Waters高效液相色谱仪标准操作规程

1、Wate rs 高效 液 相 色 谱 仪 标 准 操 作 规 程1. 目 的描 述 Wa t er s 高 效 液 相 色 谱 仪 标 准 操 作 规 程 。2. 适 用 范 围化验室3. 责 任 者化 验 员 应 严 格 遵 照 该 操 作 规 程 ,QC 主 管 负 责 监 督 本 规 程 的 实 施 。4. 定 义HPL C Hi gh Per for man ce L iq ui dC hr o ma to gra ph y, 高 效 液 相 色 谱 仪 。5. 安 全 注 意 事 项5. 1 有 机 溶 媒 有 害 健 康 ， 各 溶 剂 瓶 口 应 封 严 。5. 2 注 意 检

2、查 废 液 桶 中 废 液 应 避 光 ， 防 止 废 液 桶 满 外 溢 。6. 规 程6.1. Wat er sHPLC 的 组 成 ： 贮 液 器 ? 输 液 泵 ? 自 动 进 样 器 ? 分 离 柱 （柱 温 箱 ）? 紫 外 检 测 器 ? 控 制 及 数 据 处 理 系 统 （Mi llen niu m32 化 学 工 作 站 ）。6.2. HPL C 系 统 的 打 开 及 关 闭 顺 序6.2. 1 打 开 顺 序对于分体式：请按泵、进样器、柱温箱、检测器的顺序打开开关，待各部分 分 别 显 示 初 始 化 完 毕 后 ， 最 后 打 开 Mi llenn ium32 化 学

3、 工 作 站 。泵 与 色 谱 工 作 站 的 连 接 ： 对 于 510 泵 ， 因 为 此 泵 与 色 谱 工 作 站 是 单 向 联 系 ， 如 要 使 泵 在 Remot e 状 态 下 由 工 作 站 控 制 ， 首 先 要 在 泵 的 键 盘 上 按 Me nu 键 ， 待 显 示 屏 切 换 至 Mo d e 状 态 下 ， 其 状 态 是 Loca ， 按 Edit/ Ent er 键 ， 在 Loca l 的L前有闪动的光标显示，按。键，Local转换成Rem ,再按Edit/E nter键， 此 命 令 已 输 入 进 去 ,最 后 按 St o p/ Ru n 键 ， 使

4、 泵 处 于 Run 状 态 这 时 泵 和 工 作 站 的 连 接 即 告 成 功 。泵 的 任 何 动 作 都 可 由 工 作 站 来 控 制 。还 应 注 意 这 一 步 工 作 在 每次开机时都要进行。对 于 Al li an ce 26 90 系 统 ： 先 打 开 Al l ia nce2 690 主 机 、 检 测 器 电 源 开 关 ， 待 初 始 化 完 毕 后 ，再 进 入 Mi ll en ni um 32 化 学 工 作 站 。对 于 流 动 相 的要 求 ：对 于 液 体 试 剂 应 尽 量 采 用 色 谱 纯 试剂 ；对 于 所用 到 的固 体试 剂 应 采 用 分

5、析 纯 试 剂 ；对 于 水 ，应 采 用 经 纯 水 机 处 理过 的 超 纯 水；流 动相 在使 用 前 一 定 要经 0. 45 mm 的 滤 膜（ 滤 膜 分 为 水 相 膜 与 有机 相 膜 ，确保 使 用正 确的 滤 膜 ， 参 见附 表 ）过 滤 、 超 声 真 空 脱 气 方 可 使 用 ， 严 禁 含 盐 的 流动 相 未经 过滤直接使用。应养成良好操作习惯：规 范 操 作 ，树 立 保 护 HPL C 整 套 系 统 的 概 念 ，尤 其 对 于 输 液 泵 、色 谱 柱 、 检 测 器 ，在 使 用 后 应 及 时 冲 洗 ，以 免 污 染 而 使 其 寿 命 缩 短 或

6、 损 坏 ，尤 其 如 操 作 者 使 用 了 含 盐 的 流 动 相 ， 更 应 注 意 清 洗 的 步 骤 ： 首 先 用 脱 过 气 的 纯 水 在 流 速 为1 ml/mi n左右冲洗3060分钟，再用含50 %以上甲醇或乙腈的水溶液以相同 的流速冲洗2030分钟左右。如 要 卸 下 柱子，在 经 过 上 述 冲 洗 过 程 之 后 ，再 经 纯 甲 醇 或乙 腈以1 ml /min的流速 冲 洗 2 0 3 0分 钟 ， 柱 子 卸 下 后 应 马 上 拧 紧 柱 堵 。流 速 的 变 化应采 用 阶 梯 式 递 增 或 递 减 的 方 式 ，启 动 泵 时 ，应 在2分 钟 之 内

