TakaraRNA提取试剂盒9767说明书

1、研究用TaKaRaTaKaRa MiniBEST UniversalRNA Extraction Kit说明书目录内容页码制品说明I1制品内容1保存与运输1预防RNase污染的注意事项2使用前的注意事项2不同组织的最佳起始量和裂解Buffer RL使用量2试剂盒操作流程简图3操作方法3实验例7不同组织的RNA提取量8附注 I ww $Q&A9制品说明本试剂盒是用于提取培养细胞及动物组织、植物组织（權物幼嫩的叶.茎等）（Cultured cells/Animal Tissue/Plant Tissue ）等RNA的广语型小钝化试剂盒。试剂盒采用了独特的细胞裂解系统，无需苯酚 氯仿抽提等步

2、骤,简单快技。组织或细胞通过勻浆裂解或液氮研詹后在裂解液中释放核酸裂解液分别 经过gDNA Eraser Spin Column （去除葛因组DNA ）以及RNA Spin Column （结合RNA）.从而达到 提取高质fiRNA的目的。本试剂盒具有高效、快速、方便之特点，组织或细胞裂解后提取操作仅濡20分钟便可完成。利用该试 剂盒提取的RNA純度高,基本不含戋白质及基因组DNA污轧 使用本试剂盒可从1.0E+05-1.0E+07 培养细胞、5-40 mg动物组织或50-100 mg植物组奴中腕化得到多至数+微克的高鈍度RNA。提取 得到的RNA可以直接用于Northern杂交、斑点杂交.m

3、RNA純化.体外18译、RNA分解BB的保护分 析、RT-PCR. Real Time RTCR.构M cDNA文阵等各种分子生物学实验。利月本试剂盒中的gDNA Eraser Spin Column （去除基因组DNA ）可以进行简单的萬因组DNA提取。 提取的DNA可以用于PCR反应尊分子生物学实验-*1有关墓因组DNA的提取请步考附注。制品内容（50次虽） 本试剂盒分为Part I和Part II两部分。 Part I 2（TC保存50xDTT SolutionRecombinant DNase I (RNase-free ; 5 U/pl) 伽 DNase I Buffer700 pl

4、1,000 U1 mlPart II 室温(15°C*25°C )下保存Buffer RL*232 mlBuffer RWA228 mlBuffer RWB330 mlRNase Free dH2O15 mlgDNA Eraser Spin Column50支RNA Spin Column50套Collection Tube ( 2 ml)50支RNase Free Collection Tube ( 1.5 ml)50支2含有强变性剂，应避免与皮肤.衣物等接绘。若不小心接融到眼睛或皮肤时， 请立即到医院进行处理。*3首次便用前.向Buffer RWB中添加70 ml的10

5、0%乙H。【试剂盒之外所需准备试剂】无水乙醇 70%乙醇（0.1% DEPC处理水配制） PBS Buffer保存与运输1. 本试剂盒中的Part I请于20°C保存和运输。2. 本试剂盒中的Part IIW于室温（15°C-25°C ）下保存和运输。预防RNase污染的注意事项RNA制备的关健是要抑制细胞中的RNA分解酶和防止所用器真及试剂中的RNA分解胡的污染。因此， 在实验中必须采取以下描施：戴一次性干净手套；使用RNA操作专用实验台；在操作过程中邂免讲话等 等。通过以上办法可以防止实验者的汗液、唾液中的RNA分解晦的污染。使用器具尽使用一次性塑料器皿.若用

6、玻璃器皿,应在使用前按下列方法进行处理。用0.1% DEPC （焦碳酸二乙酯）水溶液在379下处理12小时。然后在1209下高压灭菌30分钟以除去殘留的DEPCoRNA实验用的器具建议专门使用，不要用于其它实脸。试剂配制月于RNA实验的试剂，须使用干热灭菌（180°C , 60分仲）或便用上述方法进行DEPC水处理灭菌 后的玻璃容器盛装（也可以使用RNA实验用的一次性塑料容器），使用的无菌水须用0.1%的DEPC 处理后再进行高溥离压灭菌。RNA实脸用的谊剂和无菌水祁应专用避免混用后交叉污染°使用前的注意事项 Buffer RL若出现沉淀t请于609加热溶解，待恢复至室温后

