植物细胞的微核检测.

1、【植物细胞的微核检测】摘要：微核是真核类生物细胞中的一种异常结构，往往是细胞经辐射或化学药物的作用而产生的。本次试验主要采用煮沸的烟叶汁为材料，对培养的蚕豆根尖进行处理，并且通过固定，染色，镜检，观察微核的出现情况，于此同时用一定浓度的茶叶汁进行对照处理，研究茶叶汁是否能够对烟水的毒害产生缓冲作用。微核测试是一种比较理想的方法。目前国内外不少部门已把“微核测试用于辐射损伤、辐射防护、化学诱变剂、新药试验、染色体遗传疾病及癌症前期诊断等各方面。关键词：蚕豆 烟汁 茶叶 微核 毒害 前期诊断 Abstract: The micronucleus is a kind of abnormal stru

2、cture in eukaryotic organisms in the cells, is always generated cells through radiation or chemical drug action. This test mainly use of tobacco juice boiling material, carries on processing to the culture of Vicia faba root tip, and by fixing, staining, microscopic examination, observation of micro

3、nucleus occurrence, at the same time were treated with a certain concentration of tea juice, tea juice to study whether the smoke toxicity produced water cushion. Micronucleus test is an ideal method. At present many departments at home and abroad have put "micronucleus test for various aspects

4、 of radiation damage, radiation, chemical mutagens, drug testing, genetic diseases and cancer early diagnosis.Keywords: broad bean, tobacco juice, tea, micronucleus, poison, early diagnosis引言：微核(micronuclei)简称MCN,是真核类生物细胞中的一种异常结构，往往是细胞经辐射或化学药物的作用而产生的。在细胞间期，微核呈圆形或椭圆形，游离于主核之外，大小应有主核1/3以下。微核的折光率及细胞化学反应

5、性质和主核一样，也具合成DNA的能力。 一般认为微核是由有丝分裂后期丧失着丝粒的断片产生的，整条染色体或几条染色体也能形成微核。这些断片或染色体在细胞分裂末期被两个子细胞核所排斥便形成第三个核块。 微核率的大小是和用药的剂量或辐射累积效应呈正相关，这一点和染色体畸变的情况一样。所以许多人认为可用简易的间期微核计数来代替繁杂的中期畸变染色体计数。由于大量新的化合物的合成，原子能应用，各种各样工业废物的排出，使人们很需要有一套高度灵敏，技术简单的测试系统来监视环境的变化。只有真核类的测试系统更能直接推测诱变物质对人类或其它高等生物的遗传危害，在这方面，微核测试是一种比较理想的方法。目前国内外不少部

6、门已把“微核测试用于辐射损伤、辐射防护、化学诱变剂、新药试验、染色体遗传疾病及癌症前期诊断等各方面蚕豆(Vicia faba)是一种理想的细胞遗传学研究材料。蚕豆的染色体大，数量少(2n=12),根尖中含有较多的分裂相细胞，非常适合显微观察，而且蚕豆根尖细胞周期中的大部分时间对诱变剂敏感，便于遗传毒性检测实验，因此，早在1959年，放射生物学家已经用蚕豆的根尖细胞来进行X射线的遗传损伤研究。到了上世纪70年代，蚕豆根尖染色体畸变技术已发展得相当成熟，作为一种检测化学品遗传学毒性的方法为人们所知并被广泛采用。蚕豆根尖微核试验在 1986 年已被中国环保局列为一种环境生物测试的规范方法，它作为一种

7、环境变异的检测手段，在我国不少地区的环保部门和医疗卫生系统中都有广泛的应用。 一、实验目的 1、了解细胞微核形成的机理及其形态特点；2、学习蚕豆根尖细胞的微核检测技术。二、实验原理 1微核是真核类生物细胞中的一种异常结构，往往是细胞经辐射或化学药物的作用而产生的。在细胞间期，微核呈圆形或椭圆形，游离于主核之外，大小应在主核1/3以下。微核的折光率及细胞化学反应性质和主核一样，也具合成DNA的能力。 2本次试验主要采用煮沸的烟叶汁为材料，对培养的蚕豆根尖进行处理，并且通过固定，染色，镜检，观察微核的出现情况。于此同时用一定浓度的茶叶汁进行对照处理，研究茶叶汁是否能够对烟水的毒害产生缓冲作用。三、

