北京地区流行性腮腺炎野病毒基因特征及疫苗效果评价

1、北京地区流行性腮腺炎野病毒基因特征及疫苗效果评价流行性腮腺炎（ 腮腺炎 ） 是由流行性腮腺炎病毒 （mumps virus） 引起的急性呼吸道传染病，属于我国法定的丙类传染病。患者主要是515岁的儿童和青少年。腮腺炎的并发症发生率较高，脑膜炎的发生率为1%- 10%青春期后男性睾丸附睾炎发生率为25%。 腮腺炎病毒只有一个血清型, 但有多个基因型, 腮腺炎病毒SH基因的变异程度最大，因此国际上将其作为分型依据。目前已发现了 12个基因型，分别命名为AL。中国特有的流行株为F基因 型。腮腺炎病毒的血凝素一神经氨酸酶（HN）是病毒主要的免疫原性蛋白。不同基 因型的HN蛋白抗原性不同，其特异性抗原位

2、点存在差异。本研究用Vero细胞和Vero/SLAM细胞从北京地区2004-2007年腮腺炎暴发和散发的107个病例的含漱液和尿液标本中分离到34株阳性分离物 , 经过逆转录 .聚合酶链反应（RT-PCR）&等方法鉴定，共得到33株腮腺炎病毒，均来自于含漱液标本。 血清学检测中 ,5 例病毒分离阳性病例的急性期血标本IgM 抗体检测阴性,证实了仅用 IgM 阳性作为腮腺炎实验室确诊指标会有病例漏检。北京市 2000 年将腮腺炎疫苗列入计划免疫,2006 年开始免费接种麻疹、腮腺炎、风疹（MMR）E联疫苗,并在2006年对中小学未接种过腮腺炎疫苗的学生进 行了大规模的MMR勺补种。但大规

3、模接种后,2007年的发病率没有明显下降，有 免疫史的病例大幅增加。实验室 2007 年的病毒分离率和 IgM 抗体阳性率都明显低于往年。 统计分析 , 病毒分离率和 IgM 抗体阳性率与病例的免疫史状况密切相关, 因此提出疫苗免疫 效果的问题。用RT-PC时法扩增33株腮腺炎病毒SHS因316个核甘酸片段,进行核甘酸 序列测定和分析。结果33株腮腺炎病毒均属于F基因型，疫苗株VAC-S79S于A 基因型。说明近年来北京地区流行的优势株为 F 基因型 , 没有发现其他基因型的野病毒流行 , 也没发现基因型间的变异。 但同源性分析发现, 北京株与 F 基因型代表株氨基酸差异为 4.9%, 己存在

4、到达分型临界值(5.O%) 的型内差异。同时 , 北京株与上海株的核苷酸差异明显大于兰州株, 即北京株与兰州株亲缘关系更近。在对SH蛋白氨基酸序列进行分析时发现北京株的变异程度较高,部分保守的氨基酸位点发生了变化，8位L-F,11位T-K,23位I -N,45位 MH L,个别在 48 位 LAP,57 位 L-P。提示SH蛋白结构有可能发生变化。同时，与基因分型有关的氨基酸三联体也出现变异 , 北京株虽都属于F 基因型 , 却有 6 株为 IIL, 为 D,I,K,L 和部分基因型G特征 ; 另有 3 株为 ILL,2 株为 IVL 。北京株与 F 基因型代表株之间氨基酸最大差异为 6 个氨

5、基酸 , 证明 F 基因型属于变异程度高的基因型。 同时发现部分氨基酸位点随时间逐渐出现变异的倾向。HN®白基因共计1749个核甘酸，编码582个氨基酸，为病毒主要结构抗原， 保守性高。本研究阳性分离株 HN基因测序成功的为31株。转换为氨基酸序列后，分析它们的同源性发现不同分离株之间的差异为02.3%。流行株与Jeryl-Lvnn疫苗株之间的差异为4.25.3%,差异较大。做北京地区流行株与疫苗株的亲缘关系进化树( 图 18), 发现流行株与Urabe株属于同一分支, 而 JL2、 JL5 和 Rubini 属于另一分支。所有北京地区流行株在HN蛋白基因具有降低交叉中和能力的 2个位点上与疫苗株为不同的氨基酸。354位:流行株为Q（谷酰胺），疫苗株为P（脯氨酸）。356位:流行株为D（大冬 氨酸），疫苗株为E（谷氨酸）。在329340位置也有个别流行株存在差异,如:334位Yf F,338位 AC/R fK。HN蛋白上有9个潜在的N-糖基化位点，实验发现北京株在464466位置上 存在NCS的N-糖基化位点，Jeryl-Lynn 疫苗株此位置为NCR本研究证实疫