大肠杆菌的检测MPN计数法

1、食品微生物检验技术课程综述大肠杆菌的检测（MP"数法）院系：食品科学与药学学院班级：食科114姓名：张花学号： 114031431组长：张军玲成员：张花赵晶有B 朱娟娟 大肠杆菌Petrifilm 测试片计数法 摘要食品检测是反映食品加工、贮藏、运输、等环节的卫生与安全 状况的重要手段，而大肠菌群检测则是食品检测的重要指标均之一。 根据定义大肠菌群是在一定培养条件下能发酵乳糖、产酸产气的需氧 和碱性厌氧的革兰氏阴性芽胞杆菌。其主要检测意义在于反映食品卫 生状况并推测其在肠道致病菌的可能性。Petrifilm 大肠菌群测试片 是由美国3M生产的一种预先制备好的 VRB平板培养基系统，并

2、添加 了 TTC作为菌落指示剂便于菌落判读，而上层薄膜可以起到对大肠菌 群发酵产生的气体截留的作用。该方法目前已被多数权威机构认可， 并在国内很多实验室开展运用。关键词 大肠杆菌Petrifilm 测试法1/5下载文档可编辑1设备和材料1.1 恒温培养箱：36 ± 1C。1.2 冰箱25C。1.3 恒温水浴箱:44.5 ±0. 2CO1.4 天平：感量0.1g。1.5 均质器1.6 振荡器。1.7 无菌吸管:lmL（具0.01 mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度）或微量 移液器及吸头。1.8 无菌锥形瓶：容量500mL1.9 玻璃珠：直径约5mm1.10 pH计或pH比

3、色管或精密pH试纸1.11 试管架。2.培养基和试剂2.1 月桂基硫酸盐胰蛋白月东（LST ）肉汤。2.2 EC肉汤。2.3 蛋白月东水。2.4 缓冲葡萄糖蛋白月东水（MP-V戏验用）。2.5 磷酸盐缓冲液。2.6 无菌生理盐水：称取8.5g氯化钠溶于1000ml蒸储水中，121c高 压灭菌15min。2.71 mol/L氢氧化钠（NaOH :称取40g氢氧化钠溶于1000ml蒸储2/5下载文档可编辑水中2.81 mol/L盐酸（HCI）:移取浓盐酸90ml,用蒸储水稀释至1000ml3检验程序赛样25 E C或25 EL）样品+ 225血邪释液均质10倍系列稀释选择适宜2个3个连续稀释度的样

4、晶勺液，接种PeEfilmM测试36 P±1 P:H h±2h 或48 h±2h计数Petnillmm13试片上的蓝色带气泡幽报告第果4.样品稀释4.1 固体和半固体样品：以无菌操作将检样25mL样品，置盛有225mL磷酸盐缓冲液的无菌均质杯内或其他稀释液的灭菌锥形瓶内（瓶内予置适当数量的玻璃珠，经充分振摇或研磨做成1:10的均匀稀 释液。固体检样最好用均质器，以8 000-10 000 r/min的速度处理1 2min,做成1:10的样品均匀稀释液）。4.2 液体样品：以无菌吸管吸取样品25ml置盛有225mL磷酸盐缓 冲液的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的玻璃珠

5、）中，充分振摇，制 成1: 10的样品匀液。4.3 样品匀液的pH值应在6.57.5之间，必要时分别用1mol/L3/5下载文档可编辑 氢氧化钠（NaOH成1mol/L盐酸（HCI ）调节。4.4 用1mL灭菌吸管吸取1:10稀释液1mL,沿管壁缓缓注入含有 9mL磷酸盐缓冲液的无菌试管内，振摇试管混匀，做成1:100的稀释 液。4.5 根据对样品污染状况的估计，按上条操作依次做10倍递增稀 释液，每递增稀释一次，换用1支1mL灭菌吸管。从制备样品匀液至样 品接种完毕，全程不得超过15min。5检验5.1接种和培养选取23个适宜的连续稀释度的样品匀液，每个稀释度接种两张 测试片。将测试片置于平

6、坦实验台面上，揭开上层膜，用吸管吸取样 品匀液1ml垂直地价在测试片的中央，将上层膜缓慢盖下，避免气泡 产生和上层膜直接落下，将压板放置在上层膜中央处，轻轻地压下， 是样品匀液覆盖与圆形的培养膜表面，切勿扭转压板。拿起压板，静 置至少1min意识培养基凝固。将测试片的透明面朝上放于 36c的培 养箱内，地跌层数不超过20片，肉、家禽和水产品，培养时间为 24 ±2h;其他食品培养时间为48±2h。5.1判读可肉眼观察计数，或用菌落计数器、放大镜、 Petrifilm 自动判 读仪计数。蓝色有气泡的菌落确认为大肠杆菌，不论蓝色的深浅，部 分蓝色的带气泡菌落也判定为大肠杆菌。

7、圆形培养膜边缘及边缘以外 的菌落不计数。当测试片出现大量气泡、不明显的小菌落，培养区成4/5下载文档可编辑 蓝色时，需要进一步稀释样品匀液，重新检验。6大肠杆菌测试片技术的报告选择菌落数在15150之间的稀释度，两张测试片菌落平均乘以 稀释倍数，即为每克（或毫升）样品中大肠杆菌数，以CFU/g（CFU/ml） 表不。如果所有稀释度测试片上的菌落数都小于15,计数最低稀释度测试片上的平均菌落数乘以稀释倍数报告；如果所有稀释度测试片上均无菌落生长，以“小于1乘以最低稀释倍数”报告；如果所有稀释 度的菌落数都大于150,计数最高稀释度测试片上的平均菌落数乘以 稀释倍数报告。技术菌落数大于150个的测试片，可计数一个或两个 具有代表性的方格内的菌落数，换算成单个方格内的菌落数以后乘以 20,即为测试片上估算的菌落数（圆形生长面积为20c m2）。参考文献U13中华人民共和国