液相色谱仪常用操作步骤

1、液相色谱仪常用操作步骤 1)首先对流动相进行过滤，根据需要选择不同的滤膜，一般为有机系和水系，常用的孔径为0.22um和0.45um。2)对抽滤后的流动相进行超声脱气10-20分钟。3)正常情况下，仪器首先用甲醇冲洗10-20分钟，然后再进入测试用流动相(如流动相为缓冲试剂，则要二次重蒸水冲洗10-20分钟，直至色谱柱中有机相冲净为止) 。4)一般情况下，流动相冲洗20-30分钟后，仪器方可稳定，最重要的是仪器基线走后，方可进样测试。5)同时进两针标样，将其结果相比较，其结果的比值在0.98-1.02之间后，就可以正式进行样品的测试了。6)样品测试结束后，就要进行色谱仪及色谱柱的清洗和维护。如

2、流动相为缓冲试剂，同样也要用重蒸水清洗10-20分钟，方可用有机相进行保护，否则，有损色谱柱。7)关机时，先关计算机，再关液相色谱。8)填写登记本，由负责人签字。注意事项：1)流动相均需色谱纯度，水用20M的去离子水。脱气后的流动相要小心振动尽量不引起气泡。2). 柱子是非常脆弱的，第一次做的方法，先不要让液体过柱子。3)所有过柱子的液体均需严格的过滤。4)压力不能太大，最好不要超过150kgf/cm2 .5). 因为缓冲试剂遇有机溶剂，会结晶，有损色谱柱，所以，每次由有机相变流动相或流动相变有机相均需用蒸馏水清洗。 气相色谱仪操作规程 一 载气钢瓶的使用规程1 钢瓶必须分类保管，直立因定，远

3、离热源，避免暴晒及强烈震动，氢气室内存放量不得超过二瓶。 2 氧气瓶及专用工具严禁与油类接触。 3 钢瓶上的氧气表要专用，安装时螺扣要上紧。 4 操作时严禁敲打，发现漏气须立即修好。 5 用后气瓶的剩余残压不应少于980 kPa。 6 氢气压力表系反螺纹，安装拆卸时应注意防止损坏螺纹。二 减压阀的使用及注意事项器仪表同1在气相色谱分析中，钢瓶供气压力在9.8-14.7 MPa。 2 减压阀与钢瓶配套使用，不同气体钢瓶所用的减压阀是不同的。氢气减压阀接头为反向螺纹，安装时需小心。使用时需缓慢调节手轮，使用权后必须旋松调节手轮和关闭钢瓶阀门。 3 关闭气源时，先关闭减压阀，后关闭钢瓶阀门，再开启减

4、压阀，排出减压阀内气体，最后松开调节螺杆。三 微量注射器的使用及注意事项1 微量注射器是易碎器械，使用时应多加小心，不用时要洗净放入合内，不要随便玩弄，来回空抽，否则会严重磨损，损坏气密性，降低准确度。 2 微量注射器在使用前后都须用丙酮等溶剂清洗。 3 对10-100微升的注射器，如遇针尖堵塞，宜用直径为0.1 mm的细钢丝耐心穿通,不能用火烧的方法。 4 硅橡胶垫在几十次进样后，容易漏气，需及时更换。 5 用微量注射器取液体试样，应先用少量试样洗涤多次，再慢慢抽入试样，并稍多于需要量。如内有气泡则将针头朝上，使气泡上升排出，再将过量的试样排出，用泸纸吸去针尖外所沾试样。注意切勿使针头内的试

5、样流失。 6 取好样后应立即进样，进样时，注射器应与进样口垂直，针尖刺穿硅橡胶垫圈，插到底后迅速注入试样，完成后立即拔出注射器，整个动作应进行得稳当，连贯，迅速。针尖在进样器中的位置，插入速度，停留时间和拔出速度等都会影响进样的重复性，操作时应注意。 四 热导池检测器的使用及注意事项1 开启热导电源前，必须先通载气，实验结束时，把桥电流调到最小值，再关闭热导电源，最后关闭载气。 2 稳压阀，针形阀的调节须缓慢进行。稳压阀不工作时，必须放松调节手柄。针形阀不工作时，应将阀门处于“开”的状态。 3 各室升温要缓慢，防止超温。 4 更换汽化室密封垫片时，应将热导电源关闭。若流量计浮子突然下落到底，也

6、应首先关闭该电源。 5 桥电流不得超过允许值。五 氢火焰检测器的使用及注意事项1 通氢气后，待管道中残余气体排出后，应及时点火，并保证火焰是点着的。 2 使用FID时，离子室外罩须罩住，以保证良好的屏蔽和防止空气侵入。如果离子室积木，可将端盖取下，待离子室温度较高时再盖上。工作状态下，取下检测器罩盖，不能触及极化极，以防触电。 3 离子室温度应大于100，待层析室温度稳定后，再点火，否则离子室易积水，影响电极绝缘而使基线不稳。 一、泵的使用和维护1、防止固体微粒进入泵内。因为尘埃或其它任何杂质微粒都会磨损柱塞杆、密封环、缸体和单向阀。泵的入口都应连接砂滤棒，输液棒的滤器经常清洗或更换。2、流动

