水飞蓟宾对四氯化碳所致肝损伤的治疗与预防作用

1、水飞蓟宾对四氯化碳所致肝损伤的治疗与预防作用第21卷第5期2005年10月广东药学院JOURNALOFGUANGD0NGC0LLEGEOFPHARMACYVo1.21No.50ct.2005水飞蓟宾对四氯化碳所致肝损伤的治疗与预防作用王伟,黄蠛乐,利红宇,陈一岳(1.广州安健实业发展,广东广州510630;2.广东药学院药科学院2004届毕业实习生;3.广东药学院药理教研室,广东广州5100224)摘要:目的研究水飞蓟宾对四氯化碳(CC1)所致的急性肝损伤的防治作用.方法应用小鼠,大鼠的CCI肝损伤模型,分别测定并比较灌胃给药前后,空白组,CC1组,受试药(水飞蓟宾)组,紫芝组和联苯双酯组的血

2、清中酶的变化和肝脏的病理变化.结果水飞蓟宾能有效地预防CC1肝损伤动物血清GPT的升高,但对预先中毒动物的血清GPT升高则无降低作用.对CC1引起的ALP与GGT水平,所用的药物无明显的影响.肝病理切片的观察结果表明,预先用药使CC1致小鼠和大鼠的肝细胞坏死率明显降低,由100%降低到20%和16.7%.结论在本实验条件下,水飞蓟宾有预防血清GPT升高和预防肝细胞免受CC1损伤的作用.关键词:肝急性中毒;水飞蓟宾;四氯化碳;GPT;ALP中图分类号:R966文献标识码:A文章编号:10068783(2005)05056503毒物,营养因素缺乏,手术方法,免疫方法及病毒均可以造成肝损伤.引起肝损

3、伤的毒物包括四氯化碳(CC1),硫代乙酰胺,D一半乳糖胺(D.GLAN),乙硫氨酸,O/一萘异硫氰酸酯,醋氨酚,鬼笔碱,O/.鹅膏素,酒精,黄曲霉素,毒肽等.目前最常用于急性中毒性肝损伤动物模型,多为CC1和D一半乳糖胺所致.水飞蓟宾是具有抗氧化和抗超氧阴离子作用的药物,并对烷氧自由基有非常强的清除作用,是一种抗氧自由基活性物质.在本实验中用疗效确切的联苯双酯(BIF)来确定CC1肝损伤模型,用保肝作用得到广泛认同的紫芝(GanodermaLucidum)作为阳性对照药,对水飞蓟宾对CC1所致肝损伤的治疗和预防作用进行研究l实验材料1.1药品,试剂水飞蓟宾由盘锦格林恩生物资源开发提供,花生油在

4、一般商店购买,四氯化碳(CC1)由广东汕头新宁化工厂生产(批号:0000614),联苯双酯滴丸由广州星群(药业)股份生产(批号:H44023176),紫芝为市售无虫蛀干品,产于贵州.1.2仪器CS501型超级恒温器(重庆试验设备厂制造),FA2104S电子天平称(上海天平仪器厂).1.3动物及实验环境清洁级NIH小鼠(体质量为1822g)及清洁级sD大鼠(体质量为160200g)均由广东省医学实验动物中心提供(合格证号:262004A008与262004A003)作者简介:王伟(1969一),男,大学本科,工程师,主要从事新药研究和开发2方法2.1药品制备方法2.1.1CC1花生油溶液的制备取

5、等体积的CC1和花生油混合均匀,配成=79.6%79.9%的溶液.2.1.2联苯双酯混悬液的制备先将联苯双酯滴丸磨粉,精密称取0.03g和0.06g,再分别用蒸馏水10mL和6mL溶解,摇匀,即得到0.3ms/mL,1ms/mL的混悬液.2.1.3紫芝水煮液的制备取无虫蛀干品50g磨粉,按常规加水,在80中可看出空白组,联苯双酯阳性对照组GPT的数值比CC1组的数值要小,联苯双酯阳性对照组与CC1组相比,GPT值明显降低(P<0.01).而紫芝阳性对照组,水飞蓟宾组的GPT值与CC1组的基本一致(P>0.05).然而紫芝阳性对照组,水飞蓟宾组和联苯双酯阳性对照组的A

6、LP和GGT升高值均比CC1组有所下降,说明紫芝,水飞蓟宾对治疗由CC1引起的血清酶学的升高有一定的作用.表1水飞蓟宾等药物对CCl引起的大鼠血清酶学改变的影响Tab.1Effeof$ibinandotherdrugsOnthechangesofser-unlenzymesinducedbyCCI4inra(x±,l=6)组别GPT/(U?L)ALP/(U?L)GGT/(U?L)与CC1组相比P<0.05,一与CC1组相比P<0.01Tab.2EffeofptreatingwithvaousdrugsOnthechangesofrUllllenzymesi

