短串联重复系列在胎儿性别鉴定中的应用

1、短串联重复系列在胎儿性别鉴定中的应用Y 染色体大部分不与 X 染色体重组， 这些非重组区只 能由父亲传给儿子。 现已发现了一些 Y 染色体特异短串联重 复序列( Y chromosome specific short tandem repeat ，简称 Y 染色体特异STR),为研究群体亲缘关系提供了新型的遗传 标记来源 1-2 。因此，检测孕妇外周血中是否存在某些 Y 染 色体特异重复系列就可能预测胎儿性别，这为胎儿伴性遗传 病的风险估计提供可能，为优生优育提高人口质量有重要意 义。笔者对 20 位孕妇及其丈夫外周血浆进行 Y 染色特异短 串联重复系列的检测，将预判结果与产后随访结果比较，旨

2、 在探索一种简便可靠的早期胎儿性别鉴定方法。1 材料与方法1.1 模板 DNA 片段提取从 20 名孕妇及其丈夫抽取外周血 5 mL ，EDTA-K2 抗凝， 4C低温离心分离血浆，以蔗糖为介质进行密度梯度离心， 然后纯化 DNA 并配成一定浓度范围。1.2 实时荧光 PCR 检测 Y 染色体特异短串联重复系列 扩增的特异短串联重复系列见表 1，引物及探针由美国Promega公司生产提供。总反应体积为25卩L,含有1X PCR 缓冲液(10 mmol/L Tris-HCI , 50 mmol/L KCI ), 100 卩 mol/LdNTP , 1.5 mmol/L MgCI2 ,0.4 卩

3、mol/L 引物，和 5U TaqDNA 聚合酶，每个反应里有提取DNA 5卩L,在Gene Amp 9700进行热循环，条件如下：起始变性温度T为90 C 10 min ,接下来进行 30个循环，90C 30 s, 58C 15 min，和72C 15 s,最终60C延伸1 min。每个血浆样本进行测试2次，双蒸水作为空白对照。2 结果20 例孕妇标本查出有 DYS19 产物 9 例, DYS389 产物12 例, DYS390 产物 12 例, DYS393 产物 10 例,孕妇中扩 增到的短串联重复系列在丈夫标本内都检测到。根据检测到 其中一种系列者为男性标准, 20 例孕妇有 13 例

4、怀男性胎儿, 其结果与产后随访完全一致。见表 2。3 讨论目前有 200 多种伴性遗传病,杜绝或减少遗传病患儿的 出生是关系到家庭幸福与社会人口质量的重要问题。对胎儿 进行早期性别鉴定,对有患病风险者进行人工终止妊娠是减 少此类患儿发生重要手段。目前关于胎儿性别鉴定的方法有 多种。它们存在各种各样的缺陷,有的要求妊娠时间过长, 实行终止妊娠手术给孕妇带来身体上和精神上负担过大；有 的标本取材较难有一定的风险,或实验时间过长不方便患 者；有的准确度尚不能达到临床要求。笔者以孕妇和其丈夫 外周血浆为标本,采用实时荧光 PCR 技术进行 Y 染色体特异重复序列分析，基本克服了以上诸多缺点现已有研究发

5、现， 母 -胎之间存在微量血液交换， 母亲体 内存在极少的胎儿红细胞和核酸片段，胎儿来源的核酸片段 较母亲自身的片段短 3-4 。所以，通过密度梯离心技术可以 浓集核酸的同时也可以区分不同来源的核酸，可以得到更纯 的胎儿 DNA 模板。实时荧光 PCR 技术操作简便，封闭操作 污染少，背景干扰小，结果判断客观。 Y 染色体短串联重复 系列只能由父传给儿子，所以本方法特异性好，同时串联重 复系列备份多，所以较其他系列更易得到扩增产物，加之测 定多个短串联重复序列，使得方法灵敏度较高。以父亲血浆 标本扩增结果作为对照，防止亲代不存在所选特异短串联重 复系列所致假阴性的可能。本研究结果显示，怀男性胎儿孕 妇查出 Y 染色体短串联重系列数平均为 3.31±0.63，4 种或 任何 3 种组合短串联重复系列至少检出其中一种的概率为 100%（ 13/13），即准确度为 100%。这说明孕妇外周血中确 实存在胎儿核酸片断，以此模板扩增性别决定基因进行胎儿 性别鉴定是完全可行。但不同个体检出的系列有微小差别， 这可能是因为短串联系列在群体间存在突变5 ，此突变对性别判断的影响可被多重 PCR 检测多个短串联重复系列所克