专题二微生物的培养和应用

1、专题二专题二考点一考点一 微生物的培养与计数微生物的培养与计数考点二考点二 微生物的分离微生物的分离考点一微生物的培养与计数考点一微生物的培养与计数温度温度温度温度特殊营养物质如特殊营养物质如生长因子生长因子：微生物生长必需，而自身不能合：微生物生长必需，而自身不能合成的化合物，如：维生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶等。成的化合物，如：维生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶等。(3)(3)种类：按功能分为种类：按功能分为种类种类制备方法制备方法原理原理用途用途举例举例选择选择培养基培养基加入某些加入某些特殊的化特殊的化学物质学物质依据微生物依据微生物对某些物质对某些物质的依赖性或的依赖性或抗性而设计抗性而

2、设计从多种微生从多种微生物中分离出物中分离出所需微生物所需微生物加入青霉素杀加入青霉素杀死细菌死细菌, ,进而进而分离得到酵母分离得到酵母菌和霉菌等菌和霉菌等鉴别鉴别培养基培养基加入某种加入某种指示剂或指示剂或化学药品化学药品依据指示剂依据指示剂或化学药品或化学药品产生特定颜产生特定颜色或其他变色或其他变化化从多种微生从多种微生物中鉴别出物中鉴别出某些种类的某些种类的微生物微生物用刚果红培养用刚果红培养基鉴别分解纤基鉴别分解纤维素的微生物维素的微生物(3)(3)种类：按化学组成分为合成培养基和天然培养基种类：按化学组成分为合成培养基和天然培养基注意注意(1)(1)并不是所有培养基的营养成分都相

3、同。并不是所有培养基的营养成分都相同。自养微生物能够利用空气中的自养微生物能够利用空气中的COCO2 2合成有机物合成有机物, ,培养基中不需培养基中不需加入有机碳源加入有机碳源( (可加入无机碳源可加入无机碳源) )。固氮微生物能够固定空气中的固氮微生物能够固定空气中的N N2 2, ,合成氨态氮合成氨态氮, ,培养基中不需培养基中不需添加氮源。添加氮源。(2)(2)培养基中不同的营养成分可以由同一物质提供培养基中不同的营养成分可以由同一物质提供, ,有些物质有些物质, ,如如NHNH4 4HCOHCO3 3, ,既是氮源也是某些自养生物的碳源。既是氮源也是某些自养生物的碳源。（4 4）消毒

4、与灭菌）消毒与灭菌条件条件结果结果常用方法常用方法应用范围应用范围消毒消毒较为温和较为温和的物理或的物理或化学方法化学方法仅杀死物体表仅杀死物体表面或内部的部面或内部的部分微生物分微生物( (不包不包括芽孢和孢子括芽孢和孢子) )煮沸消毒法煮沸消毒法日常用品日常用品巴氏消毒法巴氏消毒法不耐高温的不耐高温的液体液体化学药剂化学药剂消毒法消毒法用酒精擦拭用酒精擦拭双手双手, ,用氯用氯气消毒水源气消毒水源灭菌灭菌强烈的强烈的理化因素理化因素杀死物体内外杀死物体内外所有的微生物所有的微生物( (包括芽孢和孢包括芽孢和孢子子) )灼烧灭菌法灼烧灭菌法接种工具接种工具干热灭菌法干热灭菌法玻璃器皿、玻璃器

5、皿、金属工具金属工具高压蒸汽高压蒸汽灭菌法灭菌法培养基及相培养基及相关容器关容器3.大肠杆菌纯化培养大肠杆菌纯化培养计算计算称量称量溶化溶化灭菌灭菌倒平板倒平板根据配方比例根据配方比例准确称取各成分准确称取各成分玻棒不断搅拌，防止琼脂糊底导致烧杯破裂玻棒不断搅拌，防止琼脂糊底导致烧杯破裂培养基（高压蒸汽灭菌）、培养皿（干热灭菌）培养基（高压蒸汽灭菌）、培养皿（干热灭菌）见教材见教材P17（1）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基1.1.培养基灭菌后，需要冷却到培养基灭菌后，需要冷却到50 50 左右时，才能左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？用来倒平板。你