7、相不应含有任何腐蚀性物质。例如氯仿、丙酮、二氯甲烷等，这些溶剂将会Peek树脂部件变脆；还有含有卤离子的流动相或能产生卤离子的流动相，如果使用了，分析结束后，应立即用去离子水清洗整个管路，因卤离子会腐蚀不锈钢部件或管路。流动相含有缓冲盐不应停泵保留在泵内时间过长，由于蒸发甚至由于溶液的净置就可能析出晶体。3、泵工作时要注意流动相不要被用完，否则空泵运转会加快磨损柱塞杆和密封圈。输液泵的压力不要太高，否则会使密封圈变形，降低密封圈使用寿命。4、在使用双泵过程中，如果不是梯度洗脱，尽量先混合。如果一个是有机溶剂，一个是含盐溶液，在用双泵的时候，有可能会析出晶体。5、在使用缓冲盐作流动相实验结束之前

8、和结束后，都要用含10甲醇水溶液冲洗管路，不能用纯水冲洗，因纯水会对柱子造成损坏。进样阀要用适宜的溶剂进行清洗。二、色谱柱的使用和维护1、避免压力和温度的急剧变化以及机械震动。在进样的时候，进样阀扳手不能转动太慢，更不能停留在中间，如停留在中间，泵内压力剧增，这时再转动到进样位置时，过高的压力会损坏色谱柱。如出现机械震动（掉在地上）则会改变填料的充填状态。2、在使用色谱柱过程中，不应直接从有机溶剂到水，反之，也不要从水直接改变到有机溶剂。3、色谱柱一般不能反冲，除非生产者指明。4、冲洗色谱柱时，每种溶剂至少冲洗50ml。5、装在机子上的色谱柱，应每隔45天冲洗15分钟，可以避免长菌，保护色谱柱

9、。6、PH的调节尽量在29之间7、保存色谱柱时，柱接头要拧紧。三、输液泵产生 故障及排除方法1、没有流动相流出，又无压力显示。原因可能是泵内有大量气体，这时打开排液阀，使泵在较大流量下运转，将气体排出，也可用一个针筒在泵出口处帮助抽出气体。另一个原因使密封圈损坏。2、压力和流量不稳。原因可能有气泡；单向阀污染，可卸下单向阀，浸入异丙醇内超声清洗；沙滤棒内有杂质或微生物堵塞，可将沙滤棒浸入流动相中超声清洗，也可将滤头放入4mol/l硝酸溶液中，迅速除去微生物。也可能是盐堵塞，可放入水中清洗；在线过滤器堵塞进样阀损坏；密封圈性能不好。3、压力过高。管路堵塞；保护柱堵塞；检测池堵塞，发生情况立即停泵

10、，否则会损坏流通池。四、与检测器有关的故障及其排除1、流通池内有气泡。如果有气泡连续不断通过检测池，将其噪音增大。如有较大气泡，则会在基线上出现许多线状“峰”，可加大流量排出气体。如果检测池有停留的气泡，可采用突然增大流量的方法排除气体（不连接色谱柱）。2、检测池被污染。检测池被污染了，可能产生噪音，或基线漂移，可以使用适当溶剂清洗，如果污染严重，就可以用1mol/l硝酸溶液、水和新鲜溶剂进行清洗。3、光源灯出现故障。检测器的光远灯不能满足正常样品分析时，可能产生严重噪音污染，基线漂移，出现异常峰，甚至基线不回零。4、出现倒峰。如果流动相有紫外吸收的杂质，使用紫外检测器时，就会产生倒峰，必须用

11、高纯度的溶剂作为流动相。检测器的极性接反了，也会出现倒峰。液相色谱仪的使用和维护注意事项   液相色谱仪色谱柱使用及维护更换色谱柱滤网和玻璃棉过滤片（同时可以修补色谱柱）注意：在取出反相柱芯的滤网和玻璃片之前，应该将色谱柱充分用水和甲醇/乙腈冲洗，而且修补工具的头部也应该蘸取少量的甲醇/乙腈，以避免在取出滤网和玻璃棉滤片时带出柱子内的填料。 1将修补工具中的2套入柱芯的顶端2将修补工具中的3轻轻地旋入已套着2的柱芯中，并顺时针方向旋转到旋紧3一手握柱芯，另一只手轻轻地向外拉3，取出柱芯顶端的滤网4用一个小铲子轻轻地取出滤网下面的玻璃棉以及被污染的填料5将新的填料用

