无菌产品的生产和质量控制

1、无菌产品生产、质量控制主要内容无菌产品的高风险分析厂房设计、洁净度级别和环境控制设备生产工艺配制过滤无菌灌装灭菌工艺无菌检查物料质量控制人员监控无菌服消毒剂清洁消毒用具无菌产品的高风险分析一般质量要求 无菌成品中不得含有任何活的微生物 无热原特别是供静脉及脊椎注射的制剂 澄明度不得有肉眼可见的浑浊或异物 安全性不能引起对组织的刺激性或发生毒性反应，特别是一些非水溶剂及一些附加剂，必须经过必要的动物实验，以确保安全（参照注射剂进行如下分析、讲解）一般质量要求 渗透压与血浆的渗透压相等或接近 pH要求与血液相等或接近（血液pH7.4） 必要的物理和化学稳定性，以确保产品在储存期内安全有效 降压物质

2、有些注射液，如复方氨基酸注射液，其降压物质必须符合规定，确保安全无菌生产的风险分析主要影响因素1.厂房2.设备3.工艺过程4.物料质量控制5.人员 6.无菌服7.消毒剂8.器具无菌生产的管理要点 防止微生物污染 防止热原或细菌内毒素的污染 防止产品中有异物厂房设计、洁净度级别和环境监控厂房常见缺陷 采用无菌工艺制造的洁净区内，无菌的操作区与有菌的操作区未完全分开 冻干灌装区所用工器具灭菌后，经事实上的非无菌区进入无菌区，带来微生物污染风险 无菌区设水池及洁具间，或设地漏 无菌区设单独的废物区 洁净区压差监控不到位采用最终灭菌工艺生产的灌装间倒压差 厂房有重大变更，不做确认和验证无菌操作区布局示

3、例图一小机修零备件缓冲穿洁净衣暂存废物间洁具间废物暂存传递窗缓冲缓冲扎盖间灯检缓冲不合格品铝盖拆包铝盖灭菌铝盖存放缓冲女穿衣女更外穿洁净衣脱外衣更鞋原料拆包胶塞清洁灭菌缓冲穿无菌服二更缓冲间洁具间清洁灭菌器具存放间胶塞存放原料暂存缓冲粉针容器消毒冻干物料进口缓冲配液间滤过间无菌分装脱包缓冲脱衣缓冲洗瓶机电控洗瓶间隧道式干热灭菌器药液灌装间车间化验工长室冻干机房穿洁净衣脱衣走廊走廊前室缓冲无菌操作区布局示例图二技术夹层、CIP、SIP管控制柜脱、洗目检与包装已轧盖小瓶灭菌工具箱灭菌釜电气柜装匣传递窗公用工程图例人流注射用水系统中央控制室冷冻干燥机100冻干室LAF物流灌装压铝盖半成品暂存穿、消安

4、全门预留部分装盒LAF10 000LAF 层流清洗烘干机洗灭准备区小瓶流向LAF工具箱洗瓶备件库原辅材料、胶塞物流脱衣更衣灭菌柜更衣消毒隧道灭菌釜LAF配制缓冲缓冲WFI脱衣备件清洁洁净环境监控洁洁 净净 级级 别别尘粒数尘粒数 / 立方米立方米微生物最大允许数微生物最大允许数 0.5m 5m浮游菌浮游菌CFU /立方米立方米沉降菌沉降菌CFU/皿皿 ( 90 mm 半半 小小 时时 )100 3 50005110 000 350 0002 0001003100 000 3 500 00020 00050010300 000 10 500 00060 000-15来源：来源：YY_0033-2

5、000_YY_0033-2000_无菌医疗器具生产管理规范无菌医疗器具生产管理规范关键操作区气流方向示例一MMSCIP灭菌直接包材接触部100级10000级关键操作区气流方向示例二MMSCIP灭菌直接包材接触部0.4520% m/sGrade”A”Grade”B”关键点操作者不能进入Grade”A”区域。厂房管理要点 厂房布局和建造 厂房布局的合理性（例人员进出分开，尽可能涉及观察窗监控设施，称量区域防尘要求、特殊药品布局要求以及排风尾气的处理措施等） 厂房密封性（特别是与灭菌设备相连处）及SOP规定 厂房表面的完好性（包括门） 人物进出口的管理（物料气闸、传递窗等互锁延时装置、门禁） 温湿度