7、由小流 速 慢 慢 增大到 所 需 的 流 速 ， 泵 关 闭 时 亦 然 （ 流 速 递 减 ）。切 忌流速 的 骤 变。6.2. 2 关 闭 顺 序首 先 退 出 Mi lle nn iu m 32 化 学 工 作 站 ， 再 关 闭 系 统 的 其 他 部 分 。326.3. Mi ll en n iu m 3 2 化 学 工 作 站Mi llen niu m32 色 谱 管 理 系 统 是 集 数 据 采 集 、 处 理 、 HPL C 系 统 的 控 制 、 结 果 的 管 理、报告的打印为一体的综合系统。下面就着重介绍该系统的基本操作知识。6.3.1 Mi lle nn iu m3

8、2 化 学 工 作 站 的 进 入打 开 化 学 工 作 站 ， 系 统 自 动 进 入 Pr og ra mMa na ge r 界 面 ， 双 击 Mi lle nn iu m 肖 像 ， 这 时 进 入 Mi l le nn iu m 界 面 ， 双 击 Se ss io n Mana ge r 图 标 ， 系 统 将 自 动 初 始 化 ， 以 使 工 作 站 和 HPL C 整 套 系 统 进 行 联 接 。初 始 化 后 ，按 系 统 要 求 键 入 你 的 Us er Na me 和 Pa ss wo rd ， 这 时 你 已 进 入 该 系 统 。6.3.2 Pro ject

9、的 进 入 和 建 立Pro je ct的进 入：在 Se ss i on Man ag er窗口下，击 Pr oj e ct肖像（或从 Vi e w中选择 Pr oj e ct s）, 在 其 中 有 已 建 好 的 Pr oj ec t ，双 击 你 所 需 的 Pr o je c t 肖 像 ，再 进 行 你 想 做 的 工 作 。Pro je ct的建立从 F il e 中 选 择 Ne w ， 即 显 示 Ne wPro je c t 的 画 面 。在 Pro je c t Na me 中 输 入 你 的 Pro j ec t 名 称 。在 In itia llze Pro je c

10、t 项 目 中 选 择 Cop y 中 的 filter an df ie lds 或 Met ho ds 。在 Fr o mPr oj ec t 中 选 择 要 拷 贝 的 现 存 Pr o je ct 。选 择 Tab l esp a ce si ze 。选 OK， 存 贮 并 退 出 。当 Mi llenn ium 软 件 在 建 立 一 个 新 的 Pr oje ct 时 ， 在 屏 幕 上 及 时 显 示 出 完 成 建 立 新 Pr oj e ct 的 百 分 比 。 当 达 到 100%时 ， 在 Se ssi on Man ag er 画 面 即 出 现 一 个 新 的 Pr

11、oj e ct 肖 像 。6.3. 3 收 集 数 据 的 一 般 过 程 使 用 Mi lle nn ui um32 收 集 数 据 的 一 般 过 程 如 下 ： 在 Pr oje ct 窗 口 内 建 立 收 集 数 据 所需仪器的仪器方法；建立包括此仪器方法的方法组；使用此方法组收集数据。本部分包括：建立仪器方法，建立方法组，收集样品。建立/修改仪器方法从 Se ss oi n Man age r 窗 口 ， 打 开 所 需 的 Pro je c t 。选 择 Me t ho d 按 钮 ， 现 存 的 方 法 的 肖 像 即 出 现 在 屏 幕 上 。从 命 令 菜 单 中 选 择

12、Fi le ， 然 后 选 择 其 中 的 Ne wIn str ument Me thod ， 即 出 现 Sys te mOp e n 对 话 框 。在 目 录 中 选 择 收 集 数 据 需 要 使 用 的 色 谱 硬 件 系 统 的 名 称 ，如 ：Sy ste m_ 1。按 OK，这 时 In s tr u me nt Me th od 窗 口 即 显 示 出 来 。窗口的上部分是该系统的所有仪器的肖像。用鼠标器将需要设定仪器参数的仪器部 件 激 活 ， 然 后 在 仪 器 肖 像 上 双 击 两 下 ， 即 出 现 In stru men tDi alog Bo x 画 面 。对各