12、甲醇润湿，然后填入挖去的部位，压平6照（左图）装上新的玻璃棉滤网，并用修补工具中的4将玻璃棉压入柱芯顶端7柱芯顶端套上2，然后参照（左图）将滤网放入8压紧，然后取下2，再用4将滤网的边缘压平 平衡色谱柱 反相色谱柱在经过出厂测试后是保存在乙腈/水中的。请一定确保您所使用的流动相和乙腈/水互溶。由于色谱柱在储存或运输过程中可能会干掉，因此在用流动相分析样品之前，应使用1020倍柱体积的甲醇或乙腈平衡色谱柱；如果您所使用的流动相中含有缓冲盐，应注意用纯水"过渡"。硅胶柱或极性色谱柱在经过出厂测试后是保存在正庚烷中的。如果该色谱柱需要使用含水的流动相，请在使用流动相之前用乙醇或异

13、丙醇平衡如何平衡色谱柱？ 平衡过程中，将流速缓慢地提高用流动相平衡色谱柱直到获得稳定的基线（缓冲盐或离子对试剂度如果较低，则需要较长的时间来平衡）色谱常见问题问答  问：用HPLC进行分析时保留时间有时发生漂移，有时发生快速变化，原因何在?如何解决? 答：关于漂移问题： 1、温度控制不好，解决方法是采用恒温装置，保持柱温恒定  2、流动相发生变化，解决办法是防止流动相发生蒸发、反应等 3、柱子未平衡好，需对柱子进行更长时间的平衡 关于快速变化问题 1、流速发生变化，解决办法是重新设定流速，使之保持稳定 2、泵中有气泡，可通过排气等操作将气泡赶出。 3、流动相不合适，解决办法

14、为改换流动相或使流动相在控制室内进行适当混合   问：色质联用中毛细柱的选择应注意什么问题?答：1、柱效要高 2、热稳定性好 3、化学惰性强 具体选择应注意： 1、柱极性。根据分析样品选择不同极性的柱子进行分析 2、柱子内径。内径大小决定柱容量 3、液膜厚度。分析样品温度一不一样，对膜厚有不同要求，温度高液膜要厚，温度低液膜要薄 4、柱长度。柱越长，柱效越高，分离效果越好，但也存在吸附问题，柱子过长，分析时间长，因此要根据样品考虑柱子长度 5、外涂层(柱体)的选择 6、另外还有仪器型号、分析对象等因素 问： 液相色谱 中峰出现拖尾或出现双峰的原因是什么? 答：1、筛板堵塞或柱失效，解

15、决办法是反向冲洗柱子，替换筛板或更换柱子。 2、存在干扰峰，解决办法为使用较长的柱子，改换流动相或更换选择性好的柱子   问：从那些方面可以简单判别毛细管柱子的热稳定性好坏? 答：1、分配容量(或容量因子)K，好的柱子在高温运行后，分配容量K不应有明显的下降，否则，说明柱子的热稳定性不好。 2、理论塔板数n，热稳定性好的柱子经受高温后，理论塔板数应基本保持恒定 3、柱子的极性。热稳定性好的柱子，高温前后极性变化不大，具体表现为保留指数I值没有大的变化。 4、噪声。热稳定性好的柱子在高温下使用后，噪声不能增加. 5、柱子的去活层，毛细管柱子涂固定液前内部一般要用去活性试剂去活以增加惰性

16、。质量好的毛细管柱子高温后，去活层不应该变化，表现在对强极性样品或酸碱性样品的吸附性不能增加。   问：为什么进样器内的玻璃衬套会对色谱行为造成影响? 答：进样器内的玻璃衬套主要有下列作用： 1、提供一个温度均匀的汽化室，防止局部过热。 2、玻璃的惰性不如不锈钢好，减少了在汽化期间样品分解的可能性。 3、易于拆换清洗 ，以保持清洁的汽化室表面，一些痕量非挥发性组分会逐渐积累残存于汽化室，高温下会慢慢分解，使基流增加，噪声增大，通过清洗玻璃衬套可以消除这种影响。 4、可根据需要选择管壁厚度及内径适宜的玻璃衬套，以改变汽化室的体积，而不用更换整个进样加热块。从以上几个方面可以知

17、道玻璃衬套对色谱行为造成影响的原因。   问：毛细管色谱分流进样时，非线性分流的主要原因是什么? 答：1、进样器温度太低，样品汽化不完全，发生分级分流。 2、进样器温度太高，某些组分可能发生热分解，也有的样品可能发生催化分解，或样品部分地被吸附在进样器内表面上。 3、在分流点以前样品没有混合均匀或混合不充分。 4、系统的进样垫，柱接头等地方漏气。  问：HPLC灵敏度不够的主要原因及解决办法 答：1、样品量不足：解决办法为增加样品量 2、样品未从柱子中流出：可根据样品的化学性质改变流动相或柱子 3、样品与检测器不匹配：根据样品化学性质调整波长或改换检测器 4、检测器衰减太多