6、适合产品生产 地漏的设置和清洁消毒 洁净厂房材质要求（熏蒸消毒的影响） 洁净室灯具安装要求厂房管理要点 洁净度级别的标准 关键操作区的流型测试（干冰、发烟笔，录像） 洁净区的压差（绝对压差的控制、压差梯度的控制、压差报警） 洁净区的清洁和消毒（消毒效果确认、周期、消毒方式等） 环境监控 动态的粒子数和微生物数（在线监测装置的应用，检测时间、采样量、频率、采样位置等） HVAC系统的维护和监控生产设备生产设备的常见缺陷 储存除菌过滤后药液的高位槽呼吸口未安装呼吸器 与产品直接接触的压缩空气、惰性气体未确认是否符合生产要求 灭菌和冻干设备管理不到位 温度探头或控制仪未校准 温度探头损坏维修不及时

7、（干热、湿热）灭菌设备无自动记录装置 （干热、湿热）灭菌设备的自动记录未归档 未使用联动生产线，采用单机灌封灭菌设备自动记录曲线图示例生产设备管理要点 适用于产品的生产、清洁、消毒或灭菌 尽可能采用密闭系统 合理布置和安装 关键参数控制和记录仪表的校准 设备的确认、维护和维修 设备的清洁、消毒或灭菌 共用设备应有防止交叉污染的措施 设备应在确认的范围内使用除菌过滤系统管理要点滤芯供应商选择滤芯材质选择（与注册资料一致）滤芯相容性试验（包括吸附试验）滤芯微生物挑战试验滤芯完整性检测滤器系统的在线或离线清洗灭菌、 安装（防止二次污染） 过滤器安防的位置要求滤芯使用次数的确认（最后一级建议一次使用，

8、除非经过验证）滤芯的保存方式滤芯的更换记录（QA确认）生产用隔离器示例一生产用隔离器示例二生产用隔离器示例三工艺用水系统常见问题 注射用水和纯化水标准不符合药典标准 工艺用水未做微生物限度的检测 注射用水和纯化水的微生物限度检查未采用薄膜过滤法 注射用水循环系统温度检测点安装位置不合理，不能反映系统保持80以上循环 未监测注射用水关键使用点的细菌内毒素工艺用水系统管理要点 水处理设施及其分配系统的设计、安装和维护应能确保供水达到适当的质量标准。水系统的运行不应超越其设计能力。 注射用水的生产、贮存和分配方式应能防止微生物生长，例如，在80以上保持循环 水源、水处理设施及水的化学和生物学污染状况

9、应定期监测，必要时还应监测细菌内毒素。监测结果以及所采取纠偏措施的记录应予归档无菌生产工艺无菌生产关键工序配制过滤无菌灌装/灭菌无菌生产管理要点 生产加工的每个阶段（包括灭菌前的各阶段）都必须采取预防措施，以尽可能降低污染配制工序 常见问题 提高称量配制区域的洁净度级别，使其与灌装区域一致，共用同一洁净区的更衣设施、走廊和HVAC系统 称量操作位置的正上方安装高效空气层流 不注意物料称量的先后顺序 整包装的物料不称量即投料 不按照规定的处方配制 称量记录不完整 操作区域受到活性炭污染配制区域的洁净度级别 应单独设置，注意称量区的空气流向，防止粉尘扩散 应根据产品的特性设定相应的洁净度级别GMP

