培养基配方及配制方法

1、培养基配方1 斜面菌种保存培养基 培养基（马铃薯葡萄糖琼脂培养基）称取200g马铃薯，洗净去皮切碎，加水1000ml煮沸，纱布过滤， 滤液补足1000ml，再加15g葡萄糖和15-20g琼脂，充分溶解后趁热 纱布过滤，分装试管，每试管约5-10ml （视试管大小而定），121C灭菌 20 分钟左右后取出试管摆斜面，冷却后贮存备用。 麦芽汁琼脂培养基麦芽汁的制备：干麦芽首先进行粉碎（不能太粗，也不必太细。 太粗影响糖化效率， 过细影响过滤速度） ，按麦芽重量的 34 倍加水， 搅拌均匀后，37 C左右浸泡1小时，然后缓缓加温至5563C（在升 温过程中应不断搅拌使温度均匀） ，保温 46 小时（

2、用摩尔 / 升碘液测 定为黄色至无色时） ，糖化结束。在糖化过程中，应每小时搅拌一次。 取过滤后的清液，加 %琼脂，分装试管，每试管约 5-10ml （视试管大 小而定），121C灭菌20分钟左右后取出试管摆斜面，冷却后贮存备 用。2 基菌落总数检测 平板计数琼脂培养基将？胰蛋白胨5.0g、酵母浸膏2.5g、葡萄糖1.0g、琼脂15.0g 加入蒸馏水1000ml中，煮沸溶解后，调pH,然后在121 C下灭菌15min, 取出，稍微冷却后，带热倒入培养皿中。3 志贺氏菌检测GN 增菌液成分：胰蛋白胨：20g,葡萄糖：1g,甘露醇：2g，柠檬酸钠：5g, 去氧胆酸钠0.5g，磷酸二氢钾4g，磷酸氢

3、二钾1.5g，氯化钠5g，蒸 馏水 1000ml。制法：将上述物品加入蒸馏水中，加热溶解煮沸，调pH 为，分装，在115C高压灭菌15mi n。HE 琼脂成分：胨：12g,牛肉膏3g，乳糖12g，蔗糖12g，水杨素2g,胆碱 20g，氯化钠5g,琼脂1820g,蒸馏水lOOOmIO, %溴麝香草酚蓝溶 液 16ml, Andrade 指示剂 20ml.，甲液 20ml，乙液 20ml。制法：将上述前七种成分加入400ml蒸馏水中作为基础液，将琼脂加 入到 600ml 蒸馏水中加热溶解，加入甲液乙液到基础液中，调pH，再加入指示剂，并与琼脂液合并，待冷却至5055C，倾注浇平板。注 1 ：此培养

4、基不能高温灭菌。注 2：甲液的配置：硫代硫酸钠：34g,柠檬酸铁钠：4g,蒸馏水：100ml。注 3：乙液的配置：去氧胆酸钠：10g,蒸馏水：100ml。注 4： Andrade 指示剂的配置：酸性复红：0.5g , 1mol/l的氢氧化钠溶液：16ml，蒸馏水：100ml。 将酸性复红溶解于蒸馏水中， 加入氢氧化钠溶液， 数小时后如复红褪 色不全，再加氢氧化钠溶液 12ml。SS 琼脂3.3.1 基础培养基：成分：牛肉膏：5g,胨：5g，三号胆盐：3.5g，琼脂：17g，蒸馏水： 1000ml。制法：将牛肉膏蛋白胨，三号胆盐加入到 400ml蒸馏水中，将琼脂加 入到600ml蒸馏水中，煮沸使