18、：调整衰减即可。 5、检测器时间常数太大：解决办法为降低时间参数 6、检测器池窗污染：解决办法为清洗池窗。 7、检测池中有气泡：解决办法为排气。 8、记录仪测压范围不当：调整电压范围即可。 9、流动相流量不合适：调整流速即可。 10、检测器与记录仪超出校正曲线：解决办法为检查记录仪与检测器，重作校正曲线。   问：做HPLC分析时，柱压不稳定，原因何在?如何解决?答：原因可能有： 1、泵内有空气，解决的办法是清除泵内空气，对溶剂进行脱气处理； 2、比例阀失效，更换比例阀即可。 3、泵密封垫损坏，更换密封垫即可。 4、溶剂中的气泡，解决的办法是对溶剂脱气，必要时改变

19、脱气方法； 5、系统检漏，找出漏点，密封即可。 6、梯度洗脱，这时压力波动是正常的。   问：做PGSMS分析时，如何防止焦油状污染物进入毛细柱? 答：聚合物，尤其是一些含氮、硫及卤素的高分子裂解时，常有焦油状物质产生。为防止这种焦油状物质进入毛细柱造成污染而使柱性能下降，可采用保护预柱，即在裂解器与毛细柱之间接一填充预柱，通过控制预柱温度而使焦油状物质滞留在预柱内，预注可置于GC气化室内，这样既容易控制温度，又减少系统的死体积，当然，预柱填料需经常更换。   问：我最近更换了另一种牌号的ODS柱，虽然分离情况仍可以，但保留时间不能重

20、现，为什么? 答：这是因为被分析物可能具有形成氢健的能力。尽管过去几年来，填料的制造技术有了极大的提高，但不同的厂商的ODS填料表面硅醇基的浓度不同。正是这些硅醇基可能与样品发生相互作用。因此，同一被分析物中的各组分在不同牌号的ODS柱上的相对保留时间就可能不同。在流动相中加入少量竞争物，如三乙基胺(TEA)，将会使硅醇基的成键能力饱和，从而保证不同牌号柱子上的相对保留时间具有较好的重现性。   问：我购买的HPLC柱验收测试时柱压过高，请问为什么?答：柱压过高是HPLC柱用户最常碰到的问题。其原因有多方面，而且常常并不是柱子本身的问题，您可按下面步骤检查问题的起

21、因。 1、拆去保护柱，看柱压是否还高，否则是保护柱的问题，若柱压仍高，再检查； 2、把色谱柱从仪器上取下，看压力是否下降，否则是管路堵塞，需清洗，若压力下降，再检查。 3、将柱子的进出口反过来接在仪器上，用10倍柱体积的流动相冲洗柱子，(此时不要连接检测器，以防固体颗粒进入流动性)。这时，如果柱压仍不下降，再检查； 4、更换柱子入口筛板，若柱压下降，说明你的溶剂或样品含有颗粒杂质，正是这些杂质将筛板堵塞引起压力上升。若柱压还高，请与厂商联系。一般情况下，在进样器与保护柱之间接一个在线过滤器便可避免柱压过高的问题，SGE提供的Rheodyne 7315型过滤器就是解决这一问题的最佳选择。

22、0;  问：高温毛细柱的使用寿命一般为多长? 答：毛细柱寿命除决定于柱子本身的性能外，在很大程度上取决于使用情况，比如使用温度、样品状态，进样量等，如果在其使用温度范围内，样品干净，色谱柱不被污染的情况下，柱子寿命一般在23年之间。   问：如毛细管柱被污染，柱效和分辨率降低，有何方法使它恢复?是否可通过老化来解决? 答：根据柱污染程度可采取不同的方法来解决，如果污染不严重，污染物沸点不是太高，可通过老化来解决，但老化温度不可超过柱子的最高使用温度，且一般要较长时间(830小时)，如果污染较严重，或通过老化仍不能使柱性能恢复，那就必须采用溶剂清洗，通常是用5倍柱容

23、积的溶剂(如正戊烷，二氯甲烷等)通过色谱柱。 当然，清洗溶剂用的越多，对柱性能的损坏越大，清洗完后，在通载气老化一定时间，如果柱性能恢复，便可继续使用。 必须指出：只有交联柱才能清洗，对于非交联柱，清洗柱会彻底失效，因为固定液被洗掉了，至于清洗用溶剂的选择，可参考说明书。  气相色谱如何安装调试色谱仪的安装 1对色谱仪分析室的要求        （1）分析室周围不得有强磁场，易燃及强腐蚀性气体。        （2）室内环境温度应在535度范围内

24、，湿度小于等于85%（相对湿度），且室内应保持空气流通。有条件的厂最好安装空调。        （3）准备好能承受整套仪器，宽高适中，便于操作的工作平台。一般工厂以水泥平台较佳（高0.60.8米），平台不能紧靠墙，应离墙0.51.0米，便于接线及检修用。        （4）供仪器使用的动力线路容量应在3KVA左右，而且仪器使用电源应尽可能不与大功率耗电量设备或经常大幅度变化的用电设备公用一条线。     