6、用什么办法来估计培养基的温度？答：可以用手答：可以用手触摸触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。2.2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？答：通过答：通过灼烧灭菌灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。，防止瓶口的微生物污染培养基。3.3.平板冷凝后，为什么要将平板平板冷凝后，为什么要将平板倒置倒置？4.4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生盖与皿底之间

7、的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？物吗？为什么？答：凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板答：凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入凝结水珠培养基，造成可以防止皿盖上的水珠落入凝结水珠培养基，造成污染。污染。答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此基上滋生，因此最好不要最好不要用这个平板培养微生物。用这个平板培养微生物。（2 2）纯化大肠杆菌）纯化大肠杆菌、平板划线法、平板划线法原理：原理： 最最常用常用的

8、接种方法是的接种方法是平板划线法平板划线法和和稀释涂布平板法稀释涂布平板法通过通过接种环接种环在琼脂固体培养基表在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌面连续划线的操作，将聚集的菌种种逐步稀释逐步稀释分散到培养基表面。分散到培养基表面。经过数次划线后培养，可以分离经过数次划线后培养，可以分离到由到由一个细胞一个细胞繁殖而来的肉眼可繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体，这就是见的子细胞群体，这就是菌落菌落。灼烧接灼烧接种环种环冷冷却却 划线划线 （第一区域）（第一区域）蘸取菌蘸取菌液液灼烧接灼烧接种环种环冷冷却却 划线划线 （第二区域）（第二区域）灼烧接灼烧接种环种环冷冷却却 划线划线 （第三区

9、域）（第三区域）灼烧接灼烧接种环种环冷冷却却 划线划线 （第四区域）（第四区域）灼烧接灼烧接种环种环冷冷却却 划线划线 （第五区域）（第五区域）灼烧接灼烧接种环种环平板倒置放置平板倒置放置培养培养接种环的灼烧。接种环的灼烧。(1)第一次操作：第一次操作： 。(2)每次划线之前：杀死每次划线之前：杀死 残留的菌残留的菌种，使种，使 的菌种直接来源于上次划线的末端。的菌种直接来源于上次划线的末端。(3)划线结束后：杀死划线结束后：杀死 ，避免细菌污染环，避免细菌污染环境和感染操作者。境和感染操作者。灼烧接种环之后灼烧接种环之后,要冷却后再进行操作要冷却后再进行操作,以免温度太高杀死菌种。以免温度太

10、高杀死菌种。划线时最后一区域不要与第一区域相连。划线时最后一区域不要与第一区域相连。划线用力要大小适当划线用力要大小适当,不能用力过大将培养基划破。不能用力过大将培养基划破。菌落是区菌落是区分菌种的分菌种的种的重要种的重要依据。依据。. .稀释涂布平板法稀释涂布平板法: :是将菌液进行一系列的是将菌液进行一系列的 ，然后，然后将将 的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。当当稀释倍数足够高时，即可获得单个细菌形成的菌落。稀释倍数足够高时，即可获得单个细菌形成的菌落。 稀释操作时稀释操作时, ,每支试管及其中的每支试管及其中的9 mL9 m

11、L水、移液管等均需灭菌水、移液管等均需灭菌; ;操作时操作时, ,试试管口和移液管应在离火焰管口和移液管应在离火焰1 12 cm2 cm处。处。涂布平板时。涂布平板时。a.a.涂布器用体积分数为涂布器用体积分数为70%70%的酒精消毒的酒精消毒, ,取出时取出时, ,让多余酒精在烧杯中滴尽让多余酒精在烧杯中滴尽, ,然后将沾有少量酒精的涂布器在酒精灯火焰上引燃。然后将沾有少量酒精的涂布器在酒精灯火焰上引燃。b.b.不要将过热的涂布器放在盛有酒精的烧杯中不要将过热的涂布器放在盛有酒精的烧杯中, ,以免引燃其中的酒精。以免引燃其中的酒精。c.c.酒精灯与培养皿距离要合适酒精灯与培养皿距离要合适,