7、使用。操作前请在Buffer RL中加入502TT Solution至终浓度为2% （即毎1 ml的Buffer RL中加入20 pl 的50xDTT Solutiono此裂解Buffer最好现用现配。加入50xDTT Solution的Buffer RL可在室温放 置1个月。 Buffer RWB在苜次使用前，请添加70 ml的100%乙B9 混合均勻。 gDNA Eraser Spin Column以及RNA Spin Column的量大容积为600 pl ,使用时如果液体的体积超 岀最大容积，请分批加入。以下实验操作t如无转殊说明,均在室温进行。不同组织的最佳起始试和裂解Buffer R

8、L使用丘组奴或细胞的起姑量对RNA的提取效果有很大影响。若组织的起始过多.RNA的质和相对收都 会有所降低。一般来说，使用该仗剂盒能够对1.0E+05-1.0E+07培养细胞、5-40 mg冻存或新鲜的 动物组块、50-100 mg冻存或新鲜的權物组织进行RNA的提取。培养细胞的最佳起始为1.0E+06 , 动物组块的最佳起始量为10 mg ,植物姐织的最佳起始为50 mg.对于gDNA含屋较高的组块（如脾 脏、肾脏尊）应减少起始量,对于植物组织（植物的茎.根等）以及较难裂解的动物组织（如肺.心脏 尊）.除应当降低样品的起始豎外，还血当加大製解Buffer RL （使用爾需加入终浓展为2%的5

9、02TT Solution的用丄 在实验之前,请爹考Table 1中不同组织的最佳起始畳和裂解Buffer RL的使用<>样品起嬢凤裂解Buffer RL的最佳使用;1贴壁培养细胞（培养AD直径<6 cm ）350 pl贴壁培养细胞（培养皿直径6-10 cm ）600 pl<5x10«的杲浮培养细胞350 pl5x10®-1x107悬浮培养细胞600 pl5-20 mg#通动物组妃（脑、肝脏等）350 pl20-40 mg普通动物组块（脑.肝脏等）600 pl5 20 mg特殊组织（肺、脅脏、脾等）350 pl20-40 mg特殊组织（肺肾駄脾等）6

10、00 pl50-100 mg植物组织（叶片、茎）500 plTable 1不同组织的最佳起始和裂解Buffer RL的使用试刊盒操作流程简图操作方法动韧培芥堆話的RNA提取1. 细庖的SMe浮培芥的动精细胞裂霹: 将浮培养iffl甌同塔芥液一圮債入事心玄中.&000 g 4C«心2分管.弃上 使用1xPBS蕭洗一次.8,000 g 4°C宿心2分仲.弃上看向收集的细庖中加入岳当 （ Table 1中推荐的使用）的裂解Buffer RL （使用前勵认已加 入 5O*DTT Solution ） 使用移液枪反貫吹吸直至般解液中无明显沉淀。貼呈培养细胞的*解： 倒出培养浚

11、.使用仆PBS清洗一次。 向培养细胞中DO入乞当 （ Table 1中推荐的使用）的毂解Buffer RL （使用前请确认已加入 50xDTT Solution ）,水平放片甸均勻分布于Ifl表面并RMlflU ,然后使用移 液枪吹打缎胞使其悅落（对于贴It牢固的培养细胞可用细胞刮勺剧妄细胞） 辖内含细胞的脱解液转移至妄心管中.用移液枪反复吹吸直至裂解浚中无明显沉淀.2. 裂解液室温静 2分榊.3. 小心吸取朝第液到新的1.5 ml RNase Free Tube中.注：对于基因组含较多的材料或看材料起始较大时.可以直接帔步嫁8进行（否IM DNA含过高 可能造成gDNA Eraser Spi