25、  电源必须接地良好，一般在潮湿地面（或食盐溶液灌注）钉入长约0.51.0米的铁棒（丝），然后将电源接地点与之相连，总之要求接地电阻小于10欧姆即可。（注：建议电源和外壳都接地，这样效果更好）。 2气源准备及净化        （1）气源准备        事先准备好需用气体的高压钢瓶（一般大中城市均可购到），庄某一种气体的钢瓶只能装这种气体，每个钢瓶的颜色代表一种气体，不能互换。一般用氮气，氢气，空气这三种气体，每种气体最好准备两个钢瓶，以备用

26、。       有的厂使用氢气发生器和空气压缩机也可，但空压机必须无油。凡钢瓶气压下降到12Mpa时，应更换气瓶。       一般FID检测器使用气体纯度99.99%以上即可，但电子捕获检测器必须使用高纯气源99.999%以上，确保去氧，最好应配上脱氧管。  （2）气源净化 为了出去各种气体中可能含有的水分，灰分和有机气体成分，在气体进入仪器之前应先经过严格净化处理。若全部使用钢瓶气体，有的色谱仪附有净化器，且内已填有5A分子筛，活性炭，硅胶，基本可满足要求。若使

27、用一般氢气发生器，则必须加强对水分的净化处理，故应增大干燥管面积（体积在450立方厘米以上为好，填料用5A分子筛为佳），并在发生器后接容积较大的储器桶，以减少或克服气源压力波动时对仪器基线的影响。若使用空压机作空气来源，空压机进气口应加强空气过滤，加大净化管体积，在干燥管内应填充一半5A分子筛，一半活性炭。一般国产无油气体压缩机或空气发生器可满足需要。 3色谱仪成套性检查及安放 仪器开箱后，按资料袋内附件清单，进行逐项清点，并将易损零件的备件予以妥善保存。然后按照仪器的使用说明书上要求，将其放置于工作平台上，并对着接线图和各插头，插座将仪器各部分连接起来，最后连接记录仪和数据处理机。注意各接头

28、不要接错。 4外气路的连接 （1）减压阀的安装 有的仪器随机带有减压阀，若没有的则要购买。所用的是2只氧气，1只氢气减压阀。将2只氧气减压阀，1只氢气减压阀分别装到氮气，空气和氢气钢瓶上（注意氢气减压阀螺纹是反向的，并在接口处加上所附的O形塑料垫圈，以便密封），旋紧螺帽后，关闭减压阀调节手柄（即旋松），打开钢瓶高压阀，此时减压阀高压表应有指示，关闭高压阀后，其指示压力不应下降，否则有漏，应及时排除（用垫圈或生料带密封），有时高压阀也会漏，要注意。然后旋动调节手柄将余气排掉。 （2）外气路连接法 把钢瓶中的气体引入色谱仪中，有的采用不锈钢管（2×0.5mm），有的采用耐压塑料管（3&#

29、215;0.5mm）。采用塑料管容易操作，所以一般采用塑料管。若用塑料管，在接头处就要有不锈钢衬管（2×20mm）和一些密封用的塑料等材料。从钢瓶到仪器的塑料管的长度视需要而定，不宜过长，然后用塑料管把气源和仪器（气体进口）连接起来。 （3）外气路的检漏 把主机气路面板上载气，氢气，空气的阀旋钮关闭，然后开启各路钢瓶的高压阀，调节减压阀上低压表输出压力，使载气，空气压力为0.350.6Mpa（约3.56.0kg/cm3），氢气压力为0.20.35 Mpa。然后关闭高压阀，此时减压阀上低压表指示值不应下降，如下降，则说明连接气路中有漏，应予排除。 5色谱仪气路气密性检查 气密性检查是一

30、项十分重要的工作，若气路有漏，不仅直接导致仪器工作不稳定或灵敏度下降，而且还有发生爆炸的危险，故在操作使用前必须进行这项工作（气密检查一般是检查载气流路，氢气和空气流路若未拆动过，可不检查）。 方法是：打开色谱柱箱盖，把柱子从检测器上拆下，将柱口堵死，然后开启载气流路，调低压输出压力为0.350.6Mpa，打开主机面板上的载气旋钮，此时压力表应有指示。最后将载气旋钮关闭，半小时内其柱前压力指示值不应有下降，若有下降则有漏，应予排除。若是主机内气路有漏，则拆下主机有关侧板，用肥皂水（最好是十二烷基磺酸钠溶液）逐个接头检漏（氢，空气也可如此检漏），最后将肥皂水擦干。 二、仪器的调试把气路，仪器等按

31、上述接好，安置好后，便可进行下面检查和调试工作。 1色谱仪电路各部件检查仪器启动前应首先接通载气流路，调节主机面板上的载气旋钮（即：载气稳流阀），使载气流量为2030ml/min。 （1）启动主机 开启主机总电源开关，色谱柱箱内马达开始工作，并检查是否有异样声响，若有，立即切断电源，并进一步检查排除。有的色谱仪启动时自诊断，显示仪器运转情况：正常或不正常，不正常显示包括哪一部分有问题，接线错误等等。 （2）各路温控检查 按照说明书，逐个对柱温（包括程序升温），进样器温度，检测器温度进行恒温检查，是否能在高，中，低温度下保持恒定，特别是要求柱温温控精度达到0.01度。 毛细管

