第二章 细胞培养设施和基本条件

1、 第二章第二章细胞培养设施和基本条件细胞培养设施和基本条件细胞培养设施和基本条件细胞培养设施和基本条件n实验室设计实验室设计n原则原则: : 防止微生物污染和有害因素影响防止微生物污染和有害因素影响n要求要求: : 工作环境清洁、空气清新、干燥和无烟尘工作环境清洁、空气清新、干燥和无烟尘n划分不同功能区并用铝合金板隔开划分不同功能区并用铝合金板隔开n无菌操作区应在室内较少走动的内侧无菌操作区应在室内较少走动的内侧n清洗和消毒安置在另室清洗和消毒安置在另室n一般包括：一般包括：准备室、培养室和缓冲室准备室、培养室和缓冲室n准备室：准备室： 用于进行培养器皿的清洗、包装、培养物质的用于进行培养器皿

2、的清洗、包装、培养物质的准备和消毒以及供应物品的保藏等。准备和消毒以及供应物品的保藏等。n培养室：培养室： 用于进行细胞培养和各种无菌操作的实验室。用于进行细胞培养和各种无菌操作的实验室。其基本条件是：其基本条件是：清洁、无菌、干燥、不通风，清洁、无菌、干燥、不通风，并具有适宜的光线。天花板不宜高过并具有适宜的光线。天花板不宜高过2.5M2.5M。n缓冲室：缓冲室：（更衣室）（更衣室）41缓冲室缓冲室专用培养实验室布局示意图专用培养实验室布局示意图普通细胞培养室内走廊普通细胞培养室内走廊宽敞的细胞培养区宽敞的细胞培养区 实验室设备实验室设备 一、最常用的大型必备装置和仪器一、最常用的大型必备装

3、置和仪器 超超净工作台、净工作台、COCO2 2培养箱、倒置显微镜、离心机、培养箱、倒置显微镜、离心机、 冰箱、电热干燥箱、超纯水装置、消毒锅、超声波冰箱、电热干燥箱、超纯水装置、消毒锅、超声波 清洗器、恒温水浴箱、冷冻保存装置、天平等清洗器、恒温水浴箱、冷冻保存装置、天平等二、最常用的培养器具二、最常用的培养器具 l.l.过滤除菌装置：不锈钢正压过滤器、一次性滤器过滤除菌装置：不锈钢正压过滤器、一次性滤器 2.2.手术器械手术器械 3.3.培养器皿：溶液瓶、培养瓶培养器皿：溶液瓶、培养瓶 、培养皿、多孔培培养皿、多孔培 养板、移液管和吸管、离心管养板、移液管和吸管、离心管 n净化工作台（必备

4、！）净化工作台（必备！） 根据气流的方向分为根据气流的方向分为垂直流垂直流超净工作台超净工作台 水平流水平流超净工作台超净工作台 n根据操作结构分为根据操作结构分为:单边单边操作及操作及双边双边操作操作 n 超净工作台的工作原理是利用鼓风机驱动空超净工作台的工作原理是利用鼓风机驱动空气遁过高效滤器除去空气中的尘埃颗粒，气遁过高效滤器除去空气中的尘埃颗粒，使空使空气得到净化气得到净化。净化空气徐徐通过工作台面，使。净化空气徐徐通过工作台面，使工作台内构成无菌环境。工作台内构成无菌环境。n 要注意检查是否堵塞！（看酒精灯）要注意检查是否堵塞！（看酒精灯） 超净工作台结构和模式图超净工作台结构和模式

5、图 n超净工作台使用前应用紫外灯照射超净工作台使用前应用紫外灯照射30分钟分钟。n操作最好在操作区的中心位置进行，在设计上，这操作最好在操作区的中心位置进行，在设计上，这是一个较安全的区域。是一个较安全的区域。n开启超净工作台风机并打开工作灯。开启超净工作台风机并打开工作灯。 n操作中严格遵守无菌操作规程。操作中严格遵守无菌操作规程。n操作结束后，要认真清理操作台面，除必备的公共操作结束后，要认真清理操作台面，除必备的公共物品外，其余要带离工作台。物品外，其余要带离工作台。n清水擦拭后，再用清水擦拭后，再用75%酒精擦拭台面。酒精擦拭台面。超净工作台的使用及注意事项超净工作台的使用及注意事项:

6、 CO CO2 2培养箱：培养箱： 用于维持适当温度、湿度与用于维持适当温度、湿度与pHn质量关键在控温装置，温度变化一般不应质量关键在控温装置，温度变化一般不应超过超过0.50.5度度; ;培养箱的温度设在培养箱的温度设在35353737，这是人和哺乳动物培养细胞的最适温度。这是人和哺乳动物培养细胞的最适温度。 n培养容器需与外界保持通气状态培养容器需与外界保持通气状态n箱内空气应保持干净，定期消毒（紫外灯、箱内空气应保持干净，定期消毒（紫外灯、酒精）酒精）n水槽水槽: :用于保持一定湿度用于保持一定湿度二氧化碳培养箱二氧化碳培养箱 nCO2培养箱设定的条件为培养箱设定的条件为37 ，5CO

7、2 。n使用使用CO2培养箱培养细胞时培养箱培养细胞时 应注意的问题：应注意的问题：1.用螺旋口瓶培养细胞时，需用螺旋口瓶培养细胞时，需 将瓶盖微松，以保证通气将瓶盖微松，以保证通气2.保持培养箱内空气干净保持培养箱内空气干净3.箱内用无菌蒸馏水保持箱内箱内用无菌蒸馏水保持箱内 湿度湿度4.不宜长时间将门打开不宜长时间将门打开5.器械和手的消毒器械和手的消毒用途用途: :烘干和干热消毒玻璃器皿和烘干和干热消毒玻璃器皿和金属器械等金属器械等使用时注意使用时注意: :1.1.鼓风与升温同时进行，鼓风与升温同时进行，100100度时可停止鼓风度时可停止鼓风2.2.禁止先升温后鼓风禁止先升温后鼓风3.

8、1003.100度以下时再打开箱门度以下时再打开箱门4.4.塑料制品、橡胶等不能在塑料制品、橡胶等不能在干燥箱内消毒干燥箱内消毒电热恒温鼓风干燥箱电热恒温鼓风干燥箱高压灭菌锅高压灭菌锅倒倒 置置 显显 微微 镜镜 倒置显微镜倒置显微镜(Inverted Microscope)的的 组成和普通显微镜一样，只不过物镜与照组成和普通显微镜一样，只不过物镜与照 明系统颠倒，前者在载物台之下，后者在明系统颠倒，前者在载物台之下，后者在 载物台之上，用于观察培养的活细胞，具载物台之上，用于观察培养的活细胞，具 有相差物镜。有相差物镜。倒置显微镜倒置显微镜 倒置显微镜倒置显微镜n水纯化装置水纯化装置n很少使

9、用离子交换装置处理的水很少使用离子交换装置处理的水n蒸馏水装置分金属和玻璃两种蒸馏水装置分金属和玻璃两种n洗刷装置洗刷装置n人工洗刷人工洗刷*n超声洗涤装置超声洗涤装置n玻璃吸管洗涤玻璃吸管洗涤自动双重纯水蒸馏器自动双重纯水蒸馏器 超纯水仪超纯水仪超声波清洗机超声波清洗机n正压过滤器正压过滤器n细胞冷冻贮存器细胞冷冻贮存器n离心机离心机n小型台式离心机符合分离细胞要求小型台式离心机符合分离细胞要求n加样器加样器不锈钢正压过滤器不锈钢正压过滤器离心机离心机 液氮罐液氮罐 Micropipette 1、select suitable pipette and tips according to th

10、e desired volume2、set the volume3、extracting the solution through pushing button to position 14、releasing through pushing to bottom磁力搅拌器磁力搅拌器精密精密pH计计微孔板震荡器微孔板震荡器 n器器 械（取材用）械（取材用）n解剖刀解剖刀n解剖剪解剖剪n虹膜剪虹膜剪n镊子镊子n注意保护刀锋，钝刀对组织有伤害，注意保护刀锋，钝刀对组织有伤害，不利细胞生长不利细胞生长n培养器皿等培养器皿等n玻璃器皿玻璃器皿n玻璃瓶（用于储存各种液体）玻璃瓶（用于储存各种液体）: :