12、n Column堵基）.如基因组含较低或材料起始较少时.可以按步 黑47进行.4. 将 gDNA Eraser Spin Column 安放刘 2 ml 的 Colloctlon Tube （试捌金提供）上.5. 将U第液转移入到gDNA Eraser Spin Column中.6. 12.000 rpm ,枣心 1 分禅.7. 弃gDNA Eraser Spin Column （进行墓因组DNA提取时请保留）保留2 ml Tube中的滤滾。8. 向上述步鼻3或步環7中加入与浚体尊体积的70%乙亟（it时可能会出現況淀）.使用移液枪将 S«S合均勻9. 立即辖混合液（食沉淀）全部转入

13、到RNA Spin Column （含2 ml Collection Tub© ）中。（如果混 合滾的体积大于600 pl .请分批加入.毎次加入的体积不工大于600 pU ）10. 12,000 rpm .夜心 1 分仲，弃浊#捋 RNA Spin Column 放回到 2 ml Collection Tube 中.11. 将 500 pl 的 Buffer RWA 加入至 RNA Spin Column 中 t 12.000 rpm 宙心 30 秒钟奔滤液。12. 将600训的Buffer RWB加入至RNA Spin Column中f 12.000 rpm宙心30秒钟，弃滤憑。

14、 注）遗确认Buffer RWB中已经加入了播定体积的100%乙諄。请沿RNA Spin Column管童四周加入Buffer RWB .这样有助于完全冲洗沾附于竇莹上的盐份.13. DNase I消化（可选择）：利用本试刑盒中的gDNA Eraser Spin Column以及RNA Spin Column可取有效地去除培养细胞中 绝大部分的墓因组DNA提取的RNA -般不含E因组DNA。若后续实对RNA郭度要求比较严 格.可以选择性堆在RNA Spin Column 88上进行DNase I消攸 DNase I 反应液的配制：取 5 pl 10覧DNase I Buffer . 4 pi

15、Recombinant DNase I （RNase free v S U/pl ） , 41 pl RNase free dhUO 到新的 1.5 ml RNase Free Tube 中.混合均勻 向RNA Spin Column朕中央加入50 pl DNase I反应液t空温紳H 15分钟. 向RNA Spin Column朕中央加入350训的Buffer RWB , 12.000 rpm离心30秒艸.弃建 液。14. 重复操作步W12<15. 将 RNA Spin Column 倉新安氏于 2 ml Collection Tube 上.12,000 rpm 宙心 2 分铸.18.

16、将 RNA Spin Column 安于 1.5 ml 的 RNase Free Collection Tube （试剂盒提供）上在 RNA Spin Column IR中央处加入 50- 200 pl 的 RNase Free dHQ 或 0.1% DEPC 处理水.空温静H 5 分祝17. 12.000 rpm復心2分钟洗脱RN入若提高 RNA 的收.可再向 RNA Spin Column 中央加入 50-200 pl 的 RNaso Free dHQ 或 0.1% DEPC处理水洗脱RNA;若要得到高浓度的RNA .也可以将第一次的洗脱液新加回至 RNA Spin Column中，窓温静

17、fll 5分铸.12,000 rpm离心2分钟洗战RNA。动物俎炽的RNA根取1. 俎銀的裂解。普BS的动物组炽可以按寵下列三种方法进行裂解： 将新鮮的或妞低温冻存的动愉俎织样品爼連转移至液氮预冷的研恃中.用研杵研底组织其间 不断加入液氮.直至研JB成粉未状（无明显的可见耙粒.如累没有研J恂底会形聘RNA的收率和 ft* ） 将研康咸粉末状的樟品加入到含有U解Buffer RL （或Table 1中推琴的使用,且在使 用前确认已加入50xDTT Solution ）的1.5 ml灭菌tube中r用移液器反貫吹打直至裂解液中无明 显沉淀。 将新鲜的或超低迟冻存的样品班境加入到1.5 ml灭菌tu

18、be中加入Table 1中推琴使用的敦 解Buffer RL （使用前请认已加入50«DTT Solutton ）后利用组织破碎仪进行磁碎.然后用移液 8»反复吹打直至裂解浚中无明显沉淀。 将新鮮的或姥低温冻存的样品班速加入到勻浆管中.加入Tablo 1中推萍使用的製解Buffer RL （使用饶请購认已加入50xDTT Solution ）,把勻浆管于冰浴中进行勻浆.直至勻浆確呈无H 粒送明状.然后用移浚SS反1吹打g至H第液中无明显沉淀。籽样品转移至灭fitube中.转殊动期组飮的段解（含gDNA较多的组奴以及较难製解的组织）：稈新鮮的或妞低凉存的动恂组鏡样品移至较氮预