32、分析常见问题的解决一、峰丢失      可能的原因及应采用的排除方法       1、注射器有毛病，用新注射器验证。       2、未接入检测器，或检测器不起作用，检查设定值       3、进样温度太低，检查温度，并根据需要调整       4、柱箱温度太低，检查温度，并根据需要调整    &#

33、160;  5、无载气流，检查压力调节器，并检查泄漏，验证柱进品流速       6、柱断裂，如果柱断裂是在柱进口端或检测器末端，是可以补救的，切去柱断裂部分，重新安装 ；二、前沿峰       1、柱超载，减少进样量       2、两个化合物共洗脱，提高灵敏度和减少进样量，使温度降低1020度，以使峰分开       3、样品冷凝，检查进样口和柱温，如有必要可升温 

34、0;     4、样品分解，采用失活化进样器衬管或调低进样器温度 三、拖尾峰       1、进样器衬套或柱吸附活性样品：更换衬套。如不能解决问题，就将柱进气端去掉12圈，再重新安装       2、柱或进样器温度太低：升温（不要超过柱最高温度）。进样器温度应比样品最高沸点高25度       3、两个化合物共洗脱：提高灵敏度，减少进样量，使温度降低1020度，以使峰分开 4.柱损坏：更换柱 &#

35、160;     5、柱污染：从柱进口端去掉12圈，再重新安装 毛细管分析常见问题的解决 四、只有溶剂峰       1、注射器有毛病：用新注射器验证。      2、不正确的载气流速（太低）：检查流速，如有必要，调整之       3、样品太稀：注入已知样品以得出良好结果。如果结果很好，就提高灵敏度或加大注入量。       4、柱箱温度过高：检查温度，并

36、根据需要调整       5、柱不能从溶剂峰中解析出组分：将柱更换成较厚涂层或不同极性       6、载气泄漏：检查泄漏处（用肥皂水）       7、样品被柱或进样器衬套吸附：更换衬套。如不能解决问题，就从柱进口端去掉12圈，并重新安装 五、宽溶剂峰       1、由于柱安装不当，在进样口产生死体积：重新安装柱。       2、进

37、样技术差（进样太慢）：采用快速平稳进样技术。       3、进样器温度太低：提高进样器温度。       4、样品溶剂与检测相互影响（二氯甲烷/ECD）：更换样品溶剂。      5、柱内残留样品溶剂：更换样品溶剂       6、隔垫清洗不当：调整或清洗       7、分流比不正确（分流排气流速不足）：调整流速 六、假峰  

38、;     1、柱吸附样品，随后解吸：更换衬管，如不能解决问题，就从柱进样口端去掉12圈，再重新安装。       2、注射器污染：用新注射器及干净的溶剂试一试，如假峰消失，就将注射器冲洗几次。       3、样品量太大：减少进样量。      4、进样技术差（进样太慢：采用快速平稳的进样技术 七、过去工作良好的柱出现未分辨峰       1、柱

39、温不对：检查并调整温度       2、不正确的载气流速：检查并调整流速。       3、样品进样量太大：减少样品进样量       4、进样技术水平太差(进样太慢)：采用快速平稳进样技术。       5、柱和衬套污染：更换衬套。如不能解决问题，就从柱进口端去掉12圈，并重新安装 八、基线不规则或不稳定       1、柱流失或污染：更换衬套。

40、如不能解决问题，就从柱进口端去掉12圈，并重新安装。       2、检测器或进样器污染：清洗检测器和进样器       3、载气泄漏：更换隔垫，检查柱泄漏。       4、载气控制不协调：检查载所源压力是否充足。如压力500psi，请更换气瓶。      5、载气有杂质或气路污染：更换气瓶，使用载气净化装置清洁金属管。       6、载气流速

41、不在仪器最大/最小限定范围之内（包括FID用氢气和空气）：测量流速，并根据使用手册技术指标，予以验证。       7、检测器出毛病：参照仪器使用手册进行检查。      8、进样器隔垫流失：老化或更换隔垫 九、同一根柱保留时间长短不一       1、柱温太低或太高，检查并调整柱温。       2、载气流速太低或太高，在柱出口处用适当的，经标定气源测量流速。    

42、;   3、样品器隔垫或柱泄漏，如必要，请检查并修复。      4、柱污染或损坏，重新老化或更换柱       5、样品超载，减少样品进样量。       6、记录仪出毛病，检查记录仪。 7、载气控制不协调，检查载气源，看压力是否足够。如压力500psi，请更换气瓶。离子色谱使用过程注意事项2009-3-31 9:52:34注意事项: 1. 在通淋洗液 或水前一定要先进行脱气处理,防止气泡进入流路. 2. 在有淋洗液经过抑制