10、附录无菌医疗器械规定：2.2.7 对于有要求或采用无菌操作技术加工的无菌医疗器械（包括医用材料），应当在10,000级下的局部100级洁净室（区）内进行生产。2.2.8 洁净工作服清洗干燥间、洁具间、专用工位器具的末道清洁处理与消毒的区域的空气洁净度级别可低于生产区一个级别，但不得低于300,000级。无菌工作服的整理、灭菌后的贮存应当在10,000级洁净室（区）内。称量工序 必须按照注册批准的处方配料 称量中应特别注意防止交叉污染一次称量一种物料通常先称量辅料，后称量原料药活性炭应在单独区域中称量，称量后放在水溶液中 衡器使用前应检查校准 称量记录最好采用客观的记录如实记录衡器的读数复核配制

11、、称量工序管理要点 操作区的设置和洁净度级别 配料处方 称量操作 称量记录 防止污染和交叉污染的措施过滤工序常见问题 过滤器的安装位置远离灌装点 采用无菌制造工艺时，除菌过滤的有菌操作区与无菌操作区未分隔 未记录所用过滤器的型号、来源、批号 不做过滤器的完整性试验 过滤器完整性试验的合格标准设定不正确 过滤后的溶液存放在开口的容器中除菌滤器管理要点 除菌过滤用过滤器通常使用2只串联方式，确保过滤的可靠性 可能情况下，应在紧挨灌装点的位置，用除菌过滤器将所有药液，特别是大容量注射剂进行除菌过滤 采用无菌制造工艺时，除菌过滤操作区域不得设在无菌操作区内，可通过管道传送滤液过滤器完整性试验 过滤器的

12、相关信息应具有可追溯性 完整性试验的合格标准应参照供应商的说明书设定 应在过滤前、过滤后分别测试 测试方法 起泡点试验 前进流试验 微生物挑战性试验由供应商做，以避免污染产品起泡点试验示意图 压缩空气 或氮气 压力表阀门压力表滤芯外壳 排污阀阀门亲水滤器起泡点试验水剂产品以产品或水湿润滤膜 0.2 参考压力 0.31 MPa 0.45 参考压力 0.23 MPa详见供货商说明书疏水性滤器起泡点疏水性滤器起泡点6060( (v/v)v/v)异丙醇水溶液异丙醇水溶液6060-70-70( (v/v) v/v) 乙醇水溶液乙醇水溶液前进流试验示意图 压缩空气 或氮气 阀门 压力表滤芯外壳阀门前进流测

13、试仪 排污阀前进流试验在 80 起泡点压力下进行详见供货商说明书过滤工序管理要点 过滤器的安装位置 过滤器的相关信息 过滤器完整性试验的方法 过滤前后的完整性试验和记录 过滤器的更换、消毒或灭菌 发现过滤器出问题后的处理无菌灌装工序常见问题 关键操作区空气流向为乱流，而不是层流 关键操作区不便于在洁净区外进行监控 人员的无菌操作不规范 不做或未定期做培养基模拟灌装验证 培养模拟灌装验证的合格标准设定不正确 培养基模拟灌装未模拟最差生产条件 未对培养基模拟灌装阳性样品进行调查 培养模拟灌装验证数据作假培养基模拟灌装验证 目的 确定实际生产中（如开机前的调试、加入无菌原辅材料、无菌连接、灌装和密封

14、）产品污染的概率 基本思路 应综合考虑生产线可能造成污染的各种因素，并能对工艺受控的状态做出准确的评估 应尽可能模拟实际生产的无菌操作，可能时，应包括最差条件的相关活动，以挑战无菌操作无菌灌装工序管理要点 关键操作区和生产设备 清洁、消毒或灭菌 无菌灌装用各类物料、器具的准备或灭菌处理 生产用气体 人员的无菌操作 装量控制 培养基模拟灌装验证 无菌检验样品的取样 检查时应不能影响正常的生产灭菌工艺的选择 湿热灭菌法 干热灭菌法 除菌过滤法 环氧乙烷灭菌法 辐射灭菌法无菌药品常用灭菌工艺的比较类别类别Fo值值微生物存活概率微生物存活概率要点说明要点说明过度过度杀灭法杀灭法Fo1210-6热稳定性