19、冷的研体中，用研杵研俎垠，其间不斷 加入液氮.直至研画成粉未状（无明显可见额粒，如累没有研恂底会影响RNA的收率和质 A ） 将研JB成粉末状的样品加入到含有段解Buffer RL （按Table 1中推萍的使用且在使用 前确认已IDA 50XDTT Solution ）的1.5 ml灭菌tube中用移液昭反复吹«至設解液中无明显 沉淀.注）组织的充分敦解和勻浆是提取高质鼻RNA的关。因此在裂解时如杲勻浆滾比较粘稠.可以 使用20-gauge的连射話针头反賁吹打样品5-10次.然后按照下列步进行.2. 将頼解液在12,000 rpm . 4X«心5分伸.3. 小心吸取上清液

20、到新的1.5 ml RNase Free Tube中注:对于基因组含较多的材料或耆材料圮始金较大时.可以直接帔步鼻8进行（否则DNA含过高 可能渣成gDNA Eraser Spin Column堵妄）t如基因组含较低或材料起始较少时.可以按步 鼻4«7进行.4. 转 gDNA Eraser Spin Column 安放到 2 ml 的 Collection Tube （试笊It提供）上.5. 将上淸液辕移入到gDNA Eraser Spin Column中.8 12.000 rpm ,离心 1 分7. 弃gDNA Eraser Spin Column （进行总因姐DNA提取时请保誇）

21、保留2 ml Tub©中的淀液。8. 向上述步 3或步鼻7中加入与液体等体积的70%乙醉（Jit时可能会出现沉淀）.使用移液枪将 落液混合均勻9. 立即将合液（含沉淀）全部莉入到RNA Spin Column （含2 ml Collection Tube ）中（如果混 合液的体积大于600 pl v请分批加入.每次加入的体积不要大于600 mU ）10. 12.000 rpm ,离心 1 分聊,弃滤液。将 RNA Spin Column 放回到 2 ml Collection Tube 中.11. 将500训的Buffer RWA加入至RNA Spin Column中t 12.CO0

22、 rpm宙心30秒钟，弃滤液12. 将 600 pl 的 Buffer RWB 加入至 RNA Spin Column 中.12.COO rpm 丧心 30 秒钟，弃淀液。 注）请确认Buffer RWB中已址加入了捋定体积的100%乙暉。请沿RNA Spin Column周加入Buffer RWB,这祥有助于完全冲洗沾附于管垂上的北份。伯.DNase I消化（可选择）：利用本试刑盒中的gDNA Eraser Spin Column以及RNA Spin Column可以有效堆去除大部分的 基因组DNA,提取的RNA 一般不含基因组DNA。对于部分基因组DNA含较高的组坦材料 （如肝脏脾脏、肺.

23、脚腺零）或后娱实滋对RNA匏度要求比较严格，可以迭特性地在RNA Spin Column朕上进行DNase I消化. DNase I 反应腔的配制：取 5 pl 10x DNase I Buffer .4 训 Recombinant DNase I （RNase free . 5 U/pl） 41 训 RNase free dHzO 到新的 1.5 ml RNase Free Tube 中.混合均勻。 向RNA Spin Column 8M中央加入50训DNase I反直液,室温静 15分钟. 向RNA Spin Column 8M中央加入350训的Buffer RWB . 12,000 rp

24、m离心30秒榊,弃建 液。14. 作步W12«15. 将 RNA Spin Column 重新安于 2 ml Collection Tube 上.12.000 rpm 离心 2 分钟.16. 将 RNA Spin Column 安fit于 1.5 ml 的 RNase Free Collection Tube （试別:援供）上，在 RNA Spin Column膜中央处加入50-200 pl的RNase Free dHaO或0.1% DEPC处理水.室温静 5 分钟，12.000 rpm离心2分榊洗脱RNA>17. 12,000 rpm «心2分钟洗脱RN比18. 若