12、,移液管管头不要接触任何物体。移液管管头不要接触任何物体。不同稀释度不同稀释度1 1、梯度稀释、梯度稀释2 2、涂布平板、涂布平板（3 3）两种纯化细菌方法优缺点的比较）两种纯化细菌方法优缺点的比较4.4.微生物的计数：微生物的计数：原理原理方法方法缺点缺点显微镜显微镜直接计直接计数法数法利用特定细菌计数板利用特定细菌计数板或血细胞计数板或血细胞计数板, ,在显在显微镜下计算一定容积微镜下计算一定容积的样品中微生物的数的样品中微生物的数量量用血细胞计数用血细胞计数板计数板计数观察到单个细菌观察到单个细菌, ,但不能区分死菌与但不能区分死菌与活菌，导致统计的活菌，导致统计的数值比真实数值偏数值比

13、真实数值偏大大活菌计活菌计数法数法 ( (间接计间接计数法数法) )当样品的稀释度足够当样品的稀释度足够高时高时, ,培养基表面生长培养基表面生长的一个菌落的一个菌落, ,来源于样来源于样品稀释液中的一个活品稀释液中的一个活菌菌设置重复组取设置重复组取平均值计数平均值计数; ;计数菌落数在计数菌落数在3030300300之间的平之间的平板板由于可能存在多个由于可能存在多个活菌堆叠在一起长活菌堆叠在一起长成一个菌落成一个菌落, ,导致导致活菌计数法推算所活菌计数法推算所得数值要比真实数得数值要比真实数值偏低。值偏低。考点二微生物的分离考点二微生物的分离把未接种的空白培养基放在适宜条件下保温，一段

14、时间后观把未接种的空白培养基放在适宜条件下保温，一段时间后观察有无菌落形成察有无菌落形成A一个平板，统计的菌落数是一个平板，统计的菌落数是230B两个平板，统计的菌落数是两个平板，统计的菌落数是220和和260，取平均值，取平均值240C三个平板，统计的菌落数分别是三个平板，统计的菌落数分别是210、50和和520，取平，取平均值均值260D四个平板，统计的菌落数分别是四个平板，统计的菌落数分别是210、300、240和和250，取平均值取平均值250(1)(1)接种前需要对培养基及培养皿等进行灭菌，常接种前需要对培养基及培养皿等进行灭菌，常用的灭菌方法是用的灭菌方法是_ _ _。培养基中加入

15、培养基中加入化合物化合物A A的目的是筛选的目的是筛选_。(2)(2)实验需要振荡培养，由此推测实验需要振荡培养，由此推测“目的菌目的菌”的代的代谢类型是谢类型是_。(3)(3)培养若干天后，应选择培养瓶中化合物培养若干天后，应选择培养瓶中化合物A A含量含量_的培养液，接入新的培养液中连续培养，的培养液，接入新的培养液中连续培养，使使“目的菌目的菌”的数量的数量_。(4)(4)转为固体培养时，为获得单菌落进行继续筛选，常采用平板划线法或转为固体培养时，为获得单菌落进行继续筛选，常采用平板划线法或_法，接种后，应将培养皿法，接种后，应将培养皿_(_(填填“正放正放”或或“倒置倒置”)”)。高压蒸汽灭菌法高压蒸汽灭菌法目的菌目的菌异养需氧型异养需氧型减少减少增加增加稀释涂布平板稀释涂布平板倒置倒置灭菌灭菌D否。水葫芦会造成外来物种的入侵否。水葫芦会造成外来物种的入侵含义含义作用作用来源来源水水优良的溶剂优良的溶剂培养基、大气、代培养基、大气、代谢产物谢产物碳源碳源能够提供碳元素能够提供碳元素的物质的物质构成生物体的物质构成生物体的物质; ;异养生物的能源物质异养生物的能源物质含碳有机物和含碳含碳有机物和含碳无机物无机物氮源氮源能够提供氮元素