15、产品热稳定性产品以杀灭微生物作为实现无菌的手段以杀灭微生物作为实现无菌的手段残存残存概率法概率法8Fo710-3不能加热的产品不能加热的产品不能除去病毒、支原体等微生物不能除去病毒、支原体等微生物LRV=log reduction value 过滤对数下降值一般上游为过滤对数下降值一般上游为107下下游为游为1，则，则LRV=7由于操作较多，最终产品达到的无菌保证水平远低于除菌由于操作较多，最终产品达到的无菌保证水平远低于除菌过滤的水平过滤的水平影响湿热灭菌效果的因素 待灭菌产品中含有微生物的种类和数量 待灭菌产品的包装形式 待灭菌产品的装载方式和装载数量 湿热灭菌工艺条件 湿热灭菌设备无菌保

16、证水平SAL 无菌保证水平（Sterility Assurance Level） 表示物品被灭菌后的无菌状态 按国际标准，湿热灭菌法的无菌保证值不得低于10-6，即灭菌后微生物存活的概率不得大于百万分之一。灭菌工艺验证的必要性 灭菌产品的无菌保证不能依赖于最终产品的无菌检验，而是取决于生产过程中采用合格的灭菌工艺、严格的GMP管理和良好的无菌保证体系 灭菌工艺的验证是无菌保证的必要条件 灭菌工艺经过验证后，方可正式用于生产灭菌工艺验证常见问题 无包装规格 无装载方式 未对每一种产品每一种包装规格的每一种装载方式进行验证 无温度探头校准记录 验证的灭菌工艺与实际工艺不一致 未验证最差灭菌条件 设

17、定的验证合格标准达不到无菌保证水平（SAL）10-6 生物指示剂使用不规范灭菌工艺管理要点 生产环境和待灭菌产品中含有微生物的种类和数量研究和监控 待灭菌产品的包装形式、装载方式和装载数量 灭菌工艺条件 灭菌设备关键控制参数的控制和记录仪表的校准设备维护和维修 灭菌的记录 灭菌工艺的验证选用的生物指示剂热分布试验，找出最冷点位置 无菌检验样品的取样设备清洗、验证管理要点 清洗验证（清洗的程度根据是否有同品种连续的批次进 行生产或是生产不同的产品,确定最难清洗物、取样点、取样方式、接受残留标准、检测方法) 清洗SOP要详细描述（离线或在线、压力控制、时间） 如果可能，单独使用热水进行清洗（例口服

18、制剂） 最终尽可能使用纯化水或注射用水进行漂洗 清洗效果的评估（产品残留、清洁或消毒剂残留、微生物和内毒素残留） 无菌检查无菌检查常见问题 未对无菌检验方法进行验证 未测试培养基的灵敏度 未对每柜灭菌产品进行取样并进行无菌检验 未考虑产品本身的抑菌作用 无菌种分离鉴别的条件 出现阳性结果时的调查不完整无菌检查的局限性 无菌的定义 理论上：无菌没有任何活的微生物 实际上：我们无法证明产品中没有活微生物存在 无法对整批产品进行100%检验 无菌检验的结果只是一个基于“可能性”的判断 无菌检验用培养基有其局限性 只进行细菌和真菌的检验 对实验结果的判定是基于“是否在培养基中生长” 培养条件（如温度和

19、时间）是有限的 我们的工作环境及操作是在相对无菌的状态美国非肠道药物学会注射剂无菌测试结果 试验目的：不合格的可能性(%) 试验批量：60,000支 试验方法：按美国药典无菌测试方法真实的不合格率真实的不合格率测试测试20支样品支样品不合格的可能性不合格的可能性测试测试40支样品支样品不合格的可能性不合格的可能性118.2%33.1%564.2%87.2%1596.1%99.8%3099.9%100.0%上述无菌测试结果的启示 含有少量微生物污染产品的批次也有可能“通过”无菌检验 一批产品的染菌率越低，根据无菌检验的结果来判定整批产品的无菌，其风险就越大如何用无菌检验来证明整批产品无菌？ 要求