25、娄提高 RNA 的收,可再向 RNA Spin Column 88中央加入 50- 200 pl 的 RNa&e Free drtzO 或0 5% DEPC处理水洗股RNA :若娶得到高浓度的RNA .也可以将第一次的洗脱戏重晰加回至 RNA Spin Column 中.SfiWS 5 分神.12.000 rpm 宙心 2 分钟洗脱 RNA.櫃物组饭的RNA提取1. 将折鮮的或超低湛凉存的植愉组怨样品班連转移至液氨预冷的研体中.用研杵研廉组鏡,其间不斷 加入液氨.直至研膚成粉未状（无明显的可见额粒如果段有研!»彻底会影响RNA的收率和质 B ） 将研彥成粉末状的样品加入到含有

26、裂解Buffer RL （披Table 1中推萍的使用鼻.且在使用前 认已加入50xD7T Solution ）的1.5 ml灭菌lube中.用移液IS反复吹打直至裂解戒中无朔显沉 魚注）组坦的充分®I解和勻浆是提取高质 RNA的关因此在段解时如果勻浆液比较牯稠.可以 利用20auge的注射器针头反箕吹打样品5-10次，煞后按廉下列步进行.2. 将裂解液在12.000 rpm . 4P宙心5分仲。3. 小心吸取上希浚到新的1.5 ml RNase Free Tube中注:対于基因组含较多的材斜或者材料起始矗较大时可以直接或步療8进行（否则DNA含过高 可能査成gDNA Eraser

27、Spin Column.如基因组含较低或材科超姑较少时，可取按步翼d7进行。4. 将 gDNA Eraser Spin Column 安放到 2 ml 的 Collection Tube （试刑童提供）上5. 将上清液转移入到gDNA Eraser Spin Column中。6. 12,000 rpm t «心 1 分榊。7. 弃gDNA Eraser Spin Column （进行基因组DNA提取时请保留）保留2 ml Tube中的滾液.8. 向上述步鼻3或步7中加入液体1/2体积的无水乙諄（此时可能会出現沉淀），使用移液枪料瑕 潢混合均勻。9. 宜即将混合液（含沉淀）全部转入到R

28、NA Spin Column （含2 ml Collection Tube ）中。（如果混 合液的体积大于600 pl,请分批加入.每次加入的体积不要大干600训）10. 12,000 rpm f «心 1 分榊.弃谑液捋 RNA Spin Column 放回到 2 ml Collection Tube 中。11. 将 500 pl 的 Buffer RWA 加入至 RNA Spin Column 中.12.000 rpm 枣心 30 秒铃.弃遽液.12. 将 600 pl 的 Buffer RWB 加入至 RNA Spin Column 中，12.000 rpm 寓心 30 秒钟，

29、弃懣液。注）请确认Buffer RWB中已经加入了捋定体积的100%乙妙请沿RNA Spin Column管3t四周加入Buffer RWB .这样有助于完全冲洗诂附于管St上的盐份.13. DNase I消化（可选條）:利用本试剂盒中的gDNA Eraser Spin Column以及RNA Spin Column可以有效堆去除大部分的 减因组DNA .提取的RNA 一般不會E因组DNA.对于部分E因组DNA>较高的组织材料或后 凑实脸对RNA地度要求比较严格.可以迭择性地在RNA Spin Column IH上进行DNase I消化.0 DNase I 反应液的配制：取 5 pl l

30、ODNase I Buffer. 4 pl Recombinant DNase I (RNase free 9 5 U/pi) . 41 pl RNase Free dHzO 到新的 1.5 ml RNase Free Tube 中.混合均勻。 向RNA Spin Column疑中央加入50 pl DNase I反庖液.窓温紳fll 15分仲.© 向RNA Spin Column履中央加入350 $的Buffer RWB . 12,000 rpm枣心30秒神弃瀝 液。14. X复操作步V12015. 再 RNA Spin Column 倉新安It于 2 ml Collection T