43、器时,开电流,在关泵前,一定要先把电流关上,切记! 3. 进不同样品要注意清洗进样口和注射器,不要污染针头. 4. 扳阀的速度要快,进完样后要迅速把阀从“进样位置”扳到“分析位置”,不可在中间停顿. 5. 连接色谱柱时,一定要先把流量调到0.3ml/min，不可高流量的情况下接柱子。 6. 色谱柱长时间不用，要至少半个月通一次淋洗液3060分钟，并用封头密封两端，色谱柱尽量不要通水，只通淋洗液。 7. 仪器长时间不用，也要一周通一次水，防止流路管中水变质，堵塞管路。 8. 对比较脏的样品一定要先经过预处理后进样，最好有一套砂芯过滤装置。 9. 在做曲线时,不要忘记每次进不同浓度的样品,都要在“

44、定量组分”表中修改浓度数值,不要在“定量结果”中修改. 10. 每天做完实验后，要对恒流泵进行后冲洗1-2次。 11. 如果每天都使用仪器，可以不取下色谱柱，如果长时间不用，一定要遵守注意事项中维护色谱柱和仪器的要求，以使仪器更好的运、正相色谱正相色谱用的固定相通常为硅胶(Silica)，以及其他具有极性官能团，如胺基团(NH2,APS)和氰基团(CN，CPS)的键合相填料。 由于硅胶表面的硅羟基(SiOH)或其他团的极性较强，因此，分离的次序是依据样品中的各组份的极性大小，即极性强弱的组份最先被冲洗出色谱柱。正相色谱使用的流动相极性相对比固定相低，如：正乙烷(Hexane),氯仿(Chlor

45、oform),二氯甲烷(Methylene Chloride)等。2、反相色谱反相色谱填料常是以硅胶为基础，表面键合有极性相对较弱的官能团的键合相。反相色谱所使用的流动相极性较强，通常为水，缓冲液与甲醇，已腈等混合物。样品流出色谱柱的顺序是极性较强组合最先被冲出，而极性弱的组份会在色谱柱上有更强的保留。文章链接：中国化工仪器网 色谱柱，它按沸点顺序分离。如果你怀疑有芳族化合物，试着用有苯基的SE-54或OV-35柱一般情况，15m柱用于快速筛选简单混合物或分子量极高的化合物。30m柱是最普遍的柱长。超长柱（50、60或100m、150m）用于非常复杂的样品。柱长度在柱性能上不是一个重要参数，例

46、如：加倍柱长，恒温分析时间则加倍但峰分辨率仅增大约40%。如果分析只是比较好但不是特别好时，有比增加柱长度更好的办法来改进分析结果，如考虑更薄的膜，优化载气流量或用程序升温等。分析活性极强的组分是一种特殊情况。如果样品与柱材质接触，那么峰会严重拖尾。较厚的膜、相对短的柱可以由于较少的柱材和较厚的固定液体掩盖其表面以屏蔽活性表面从而减少相互作用的机会。内径增加直径意味着需要更多的固定相，即使厚度不增加，也有较大的样品容量。同时也意味着降低了分离能力且流失较大。小口径柱为复杂样品提供了所需的分离，但通常因为柱容量低需要分流进样。如果分离度的降低能够接受的话，大口径柱可以避免这一点。当样品容量是主要

47、的考虑因素时，如：气体、强挥发性样品、吹扫和捕集或顶空进样，大内径甚至PLOT柱可能比较合适。色谱柱使用及维护1、强阴离子柱色谱柱用过滤后的超纯水洗，按后用5% 甲醇冲洗清洗；2、C18色谱柱正常清洗方案：20% H2O+80%CH3OH清洗2-3h，然后用纯HPLC CH3OH清洗2-3h；3、C18色谱柱出现拖尾峰时按以下方案清洗：20%H2O+80%CH3OH清洗1-2h，然后用纯HPLC CH3OH清洗1-2h，再用纯异丙醇过夜冲洗（柱压应低于200bar），测定前用流动相平衡2h左右；3、C18色谱柱在峰形极差情况下（柱外扩散、双峰、肩峰）按以下方案清洗：纯甲醇 0.5h；纯乙腈0.

48、5h； 75%纯乙腈+25%纯异丙醇0.5h；纯异丙醇0.5h；流动相平衡2h。 一种离子色谱仪器的完整操作使用过程和维护指南看到网上大部分区域是进口仪器的天下，网站也在呼吁重视国产仪器的发展，仅借我们单位的一台国产离子色谱仪器，进行介绍一下正规的使用过程和维护指南，更希望能借此为国产仪器出份力量。此仪器型号为CIC-100型离子色谱仪，是青岛崂山一家离子色谱仪器厂家生产的仪器，具体配置了：仪器主机，在线脱气，小型串联双柱塞泵，罗丹尼六通手动进样阀，色谱柱恒温箱，抑制器，双电导池电导检测器，保护柱，shodex阴离子色谱柱，alltech阳离子色谱住，真空泵，沙芯抽滤瓶等。二 