20、有一个取样计划来涵盖整个批号 有足够的取样量和检验量 选择适用的培养基 采用经验证的无菌检验方法 良好的环境监控无菌检验的取样计划何时取? 如何取?何处取？无菌灌装产品 批开始、结束及重大故障和调整后 最多24小时为一批 USP 每天灌装的产品应分别做无菌检验最终灭菌产品 从灭菌柜中最冷点取样 对经不同灭菌柜灭菌的产品应分别进行无菌检验无菌检验的取样计划 取多少样品（检验数量）？ 取决于产品的批量 CP2015年版 大于500：取2%或20支（取少），用于每个培养基检验 小于等于100：取10%或4个（取多），用于每个培养基检验 取决于产品的数量CP2015年版剂量小于1毫升，就要取40支 同

21、时要考虑检验耗损和复试的需要无菌检验的取样计划 每个样品测试多少数量（检验量）？ 药典上规定了每次检验的供试品总量 装量小于 1mlCP2015年版 每支样接入每个培养基为全量 装量大于等于 1mlPh.Eur 半量，但不超过 20ml CP2015年版 半量， 2 - 500ml无菌检验用培养基 培养基的种类 用于真菌培养的TSB培养基，培养温度20-25 用于厌氧和需氧细菌培养的硫乙醇酸盐流体培养基，培养温度30-35 培养基的适用性检查 要有足够的灵敏度 能够支持代表性菌种的生长 培养基的储存和控制 储存条件和有效期无菌检验方法 主要有两种方法 直接接种法 薄膜过滤法 注意事项 采用直接

22、接种法时应考虑产品是否有抑菌性无菌检验的环境控制 应在无菌环境下进行 洁净度（尘粒和微生物）应与无菌生产厂房一致 控制要求与生产区域一致，如：空调、更衣、清洁、缓冲、定期验证 应有环境监控程序并根据实际情况设定纠偏限度无菌检查隔离器样品表面的消毒处理 在样品进入无菌区前应进行消毒处理 在进行样品外表面消毒时，应确保样品的完整性 考虑所用消毒液渗透过样品容器的可能性，如：透过塑料容器 消毒液应无菌阳性检验结果的调查和处理 无菌检验所用的设备及环境的微生物监控结果不符合无菌检查法要求 回顾无菌检验过程，发现有可能引起微生物污染的因素 阴性对照有菌生长 供试品中生长的微生物经鉴定后，确证是因无菌试验

23、中所用的物品和（或）无菌操作技术不当引起 要有调查程序和记录无菌检查管理要点 取样计划 取样量和检验量 培养基和菌种管理 无菌检验方法 环境监控 样品表面消毒处理 阳性检验结果的调查和处理物料质量控制“齐二药”事件 事件回顾 2006年4月 齐齐哈尔第二制药有限公司 亮菌甲素注射液 将工业用二甘醇（乙二醇）作为药用丙二醇投入注射剂的生产 造成11人严重肾衰竭，4人死亡“齐二药”事件 事件发生的原因 企业改制，有实际工作经验的员工严重流失 检验人员未经培训，鉴别试验出错 物料供应商审计流于形式、疏于管理 假丙二醇是由江苏省中国地质矿业公司泰兴化工总厂生产 事件的教训 不合格的物料会威胁到用户或病

24、人的安全（严重伤害、严重疾病或死亡）物料质量控制常见问题 未根据产品特性、用途、工艺设定质量标准 物料质量标准缺少鉴别和安全性指标 砷盐、重金属、细菌内毒素 重成品检验，轻物料检验 未经取样的物料贴有取样证 取样方法不规范 含量等检验未做平行试验 供应商审计流于形式，随意变更供应商 无经质量部门批准的合格供应商清单物料质量控制 应根据产品的特性、用途和工艺设定物料的质量标准 用于无菌药品的物料应特别考虑安全性的指标 任何物料的质量标准中一定要有鉴别 WHO的GMP中要求对每一包装的物料进行鉴别试验 物料的质量标准和（或）来源应符合注册批准的要求 物料的取样应有代表性 物料的检验应严谨、规范物料

