磷酸盐缓冲液配制方法

1、磷酸盐缓冲液（PBS）配制方法0.01M PBSPBS （135 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 1.5 mM KH2PO4, and 8 mM K2HPO4，pH 7.2）PBS 缓冲液（pH7.2 7.4） : NaCI 137mmol/L , KCI 2.7mmol/L , Na2HPO4 4.3mmol/L , KH2PO4 1.4mmol/L称 7.9g NaCI, 0.2g KCI, 0.24g KH2PO4（or 1.44g Na2HPO4）和 1.8g K2HPO4 ,溶于 800 ml 蒸 馏水中，用HCI调节溶液的pH值至7.4,最后加蒸馏水定容至1 L。保存于4

2、C冰箱中即可。需要注意的是，通常所说的浓度 0.01 M 指的是缓冲溶液中所有的磷酸根浓度，而非 Na 离 子或 K 离子的浓度， Na 离子和 K 离子只是用来调节渗透压的。母液的配制:0.2M Na2HPO4 :称取 71.6g Na2HPO4-12H2O，溶于 1000ml 水0.2M NaH2PO4 :称取 31.2g NaH2PO4-2H2O，溶于 1000ml 水各种浓度 PB（pH=7.4） 的配制:先配 0.2M PB （pH=7.4，100ml）:取 19ml 0.2moI/L 的 NaH2PO4， 81ml 0.2moI/L 的Na2HPO4, 即可。然后 只需将 0.2M

3、 PB （pH=7.4） 按相应比例适当稀释 即可，如:0.1M PB（PH=7.4）:取 500ml 0.2M PB ，加水稀释至 1000ml 即可。0.01M PB （ PH=7.4）:取 50ml 0.2M PB，加水稀释至 1000ml 即可。0.02M PB （ PH=7.4）:取 100ml 0.2 M PB，加水稀释至 1000ml 即可。若需要NaCl 的话，加入NaCl至 0.9%（g/100ml）即可。另：其它各种另 PH 值的0.2MPB（ 100ml）配方：pH0.2M NaH2PO4（ml）0.2M Na2HPO4（ml）5.793.56.55.89285.9901

4、06.087.712.36.185156.281.518.56.377.522.56.473.526.56.568.531.56.662.537.56.756.543.56.851496.945557.038627.133677.228727.323777.419ml81ml7.5 16847.6 138790.591.59394.77.7 10.57.8 8.57.9 7 8.0 5.3 0.01M磷酸盐缓冲液（PBS）配制方法称取 8g NaCI、0.2g KCI、1.44g Na2HPO4 和 0.24g KH2PO4,溶于 800ml 蒸馏水中，用 HCI 调节溶液的pH值至7.4,最

5、后加蒸馏水定容至 1L即可。在15lbf/in2（1034 X 105Pa）高压下蒸 气灭菌（至少20分钟），保存存于室温或 4C冰箱中。需要注意的是，通常所说的浓度 0.01M 指的是缓冲溶液中所有的磷酸根浓度，而非 Na 离 子或 K 离子的浓度， Na 离子和 K 离子只是用来调节渗透压的。 如果是用于免疫组化的话， 则需要在配置的时候分别加入100 u/ml青霉素和链霉素之后再调 PH、定容、灭菌消毒。PH7.67.47.27.0H2O1000100010001000NaCl8.58.58.58.5Na2HPO4 2.22.22.22.2NaH2PO4 0.10.20.30.4根据经验

6、来看,新鲜配置的PBS 搅匀后其PH 值约在7.2-7.4 之间,可是在温度的影响下,尤其在夏天，其电离常数发生了改变，在经过昼夜的时间后，PH 值会明显改变（我亲自测过偏酸）。所以做实验的同学可要注意了， PH 值可能会影响实验结果，甚至可能导致阴性。 所以务必记得这个时候和天气， 要加强实验条件控制问题。 每次使用前最好用试纸测一下过 夜了的PBS,如果发生偏酸或偏碱，注意重新换新液。PBS 缓冲液称取 NaCI 8g , KCl 0.2g , Na2HPO4?12H2O 3.63g, KH2PO4 0.24g ，溶于 900ml 双蒸水中， 用盐酸调pH值至7.4,加水定容至1L,常温保

7、存备用。PBST 缓冲液取300卩l Tween-20加入PBS 100ml中，混匀后即刻使用。现用现配。如果是把所有固体加大十倍, 配置为浓缩液, 工作时候十倍稀释, 那么, 在刚配好浓缩液时, PH 在 6.5 左右,明显偏酸。不能用盐酸调。虽然可以用氢氧化钠颗粒调,但是有更方便的 方法。十倍稀释以后, PH 自动升高到所需要的值。不需要其它任何处理。这个可以先取少量试一 试,配好之后再测一次 PH8.0的PBS配方详细1. NaCl 137mmol/L , KCl 2.7mmol/L , Na2HPO4 4.3mmol/L, KH2PO4 1.4mmol/L2. 向烧杯中加入约800 m

8、l的去离子水，充分搅拌溶解。3. 滴加浓盐酸将 pH 值调节至 8.0,然后加入去离子水将溶液定容至 1 L。4. 高温高压灭菌后，室温保存。注意：上述 PBS Buffer 中无二价阳离子，如需要，可在配方中补充 1 mM CaCl2 和 0.5 mM MgCl2 。0.05mol/L PBS（磷酸缓冲液 Phosphate Buffer Solution , PBS）的配制：甲液：0.05mol/L Na2HPO4溶液：称取磷酸氢二钠 9.465g 7.099g,加蒸 馏水至1000ml ; 乙液:0.05mol/L KH2P04溶液：称取磷酸二氢钾,9.07g 6.803g,加蒸馏水至1000m1。将甲乙液分装在棕色瓶内，于4C冰箱中保存，用时甲、乙两液各按不同比例混合，即可得所需 pH 的缓冲液 ,见下表 ：pH甲液 ml乙液 mI5.292.597.55.595.095.05.9110.090.06.2420.0