BCA蛋白检测方法_第1页
BCA蛋白检测方法_第2页
BCA蛋白检测方法_第3页
BCA蛋白检测方法_第4页
全文预览已结束

下载本文档

版权说明：本文档由用户提供并上传，收益归属内容提供方，若内容存在侵权，请进行举报或认领

文档简介

1、BCA蛋白检测方法蛋 白 检 测 方 法Bicinchoninicacid(BCA)法是近来广为应用的蛋白定量方 法。其原理与Lowery法蛋白定量相似，即在碱性环境下蛋 白质与Cu2+络合并将Cu2+还原成61 +。BCA与Cul+结 合形成稳定的紫蓝色复合物，在562nM处有高的光吸收值 并与蛋白质浓度成正比，据此可测定蛋白质浓度。与 Lowery法相比，BCA蛋白测定方法灵敏度高，操作简单， 试剂及其形成的颜色复合物稳定性俱佳，并且受干扰物质 影响小。与Bradford法相比，BCA法的显着优点是不受去 垢剂的影响。BCA定量中的A和B液BCA定量中的A和B液的成分是什么，作用是什么？

2、试剂 A : BCA(bicinchoninincacid)碱性溶液 试剂B :硫酸铜溶液作用:BCA与二价铜离子的硫酸铜溶液等其他试剂组成的 试剂，混合后显示苹果绿色。在碱性条件下，BCA与蛋白 质结合时，蛋白质将Cu2+还原为Cu+,个Cu+螯合两个 BCA分子，工作试剂由原来的苹果绿形成紫色复合物。 试剂试剂A:含1%BCA二钠盐、2%无水碳酸钠、0.16%酒石 酸钠、0.4%氢氧化钠、0.95%碳酸氢钠，将上述液体混合后 调 pH 至 11.25O(2) 试剂B : 4%硫酸铜。(3) BCAT作液：试剂A100mL+试剂B2L,混合。(4) 蛋白质标准液：准确称取150mg牛血清白蛋

3、白，溶于 lOOmL蒸镭水中，即为1.5mg/mL的蛋白质标准液。(5) 待测样品。1、将上述各管混匀后于37弋保温30分钟，用562nm波长 比色测定吸光度值。2、以蛋白质含量为横坐标，光吸收值为纵坐标绘制标准曲 线。3、用测定管光吸收值在标准曲线上查找相应的蛋白质含 量，再计算出待测血清中蛋白质浓度(g/L)。待测样品浓度在50 2000微克/毫升浓度范围内有较好的 线性关系BCA蛋白检测BCAProteinAssay是基于在碱性条件下，62+被蛋白还原成 Cu+,进而发生高敏感性和选择性的颜色变化，通过分光测 定，精确定量蛋白质浓度。此方法与Bradford蛋白检测一 道，并列成为当今世

4、界上最为常用的两种蛋白浓度检测方 法。特点：1 高兼容性，尤其适用于表面活性剂存在下的蛋白浓度检 测，如细胞或组织的蛋白提取物。2 高敏感度。可精确定量12000pg/ml蛋白样品。3.受温度和时间影响较大，需准确定时、定温，以保证蛋白 的精确定量。4.检测蛋白提取物或纯化蛋白样品，应使用相 应的缓冲液制备蛋白标准曲线。同时样品的检测条件要与 蛋白标准曲线的检测条件保持一致，如37C。放置30分钟。 5.562nm测定，也可用接近的波长检测，如570nmo6此检测试剂不受绝大部分样品中的化学物质的影响，可兼 容样品中高达5%的SDS, 5%的TritonX-100, 5%的Tween20, 60, 80o但受螯合剂和略高浓度

人人文库> 全部分类> 教育资料 > 备课教案

温馨提示

  • 1. 本站所有资源如无特殊说明，都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
  • 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等，如果需要附件，请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
  • 3. 本站RAR压缩包中若带图纸，网页内容里面会有图纸预览，若没有图纸预览就没有图纸。
  • 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
  • 5. 人人文库网仅提供信息存储空间，仅对用户上传内容的表现方式做保护处理，对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑，并不能对任何下载内容负责。
  • 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容，请与我们联系，我们立即纠正。
  • 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。

最新文档

评论

0/150

提交评论