31、ub© 上 t 12,000 rpm 走心 2 分钟.16. 帚 RNA Spin Column 安于 1.5 ml 的 RNase Free Collection Tub© (试刑金提供)上.在 RNA Spin Column腹中央处加入50- 200 pi的RNase Free dHaO或0.1% DEPC处理水，室温静 5 乂也17. 12.000 rpmSf 心 2 分钟洗脱 RNd>18. 若冬提高RNA的收.可再向Rh4A Spin Column M中央加入50- 200训的RNase Free dH2O sli 0.1% DEPC处理水洗脱RNA :若要

32、得到高浓度的RNA .也可以将第一次的洗脱液BT新加回至 RNA Spin Column中F窓盘紳H 5分钟.12.000 rpm离心2分怫洗脱RN比实验例1. 从乳动愉培养细胞中提取RNA的实脸例使用本试刑金从1.0E+06 HL60细胞中提取RNA .得到了约10曲RNA .其电泳结果见图2.M : DL2.000 DNA Marker 1 : HL60 细胞 RNAS2.从哺乳动辆培养细胞中提取RNA2. 从动辆组鏡中提取RNA的实越例M 1 23 4 5 6 7 8 M1 :小肝总RNA2 :小心 1H RNA3 :小RNA4 :小民肺RNA:DL2.000 DNA Marker使用本

33、试剂倉从&10 mg的小各种组鏡中提取RNA ,得到了高毙度的RNA ,其电泳蜡票见图3。5 :小JUW RNA6 :小 MK RNA7 :小JU RNA8 :小MM* RNABB3.从动物组炽中提取RNA3. 从植畅组鏡中提取RNA的实薇例使用本试剂盒从50 mg的玉米叶片和柳榭叶片中提取RNA .其电泳结果见图4.M : DL2,000 DNA Marker1 :玉米叶片RNA2 :柳树叶片RNA00 4.从植物组织中提取RNA不同组织的RNA提取屋本惶笊盒对不同俎垠以及细胞的RNA提取见Table 2.（俎駅或细胞的RNA援取凤与奠新鮮程度或 生长状态有关下表仅供参 枠品轉类样品

34、名称RNA收鼻小1肝脏30*50 pg/10 mg小飙心脏5-10 pg/10 mg粧20*30 pg/10 mg小風5（腺5*15 pg/10 mg动物组织水BL脾脏20*30 pg/10 mg小肛胸腺10*20 pg/10 mg10*20 pg/10 mg小鬼US5*10 pg/10 mg大fil肌肉2*4 pg/10 mg玉米叶片30-40 pg/100 mg櫃轲组织葫芦叶片10-15 pg/100 mgW叶府40*50 pg/100 mg每豆叶片15*20 pg/100 mg细胞HL60细胞8-15 pg/106 cellsTable 2不同组坦的RNA提取附注：基因组DNA的提取（仅

35、供步考）使用本试剂盒中的gDNA Eraser Spin Column （去除E因俎DNA ）可以进行简单的基因组DNA提取. 但不能保证gDNA的收和外度请选择性使用。援取流巻如下:1. 按照各种组织RNA提取步環1-5操作方法对样品进行处理。2. 将 gDNA Eraser Spin Column Bi新安放到繭的 2 ml Colloction Tube （试刑盒提供）中.3. 4 500 pl 的 Buffer RWA 加入至 gDNA Eraser Spin Column 中，12.000 rpm 宙心 30 秒钟奔涯I 肌 ylyfylV/ r j I" J f IT 1

36、 I F 11 IT4. 将 600 pl 的 Buffer RWB 加入至 gDNA Eraser Spin Column 中.12,000 rpm 离心 30 移钟.弃建注）请确认Buffer RWB中已经加入了券定体积的100%乙BL请沿gDNA Eraser Spin Column管St四周加入Buffer RWB .这样有助于完全冲洗沾附于管萤 上的羞份.5. 倉复操作步6. 将 gDNA Eraser Spin Column St新安I于 2 ml Collection Tube 上，12.000 rpm 离心 2 分钟.7. 将gDNA Eraser Spin Column安放到