5、其溶解，然后液混合，于 121 C下灭菌 15mi n,保存备用。3.3.2 完全培养基成分：基础培养基：1000ml，乳糖：10g,柠檬酸钠：8.5g，硫代硫 酸钠： 8.5g, 10%柠檬酸铁溶液： 10ml, 1%中性红溶液：, %煌绿溶液：。 制法：加热融化基础培养基,按比例加入处染料以外的所有成分,搅 拌均匀,调,加入中性红溶液和煌绿溶液,混合均匀后浇平板。注 1：配制好的培养基宜当日使用,或保存于冰箱48h 内使用。注 2：煌绿溶液配好后,应在 10日内使用。注3:可以购买SS琼脂的干燥培养基。麦康凯琼脂成分：蛋白胨：17g,胨：3g,猪胆盐（牛、羊胆盐）：5g,氯化钠：5g,琼脂

6、：17g,蒸馏水：1000ml,乳糖：10g, %吉晶紫水溶液：10ml, % 中性红水溶液： 5ml。制法：将蛋白胨、胨、猪胆盐、氯化钠溶解于400ml蒸馏水中，调，将琼脂加入到600ml蒸馏水中加热溶解，将两液混合均匀，于 121 C 下灭菌 15min 备用。临用时加热融化琼脂，趁热加入乳糖，等冷却到 5055C时，加入结 晶紫和中性红水溶液，搅拌均匀后浇平板。 注：结晶紫和中性红水溶液配好后，须经高压灭菌。伊红美蓝琼脂（ EMB）成分：蛋白胨：10g,乳糖：10g，磷酸氢二钾：2g,琼脂17g, 2%伊红Y溶液：20ml, 9美蓝溶液：10ml，蒸馏水1000ml,。制法：将蛋白胨、磷

7、酸盐、琼脂溶解于蒸馏水中，调 pH,于121 C下 灭菌 15min 备用。临用时加热融化琼脂，并加入乳糖，冷却至5055C时加入伊红和美蓝溶液,混合均匀后浇平板。三精铁琼脂成分：蛋白胨：20g,牛肉膏：5g,乳糖：10g,蔗糖：10g，葡萄糖：1g,氯化钠：5g,六水硫酸亚铁铵：0.2g，硫代硫酸钠：0.2g，琼脂:12g,酚红：0.025g，蒸馏水：1000ml,制法：将除琼脂和酚红以外的各种成分溶解于蒸馏水中，调pH,然后加入琼脂,加热溶解,加入 %酚红水溶液,摇匀,分装时量多一点, 于121C下灭菌15mi n,搁高层斜面备用。葡萄糖半固体发酵管成分：蛋白胨：1g,牛肉膏：0.3g，氯

8、化钠：0.5g , %溴甲酚紫酒精 溶液：，葡萄糖：1g,琼脂：0.3g，蒸馏水：100ml,。制法：将蛋白胨，牛肉膏，氯化钠加入水中，调 pH后，加入琼脂， 煮沸溶解，再加入指示剂和葡萄糖。分装，于 121C下灭菌15mi n,备用半固体管成分：蛋白胨：1g,牛肉膏：0.3g，氯化钠：0.5g，琼脂：0.4g, 蒸馏水： 100ml，。制法：将上述成分溶于水中，加热煮沸，并调pH后分装小试管，121C 高压灭菌15mi n,直立凝固备用。尿素琼脂成分：蛋白胨：1g，氯化钠：5g，葡萄糖1g，磷酸二氢钾：2g，%酚 红溶液：3ml，琼脂：20g，蒸馏水：1000ml, 20%尿素：100ml，

9、士。制法：将除尿素和琼脂以外的成分配好，调pH,加入琼脂后加热使其溶化并分装小瓶，121C高压灭菌15min,冷却至5055C后，加入 经过滤灭菌的尿素溶液，最终尿素浓度为 2%最终的pH应为士。 分装于灭菌试管内，搁斜面备用。西蒙氏柠檬酸盐琼脂成分：氯化钠：5g，七水硫酸镁：0.2g，磷酸二氢铵：1g,磷酸氢二 甲：1g,柠檬酸钠：5g,琼脂：20g,蒸馏水：1000ml, %溴麝香草酚 蓝溶液： 40ml,。制法：先将盐类溶解于水中，调 pH,再加琼脂，加热溶化，然后加 入指示剂，混合均匀后分装试管，121C下灭菌15mi n,搁成斜面。实验方法：挑取少量琼脂培养物接种，于 36 C 士