49、60;仪器使用操作过程详解：1，配置溶液：a，流动相储备液配制：（阴离子淋洗液）准确称取12.7188g基准Na2CO3固体粉末并准确定容到500ml容量瓶里，使完全溶解后经沙芯抽滤装置抽滤，转移到聚丙烯瓶中，即得到0.24mol/L的Na2CO3流动相储备溶液，放于冰箱中保存，以备后用。（阳离子淋洗液）准确量取4.9ml甲烷磺酸至500ml容量瓶中并定容，即得到了0.15mol/L的阳离子淋洗液储备液经过滤后转移到聚丙烯瓶中冰箱内密封保存。b，试剂储备液的配制：       根据预检测的各种离子种类找到相应的化合物，按照分子量计算配制1mg/L的该种离

50、子储备液需要称取得量，然后按照a中的流程进行配制即得到相应的各种离子1mg/L的储备液，同样放于冰箱中保存，以备后用。2，阴离子检测操作分析过程(抑制电导)：开机：分别打开仪器，电脑，柱恒温主机开关（设置好恒温箱温度45度），仪器进入预热阶段，与此同时，取一瓶超纯水进行脱气处理。通水：将过滤头放置于脱气的超纯水中，分别先后打开在线脱气的电源和脱气开关，在仪器链接色谱柱的位置连接上两通管，在显示屏面板上调节流量至2.0ml/min，打开恒流泵开关，冲洗流路10分钟。并在此过程中配制淋洗液使用液：从0.24mol/L Na2CO3储备液中取15ml用超纯水定容至1000ml，然后经沙芯过滤后即得到

51、3.6mmol/L的使用液，转移到聚丙烯瓶中准备使用。通流动相：关泵，将滤头拿出放入淋洗液使用液中，开泵，等显示屏上电导显示明显上升时，将流量调节至0.3ml/min，将量程参数调节至01档位，此时，取下两通管，连接上保护柱和色谱柱，注意色谱柱的方向性，并将色谱柱放置入已经恒温完毕的恒温箱中固定。开电流：观察显示屏上压力变化，待压力稳定后梯度升高流量至色谱柱使用流量0.8mi/min，打开电流开关至相应的数值采集基线：打开色谱工作站，采集基线，等基线走稳后，将显示屏上输出参数调节至-000mv,进行进样分析。清洗进样口：将阀扳至进样位置,先用注射器取去离子水2ml ,接上“针位清洗器”，清洗进

52、样口23次：再用样品清洗23次。进样分析：取样品1ml,接上针头，进样（注意进样时注射器中不能有气泡），并将阀迅速扳至分析位置（注意：速度要快，最好在1s内完成，不要在中间停顿），此时，工作站中将自动进行样品分析。谱图处理：当样品谱图出完后保存在已经设定好的文件夹中，然后利用工作站中谱图处理工具对谱图进行处理，处理的总原则是：去除不需要的杂质峰，保留所要检测的组分峰。保留时间是定性的依据，所以去除一个峰，只需要把峰顶时间除掉就可以了，峰顶有时间就代表一个峰，处理多用禁止判峰和峰分离，删除峰就可以了。处理完谱图，进行再计算和保存。关机：样品分析完毕，关电流（向左旋转电流旋钮），关柱恒温箱，将流量

53、调节至0.3ml/min流上一段时间，待色谱柱逐渐冷却后，拆下色谱柱，并用封头封住色谱柱两端，将两通管接到色谱柱位置，关泵，将滤头从淋洗液中取出放入去离子水中，将显示屏上流量调节到2.0ml/min，开泵，通水1015 分钟，用于清洗流路。清洗完毕后，关泵，分别先后关闭在线脱气脱气开关和电源开关，然后用大注射器接上针头吸取超纯水，对泵进行后冲洗（方法：从泵上端两根四氟管中的一根注入超纯水，会从另外一根流出来，后冲洗是对泵的维护，防止柱塞杆和高压密封圈被淋洗液结晶所划伤）关闭主机电源，关闭电脑。3，阳离子检测分析过程（直接电导）：开机和通水的操作过程和阴离子是一致的。通淋洗液：从以配制好的 0.15 mol/L的甲烷磺酸储备液中取10 ml定容到500 ml就得到了3.0 mmol/L的甲烷磺酸淋洗液。（由于酸类溶液易产生气泡，在通淋洗液前最好先进行脱气处理，可以用超声波或抽滤瓶。）关泵，将滤头从去离子水中拿出放入刚配制的淋洗液中，将显示屏上量程选择为06，流量调节为1.0ml/min，开泵，等显示屏上电导显示50左右时，取下两通管，接上色谱柱，并固定在柱恒温箱中，柱温35度。采集基线：点击工作站中绿色谱图采集按钮，采集基线，等基线走稳后，进行进样分析。进样分析同阴离子操作谱图处理：待样品谱图出完后保存在特定的文件夹中，阳离子出负峰，先对峰进行翻转，方法是在第一个负峰