37、新的1.5 ml Tube上t在膜中央处加入50训的dHaO或TEBuffer,5 分钟。12.000 rpm «心2分仲洗脱DN比 Q&AQ1 :为什么提取组炽或细胞时RNA Spin Column会出现杠现線?A1 :如杲使用该恆剂金出现RNA Spin Column.原因可能有取下几种：O 样品裂解不充分.样品裂解不充分会导致RNA Spin Column的堵3K。关于组炽或缁胞的製 解请参见操作方法中的组鏡或细胞的难設解的组怨矗议懐用液氮研)的方法进行* 解。 样品起始IL过多.样品过多会渣成核陵过多而发生堵変現魚。使用该试刑盒提取的组鏡 或细胞的矗佳起始,请參考.不

38、同组1R的量佳妃姑矗和毂堺Buffer RL使用JT. 妄心瀑度过低。使用该试剤盒进行RNA提取时.如无特殊说明均在窓理(20-25-C )下进 行.込度过高或过低都金对RNA Spin Column造成影响.发生壇戛现SUQ2 :为什么提取组鏡或细胞时gDNA Eraser Spin Column会出现堵塞现魚？A2 :对于基因组含较高或看禅品妃始量较大时,请不要使用qDNA Eraser Spin Coumn .以免 gDNA Eraser Spin Column如果样品畳牧少或基因组含较少也发生堵車現彖.则可能的原因是：O 样品裂解不充分.样品裂解不充分会导致Column的堵关于组集或细

39、胞的脱解声参见操 作方法中的组炽或细胞的朝修.难裂解的组鏡总议使用液氨研宏的方法进行1 样品圮始过多.样品过多会渣成核段过多而发生堵M現魚。使用移试剂盒捉取的俎鏡 或细胞的佳起始鼻,不同组坦的最佳起始利段解Buffer RL使用鼻冷 喜心温度过低使用该试別盒进行RNA提取时.如无特殊说明均在空温(20-25P )下进 行.© 离心转数过低。如发生墙*的现彖可以加大喜心转数以及喪心时伺Q3 :如果gDNA Eraser Spin Column发生墻戛怎么办？A3 :如皐 gDNA Eraser Spin Column 发生墻宴，M : 将样品吸出后渣接进行后娱实验。® 增加葛

40、心次数和时间 增大葛心转数. 如聚是基因组较多或起始较大.不要进行gDNA Eraser Spin Column的过汝.D.lJI II I IA4 :便用该试列盒提取的组炽或细施的收请參耆亠不阿组垠的RNA提取IT。如果RNA的收过 低，則可筈有取下几种原因：0 祥品裂解不充分.样品的充分裂解是使用该世卅童提取高质 RNA的关檯关于禅品的4 解请寥考操作方法中的组飮或细胞的裂解。 样品起始过多.使用该试別盒提取的组飮或细焙的最佳超始,遗参考“不同组奴的滋佳 起抽量和製堺Buffer RL使用® RNA洗悅不充分.建议Wj(洗脱RNA 一次.洗脱时可以将RNase Free dHaO

41、或0.1% DEPC dHaO在RNA Spin Column中的静fll时间延长至10分仲.® 洗脱液中和乙B?歿阳。在便用Buffer RWB进行RNA Spin Column清洗后没有进行后续的 宙心过程.锻成乙諄歿留，使RNA的收下降臺议在使用Buffer RWB清洗后再进行一 次葛心，以去除残留的乙醇。Q5：为什么RNA发生降第？A5 :如栗提取时发生降解，则可能有以下几种原因： 使用的组奴材料不够新鮮.应使用輪鮮的组駅材科.或将新鲜的组鏡材料用液氮理速冷凉后 于8(rc保存。 提取RNA时便用的试捌及器貝中混有RNA分解酹.实验前请參耆，预防RNase污染的注 意事9T ,以通免RNase污染. 提取的组飮材料中含有大 RNA分RNA分解雷较多的组飮或堀胞应当减少样品起始 A 并加大Buffer RL用Q6 :提取的RNA中含有基因组DNA .怎么办？A6 :本试捌金提供了去除基因组DMA的gDNA Eraser Spin Column ,能够很好地去除材料中的基因 俎