13、个部件设置操作条件，或通过输入新的参数来更改以前的参数。例如：定义泵 参 数 ， 先 双 击 S IM/ PC M 的 肖 像 。 填 写 泵 参 数 ， 按 OK。当 所 有 参 数 设 置 完 成 后 ， 按 OK。 即 回 到 In st ru men tMet hod 窗 口 。 选 File 中 的Sa ve As 存 贮 仪 器 方 法 文 件 ， 如 有 需 要 ， 起 一 文 件 名 ， 按 OK 。选择F ile中的Exit，即回至U Pro je ct窗口。新的仪器方法肖像即出现在此窗口下。建立 方法组(Me tho dSe t)仪 器 方 法 编 好 后 ， 必 须 存

14、于 一 方 法 组 中 ， 才 能 在 Quick Set Co nt ro l 中 调 用 。在 Pro je ct 窗 口 下 选 方 法 肖 像 。选 F il e 中 的 Ne wMe thod Set ， 即 显 示 出 Me tho dSe t 对 话 框 。在 此 画 面 的 In s tr u me nt Met ho d 一 栏 ， 选 择 已 确 定 的 仪 器 方 法 。 其 他 项 目 可 空 着 不 填 。 然 后 选 File ， Sav eAs 。 输 入 方 法 组 名 后 ， 按 OK。选 F il e ， Exi t 。 即 退 回 到 Pro j ec t

15、 窗 口 。 新 设 置 的 方 法 组 肖 像 即 出 现 在 此 窗 口 下 。收集样品：完成以上各步骤后，即可收集样品。在 Pro je c t 窗 口 下 选 择 Q ui c k Se tC on tr o l 肖 像 。 出 现 Sy s t e mO pe n 对 话 框 。选择建立仪器方法时确定的色谱硬件系统，按0K。即出现QuickSe tCon tr o l窗口。在 此 窗 口 下的 Sa mp le Lo ad in gTab l e 中 用 鼠 标 器 按 第 一行，这 时 Mi l l en ni u m 软 件会 自 动 填 充各 项 初始 参 数 。通 过 输 入

16、 新 值 可 更 改 表 中 的各项 参 数 ，表 中 的 瓶 号 （对于 高 效 液 相 色 谱 仪 的 进 样 表 ， 除 另 有 规 定 外 ， 按 括 号 法 安 排 进 样 顺 序 。 即 第 一 针 为 标 准 品 1作 为 系统 适 用 性 共 进 6 针 ， 要 求 RSD 不 大于2%， 随 后 为 标 准 品 2，进 样 次 数 为2 针 ，然 后 为 样 品 1 到 样 品 3， 各 进 2 针 。样 品 3 后 为 标 准 品 1 ， 依次 类 推 ，直 到 将 所 有 样 品 都 安 排 在 进 样 表 中 ）进 样 次 数 ，进 样 体 积 ， 运 行 时 间 等

17、项 目对自动进样器有控制作用。在 Me th od Set Re por t 一 列 中 选 择 在 前 面 刚 刚 建 立 的 方 法 组 。在 运 行 方 式 （mo de ）中 选 Run 0n ly。选 择 进 样 方 式：菜单 mo d e 下 选 单 个 样 品 或 样 品 组 进样 。将 Sa mp leL oadingTable 中 第 一 行 点 黑 。 击 Se tu pInstr ume nt按 钮，启 动系 统。系 统 启 动 后 可击base lin emo nito r 图 标 ， 即 可 观 察 基 线 。待 基 线 平 稳 后，击绿 灯 或 样 品 盘 肖 像

18、准 备 进 样 。 出 现In je ctorwait提 示信 息， 随即 进 样 。在 样 品 测 试 过 程 中 ， 系 统 会 在 Q uick Set 窗 口 下 显 示 瓶 号 和 进 样 次 数 及 运 行 时 间 。 并 可 在 此 窗 口 下 观 察 检 测 器 的 输 出 情 况 。 屏 幕 上 显 示 的 检 测 器 输 出 是 自 动 满 量 程 方 式 （即 自 动 按 最 大 信 号 满 格 输 出 ）。当 收 集 完 色 谱 数 据 后 ， 选 择 Fil e， Exi t。 退 出 Qu ick Set 窗 口 。 样 品 收 集 完 成 后 ， Mi l len