7、nducedbyCCI4inra(x±,l=6)与CC1组相比P<0.05;一与CC1组相比P<0.01从表2可见,用药1d后,水飞蓟宾组和阳性对照高无预防作用.用药2d后,仅水飞蓟宾组有防止紫芝组与CC1组比较,GPT值与ALP值均有明显的降CC1引起GPT的升高(P<0.01).低(P<0.01).说明水飞蓟宾和紫芝具有预防CC1中3.2水飞蓟宾等药物对CC1引起肝组织病理改变的毒所引起的GPT和ALP的升高作用.但对GGT的升影响566第5期王伟,等.水飞蓟宾对四氯化碳所致肝损伤的治疗与预防作用空白组小鼠的肝细胞正常.CC

8、1组,水飞蓟宾组小鼠的肝细胞全部坏死.紫芝阳性对照组小鼠肝细胞变性(20%),坏死(80%).联苯双酯阳性对照组小鼠肝细胞变性(10%),坏死(90%).说明水飞蓟宾对由CC1引起的肝损伤无治疗作用,见表3.在小鼠预防用药的试验中,空白组小鼠的肝细胞均不见有变性,坏死现象.CC1组小鼠的肝细胞全部坏死.而在用CCI前1d和2d用紫芝或水飞蓟宾组均能防止CC1对肝细胞的损害.见表4.对大鼠的CC1引起的肝细胞损害也无治疗作用.但在预防用药时发现,紫芝组与水飞蓟宾组能防止CC1引起的肝细胞变性和坏死,尤其是后者在用药2d后对肝细胞的保护作用更为明显.见表5.表3水飞蓟宾等药物对CCI.引起的小鼠肝

9、细胞损害的治疗作用Tab.3TreatingeffectsofSilybinandotherdrugsonimpair-mentoflivercellsinducedbyCCIinmice(H=10)表4预防用药不同时间对小鼠肝细胞的保护作用Tab.4Preventingeffectsofpretreatingwithvariousdrugsatdifferenttimepointsonfivercellsinmice(n=10)组别未见变性坏死/%变性/%坏死/%空白组1001000000CC组0000100100预防用药紫芝组00809O2010水飞蓟宾药组00808O2020表5预防用药

10、对CCI.引起大鼠肝细胞损害的保护作用Tab.5PreventingeffectsofpretreatingwitllvariousdrugsonimpairmentoflivercellsinducedbyCCI.inrats(n=6)4讨论CC1是用于制造动物肝损伤模型的经典药物,CC1.不但能制造肝硬化模型,而且还能制造动物的急性肝损伤模型.在本实验中,用联苯双酯作为阳性对照药,对制造模型的方法和剂量进行了研究.结果表明CC1组与联苯双酯组,空白组的血清GPT值之间对比,在统计学上有显着性差异.CC1组引起的肝脏病理变化为肝细胞坏死,但未造成肝硬化,表明该操作方法和剂量能对大白鼠的肝脏造

11、成急性损伤.近年来也有报道,CC1,乙醇在肝内降解及肝缺血再灌注等均可产生脂质过氧化物(LPO),且LPO水平与肝功能损伤程度密切相关.在LPO中丙二醛(MDA)是脂质过氧化(LP)的主要降解产物,可严重损伤肝细胞膜结构,导致肝细胞损伤,它反映出活性氧对肝细胞膜的损伤程度.肝损伤临床上绝大多数表现为GPT升高,极少数伴有胆红素轻度升高.说明LPO导致的脂质过氧化在肝细胞的始动损伤和(或)继续损伤中起重要作用.水飞蓟宾有抗脂质过氧化的作用,可以阻碍降解产物LPO的生成.因而具有保护和稳定肝细胞酶的作用.可用于治疗急慢性肝炎,肝硬化,肝中毒等病,且对肝炎患者的症状,肝功能均有明显的改善.其机制可能

12、是阻断肝一肠循环和抑制毒素与肝细胞膜的结合以及抑制毒素的跨膜转运,从而抑制毒物进入肝细胞.近代研究表明紫芝具有保护肝脏的作用,可以减轻化学药物(毒物)对肝脏的损害,增加肝脏代谢药物(毒物)的解毒功能,因此,在本实验中增加紫芝作为阳性对照药物.实验证明,水飞蓟宾有保护血清酶免受CC1影响的作用,且效果优于紫芝,随着预防用药时间的增加,这种作用更明显.但是它对GGT的影响不大,这可能是由于这种酶对药物的敏感性不高所致,水飞蓟宾对预防CC1所致肝损伤的作用上,用药2d比用药1d肝脏坏死的比例减少,说明随用药时间延长,对肝脏的保护作用也增强.水飞蓟宾对治疗由CC1引起的肝损伤的确切作用机制有待进一步的研究.致谢:广东药学院病理教研室区都,陈东坡老师协助检查和制造肝的病理切片.参考文献:1李仪奎.中药药理实验方法学M.上海:上海科学技术出版社,1989.458.2谢凤英,李晓良,孙克,等.不同种类剂量活血化瘀药轻度慢性肝损伤的实验研究J.中医