25、供应商管理 对供应商进行识别、评估、验证、确认和管理是供应链管理中最关键的任务 是最基本的质量工作之一 应重点管理物料的生产商物料供应商管理批准供应商清单业绩评估供应商批准流程供应商选择供应商嘉奖供应商嘉奖供应商需求供应商分类成品服务物料确定风险等级确定批准条件发给供应商问询表和供应商质量要求现场审核（如有要求）评估是否批准否决批准加入批准供应商清单文件存档确定批准分级供应商批准流程示例供应商变更 物料供应商应保持相对稳定 改变原料药的生产商应补充申报，经药监部门批准 不同物料的生产商可能采用不同的生产工艺，导致物料的质量标准不完全相同 应评估对产品质量的影响至少检验三批样品必要时，还应进行小

26、试和产品稳定性考察 应按供应商批准的流程执行及时变更合格供应商清单车间物料管理 进入洁净区物料的控制：消毒或灭菌 洁净区物料：数量的控制、物料的转移（密封、层流）、物料的存放位置、效期规定等 清洗灭菌（清洗灭菌效果、处理参数、灭菌装载 方式等） 剩余物料的处理（胶塞等）进入洁净室人员管理人员的监控常见问题 无菌工作服穿着不规范 未对无菌更衣进行监控 无菌操作不规范人是最大的污染源坐着不动能产生100,000个颗粒.人是最大的污染源走能产生5,000,000个颗粒人是最大的污染源跑能产生15,000,000个颗粒人是最大的污染源人体内外表面广泛存在微生物人是最大的污染源人体携带的微生物根据卫生情

27、况不同因人而异人是最大的污染源难以觉察的难以觉察的口腔微滴口腔微滴洁净区员工应身体健康 有下列情况之一者应采取措施 发烧 鼻炎 咳嗽 传染病 创伤洁净区更衣头发应完全包在帽子内头发应完全包在帽子内洁净区更衣工作服的纽扣应完全扣上工作服的纽扣应完全扣上洁净区更衣鞋套不能有破损鞋套不能有破损洁净区更衣不能配戴手表、首饰不能配戴手表、首饰无菌工作服的穿着 穿着的顺序 由上而下 穿着要领 尽可能不要直接接触无菌服的外表面无菌工作服的穿着面罩敞开面罩敞开无菌工作服的穿着手套尺寸不对戴法不正确手套尺寸不对戴法不正确无菌工作服的穿着手套破损手套破损无菌工作服的穿着鞋套穿戴不正确无菌工作服的微生物控制污染产品

28、风险大处需取样污染产品风险大处需取样衣服袖管取样示意衣服袖管取样示意衣服胸部取样示意衣服胸部取样示意背部不需要取样背部不需要取样无菌工作服的微生物控制手指接触碟试验手指接触碟试验无菌操作不要在更衣室交谈不要在更衣室交谈无菌操作不操作时，应将前臂和双手放在前面，不操作时，应将前臂和双手放在前面，身体不能斜靠身体不能斜靠无菌操作无菌操作定时或在任何关键操作前，应消毒手套无菌操作填写批记录后，手套应消毒无菌操作关键操作过程中关键操作过程中不要拣地上的东西不要拣地上的东西无菌操作层流下的操作台应始终保持干净整洁洁净室人员管理要点 人员的培训（微生物、无菌操作、特殊防护知识、卫生等） 进入洁净区人员资质的确认（关键人员必须参加模拟灌装） 人员的卫生习惯 体检档案和汇总 洁净区内人员的工作服 无菌操作 进入洁净区人员数量的控制（经验证） 外来人员控制（官方或客户审计人员、严禁设备厂家检修人员和参观人员进入）人 员洁净区数量卫生监测培训无菌操作进入洁净区人员更衣确认取样点如下：1. 头部2. 眼罩3. 胸部4. 肘部5.腰部6.双手十指7. 膝部 1356247频率：频率：1. 1. 初次进入