙醛酸反响四乙醛酸反响 1、原理、原理紫红色紫红色剂i2 2、试剂：、试剂：(1) (1) 蛋白质溶液蛋白质溶液 鸡蛋清：水鸡蛋清：水1 1：2020(2 (2冰醋酸冰醋酸(3) (3) 浓硫酸浓硫酸( (分析

6、纯分析纯) ) 3 3、操作、操作 向试管中加数滴蛋白质溶液，再加冰醋酸约向试管中加数滴蛋白质溶液，再加冰醋酸约1ml,1ml,倾斜倾斜试管，谨慎地沿着管壁加浓硫酸试管，谨慎地沿着管壁加浓硫酸(A(AR R) )约约1ml1ml，使，使其重叠，勿使两者混合。静置后，察看在两液界面其重叠，勿使两者混合。静置后，察看在两液界面上出现的红紫色环，于水浴中微热，可协助颜色构上出现的红紫色环，于水浴中微热，可协助颜色构成。成。 用用20%20%白明胶作乙醛酸反响。白明胶分子中无色氨酸，白明胶作乙醛酸反响。白明胶分子中无色氨酸，所以不呈此反响。所以不呈此反响。剂i (五)考马斯亮蓝反响1、原理考马斯亮蓝G250具有红色和蓝色两种颜色。在酸性溶液中，其以游离存在呈棕红色；当它与蛋白质经过疏水作用结合后变为蓝色。它染色灵敏度高，比氨基黑高3倍。反响速度快，约在2分钟左右时间到达平衡，在室温一小时内稳定。在0.011.0mg蛋白质范围内，蛋白质浓度与A595nm值成正比。所以常用来测定蛋白质含量。2、试剂 1蛋白质溶液鸡蛋清：水=1：20 5 ml 2考马斯亮蓝染液 300 ml考马斯亮蓝G250 100mg溶于50 ml 95%乙醇中，加100 ml 85%磷酸混匀，配成原液。临用前取原液15 ml，加蒸馏水至100 ml，用粗滤纸过滤后，最终浓度为0.01%