19、 nu iu m3 2 会 自 动 存 贮 收 集 的 数 据 。6.3. 4 建 立 数 据 处 理 的 方 法在 Mi l len nu iu m32 中 ，完 成 不 同 的 任 务 需 编 辑 不 同 的 方 法 ，如 仪 器 方 法 （ 收 集 数 据 ） ， 处 理 方 法 （定 性 定 量 分 析 ）， 报 告 方 法 （ 打 印 实 验 报 告 ）等 。本部分包括：* 重 新 调 出 色 谱 峰 进 行 观 察 。*谱 图 积 分 及 确 定 积 分 表 中 的 参 数 。*输 入 组 分 表 资 料 。* 存 贮 数 据 处 理 方 法 。调阅色谱图进 入 在 其 中 收 集

20、 样 品 的 Pr oje ct ， 在 此 窗 口 下 选 Cha nne l 肖 像 。在 C ha nn el Vie wTab l e 中 选 择 欲 进 行 色 谱 分 析 的 文 件 行 并 使 其 变 黑 。在 Too l s 下 选 择 R e v ie w 肖 像 ，这 时 在 R e v ie wD a ta 窗 口 下 即 显 示 出 你 调 入 的 色 谱 图。选 F il e ， Ne wMe t hod 。 在 Ne wMe t ho d 对 话 框 中 指 定 数 据 处 理 的 类 型 ， 如 L C ， 选 OK。色谱图的积分选 Vi e w ， In te

21、gr at io nTab le 。 在 屏 幕 下 部 即 出 现 In te gra t io n Ev en tTab le 。在 Pea k W idt h ， Mi ni mu mAre a ， Min i mu mHe i gh t 方 框 中 输 入 适 宜 的 数 值 。 按 In t egr at io n 按 钮 ， 观 察 积 分 情 况 ， 并 适 当 进 行 积 分 参 数 的 调 整 。输入组分资料选 Vi e w ， C o mp on en tTab le 。 即 可 见 到 空 的 组 分 表 。选 Opt ion s， F i l lTab leF ro m

22、R es ult， 即 可 自 动 填 充 积 分 完 毕 的 色 谱 图 的 组 分 表 。 也可用手动方式修改表中的参数。按 C a li bra t io n/ Qu ant i ta te 后 ， 选 Vi e w ， R e s ul t Tab l e 。 即 可 看 到 积 分 的 结 果 。 存贮数据处理方法在 Rev iewD ata 窗 口 下 ，选 F ile，Sa ve Me th od 。在 Pr oc es sing Meth od Sav eAs 对 话框的窗口下输入数据处理方法名称。按 O K ，贮 存 Pr o ce ss i ng Met ho d 。在 组

23、 分 表 的 上 方 可 看 到 新 的 Pro c es s ing Me th od 的名称。选 F il e ， Exi t 。 即 可 退 出 R ev i e wD at a 窗 口 ， 回 到 Pr o je c t 窗 口 。6.3. 5 重 新 观 察 色 谱 结 果进入你所需 的Pro je ct窗口。击R e s ul t Vi e w肖像。在Re su ItVi e wTa b le中选择你想观察的色谱数据。击Re vi e w肖像，你所选择的第一个色谱数据的谱图将在Re vie wD at a窗口下， 其 结 果 将 显 示 在 Resul tTab le 中 的 第

24、一 行 。按Ne xt C h/ I n j的方框即可看到下一针进样的有关资料。选 F i le ， Exi t 。 即 可 回 到 Pr oje ct 窗 口 。6.3. 6 报 告 方 法 的 编 辑 及 试 验 报 告 的 打 印 进入 Pro jec t” 窗口。在 Vi e ws 下 按 一 下 方 法 肖 像 。选 择 F i le ， Ne wR e po rt Met ho d 。 这 时 即 可 编 辑 新 的 报 告 方 法 。在 报 告 排 版 窗 口 中 ， 右 边 为 一 张 模 拟 的 白 纸 ， 左 上 方 的 列 表 为 排 版 时 可 放 置 在 右 边 纸

25、上 的 项 目 。 如 图 谱 ， 积 分 表 ， 样 品 信 息 ， 仪 器 方 法 等 ， 左 下 方 为 报 告 头 标 和 脚 标（ 如 土 。选 择 Ind i v idu a l 为 每 个 结 果 有 一 个 报 告 ，选 Su mma r yo fR es u lt Sets Al l 方 式 为 打 一 个 集 中 的 报 告 。 按 O K。设计报告格式按 一 下 c hro ma tog ra mGr oup s 肖 像 。 在 c hro ma tog ra mGr oup s 列 表 中 选 择 Au to -s ca led chr o mat ogr am。 并