8、实验材料香烟，绿茶，蚕豆，四、实验仪器 显微镜、恒温培养箱、恒温水浴锅、镊子、载玻片及盖玻片等。五、实验步骤（一）浸种催芽：选饱满蚕豆种子，放于蒸馏水中浸泡24小时，此间换水两次。待种子吸胀后，转入铺有脱脂棉的培养皿中培养，每天换水一次培养三天，初生根长12厘米待用。（二）处理根尖：取1.25克香烟丝于烧杯中加入250毫升蒸馏水加热煮沸，冷却后待用。取4.7克茶叶于烧杯中加入300毫升蒸馏水加热煮沸冷却后过滤待用取6只培养皿，铺上脱脂棉，将检测液分别加入培养皿中，并且编号，另取一组加蒸馏水的培养皿做对照组，分别选取4枚蚕豆放于脱脂棉上，培养24小时培养皿编号：1：未稀释的烟汁2：烟汁：蒸馏水=

9、1：1 3：烟汁：蒸馏水=1：34：烟汁：蒸馏水=1：55: 烟汁：茶水：蒸馏水=1：1：16：蒸馏水（三）恢复培养：处理后的根尖用自来水浸洗3次，每次2-3min，洗净后在水中恢复培养24h。（四）固定：用甲醛：冰醋酸（3：1）固定液固定24h后弃去固定液。（五）酸解： 弃去固定液，用清水漂洗2-3次，吸净水，加入6M盐酸，于室温解 离10min，弃去盐酸，漂洗根尖2-3次，彻底洗净 盐酸。（六）染色：截下1-2mm长的根尖，滴加石炭酸品红染液， 染色10min，加盖玻片，压片，镜检观察。六、注意事项：培养蚕豆时需勤换水处理蚕豆时要将根部浸没于处理液中固定液要现配现用七、实验结果微核形成与识

10、别：首先在低倍镜中找到分生组织区细胞分散均匀，分裂相较多的部位，再转高倍镜观察，找到微核。 （1）在主核大小的1/3以下，并与主核分离的小核。 （2）小核着色与主核相当或稍浅。 （3）小核形态为圆形、椭圆形或不规则型。 微核千分率（ MCN ） 每一处理观察3个根尖，每个根尖计数100个-300细胞，统计其中含的细胞数，计算平均数，即为该处理的微核千分率。1、未稀释的烟汁未稀释的烟水的根尖长势不好。MCN=18左右，浓度太大，导致根尖不生长，在此忽略此结果。2、烟汁：蒸馏水=1：1 烟水：蒸馏水=1：1的处理液微核出现的最明显。MCN=100左右，污染指标（PI）=14.293、烟汁：蒸馏水=1：3烟水：蒸馏水=1：3也出现的微核，比1:1的较少些MCN=79左右，污染指标（PI）=11.034、烟汁：蒸馏水=1：5烟水：蒸馏水=1：5出现的微核较少。MCN=60左右，污染指标（PI）=8.575、烟汁：茶水：蒸馏水=1：1：1烟水：蒸馏水：茶水=1：1：1的根尖长势不好。MCN=17左右，浓度太大，导致根尖不生长，在此忽略此结果6、蒸馏水对照组未出现微核。 MCN=7左右八、讨论1、高浓度烟汁引起微核量下降的可能原因：造成上述现象的原因可能是过多的有害物质引起蚕豆根尖细胞伤害，进一步引起细胞反应性降低造成的。试验中还发现，蚕豆根尖经过未稀释烟汁处理后外观呈