26、在 报 告 页 面 上 按 一 下 ， 用 鼠 标 器 将 此 图 形 放 在 画 面合适的位置上。用鼠标器将箭头放在画面的边缘，当箭头变成双箭头时将图形放大或缩小。选 择 F or mat ， La nd sc ap e 。 可 将 图 谱 垂 直 放 置 。按 一 下 Me t ho dG rou p 肖 像 ， 从 Me th od Gro u p 的 列 表 中 选 择 In s tr u me nt Met ho d ， 并 在 报 告 页 面 上 的 合 适 处 按 一 下 。 这 时 In str umen tMe th od 方 框 将 出 现 在 报 告 页 面上。按 一 下

27、 Ta bl eG ro up s 肖 像 ， 在 Ta bl eG ro ups ， 并 在 报 告 格 式 上 的 合 适 位 置 上 按 一 下。选 择 F or mat ， Pag e Si ze 。 可 改 变 报 告 尺 寸 的 大 小 。选 择 cu st o mi ze ， He ade r 。 即 出 现 He ader 窗 口 。 在 此 窗 口 下 选 择 Gen er al in fo rma tio n 肖 像 。 在 Gene ra lin for ma ti onF iel d 列 表 中 按 一 下 Da te 。 这 时 在 Fi e ld Na me 的 方

28、 框 中 即 出 现 D at e 方 框 。 可 用 鼠 标 器 将 此 方 框 移 动 到 合 适 的 位置。可 用 文 字 ， 箭 头 ， 方 框 等 工 具 在 He ad er 窗 口 下 增 加 你 感 兴 趣 的 内 容 。选 F il e ， Sa ve 。 输 入 He a de r 的 名 称 （ 如 ： My _ He ade r ， 按 O K ， 返 回 到 He ad er 窗口。选 F il e ， Exi t 。 即 回 到 R e po rt Pub l is he r 窗 口 。在 C us to mi ze ， Fo ot er 。 即 出 现 Fo ot

29、 er 窗 口 。按 一 下 G ene ra l in for ma ti o n 肖 像 ， 在 Ge ner al i nf or mat io nF iel d列 表 中 按 一下Pa ge Nu mb er 的 方 框 。 将 此 方 框 放 在 报 告 页 面 的 注 脚 位 置 上 。选 F il e ， Sa ve 。 输 入 F oo te r 的 名 称 （ 如 ： My _F oot er ） ， 按 O K ，返回 到F oo te r窗口。选 F ile， Exi t。 回 到 Repor tPu blish 窗 口 。在 Fo ot er 列 表 中 选 刚 编 好

30、 的 脚 标 。存储报告方法选 File ， Sav e 。 输 入 此 报 告 的 方 法 名 （ 如 ： My _Rep or t） ， 按 O K ， 返 回 到 Re por t Pu bl i sh er 窗 口 。选 F ile ， Exi t。 即 回 到 PR OJECT 窗 口 。 在 此 窗 口 下 即 可 看 到 My _R ep ort 报 告 方 法的肖像。报告格式预览：报告格式设计好后，在打印之前，可在此预先看到打印效果，如 需 修 改 可 随时切 换 到报 告 出 版 窗 口 ， 边看 边 修 改 ， 直 到 满 意 为 止 。在 PR O JECT窗 口 下，

31、选 R es u lt 肖 像 ，即 出 现 R e s ul t Vi e wTab l e 表 。在 此 表 上 选择需 要 报告 的 结 果 文 件 ， 使其 变 黑 。按 一 下 Pr e vi e w 肖 像 ， 即 出 现 R ep or t Me th od Sel ec t io n 窗 口 。 从 目 录 上 选 择 刚 才 已 建 立 好 的 报 告 方 法 ， 按 OK。 这 时 即 出 现 刚 才 所 选 结 果 的 报 告。告。在 上 画 面 上 按 Ne xt Pag e 或 Pre v Pa g e 即 可 看 到 报 告 的 下 一 页 或 上 一 页 。 按方法编辑肖像即可对当前方法进行编辑。 按打印肖像，即可将此报告打印出来。选择F ile , Exi t。即可退出报告画面，回到PRO JEC T”窗口。6.3. 7 批 量 进 样 结 果 的 处 理 及 打 印 报 告当已有确定的处理方法后，可用