10、1C培养4天，每天 观察结果,阳性者斜面上有菌落生长。培养基由绿色转为蓝色。氰化钾（KCN培养基成分：蛋白胨：10g,氯化钠：5g，磷酸二氢钾：0.225g，磷酸氢二 钠： 5.64g ，蒸馏水： 1000ml， %氰化钾溶液： 20ml，。制法：将除氰化钾以外的成分配好分装，121 C灭菌15mi n,放在冰 箱内使其充分冷却，每 100ml 培养基加入 %氰化钾溶液（最后浓度为 1:10000）,分装于12mM 100mm灭菌试管，每管约4ml，立刻用橡皮 塞塞紧，放在4C冰箱内，至少可保存两个月，同时将不加氰化钾的 培养基作为对照培养基,分装备用。试验方法：将琼脂培养物接种于蛋白胨水内成

11、作为稀释菌液,挑取 1 环接种于氰化钾培养基，另外挑取 1环接种于对照培养基，在 36C 士 1C下培养12天，观察结果，如有细菌生长，则为阳性，经 2天 后不生长则为阴性。注：氰化钾是剧毒物质,使用时应小心,切勿沾染,以免中毒。夏天 分装培养基应在冰箱内进行, 实验失败的主要原因是封口不严, 氰化 钾逐渐分解,变成氢氰酸气体逸出,以致药物浓度降低,细菌生长, 造成假阳性现象。氨基酸脱羧酶实验培养基成分：蛋白胨：5g，酵母浸膏：3g，葡萄糖：1g，蒸馏水：1000ml, % 溴甲酚紫乙醇溶液：1ml, L-氨基酸或DL-氨基酸：0.5g或1g/100ml ,。制法：除氨基酸以外的所有成分加热溶

12、解后，分装每瓶100ml，分别加入各种氨基酸：赖氨酸、精氨酸和鸟氨酸。L-氨基酸按加入，DL- 氨基酸按 1%加入。再调,对照培养基不加氨基酸。分装于灭菌的小 试管内，每管，上面滴加一层液体石蜡。115C高压灭菌10mi n。实验方法：从琼脂斜面上挑取培养物接种，于36C士 1C下培养1824h,观察结果，氨基酸脱羧酶阳性者由于产碱，培养基应呈紫色。 阴性者因为碱性物质产生， 但因葡萄糖产酸而是培养基变成黄色， 对 照管应为黄色。蛋白胨水（靛基质试验用）成分：蛋白胨或胰蛋白胨：20g,氯化钠：5g,蒸馏水：1000ml, 制法：将上述成飞混合均匀，分装小管，121C灭菌15mi n。靛基质试剂

13、：柯凡克试剂： 将 5g 对二氨基甲醛溶于 75ml 戊醇中, 然后慢慢加入浓 盐酸 25ml。欧-波试剂：将1g对二氨基苯甲醛溶于90ml95%勺乙醇内，然后慢慢 加入浓盐酸 20ml。实验方法：挑取少量接种物接种，在 36C士 1C下培养12天，必要 时可培养 45 天,加入柯凡克试剂约,轻摇试管,阳性者试剂层呈深 红色,或加入欧 -波试剂,沿管壁流下,覆盖于培养液表面,阳性者 接触面上呈玫瑰红色。注：蛋白胨应含有丰富勺色氨酸, 每批蛋白胨买来后应用已知菌种实 验。糖发酵管成分：牛肉膏：5g，蛋白胨：10g,氯化钠：3g，十二水磷酸氢二钠：2g, %溴麝香草酚蓝溶液：12ml，蒸馏水：1000ml,葡萄糖发酵管按上述成分配好后,按 %加入葡萄糖,分装于有一个倒 置小管的小试管内，121C灭菌15mi n。其他各种糖发酵管可按上述成分配好后，分装每瓶 100ml, 121 C灭 菌15min,另将各种糖类配好10%溶液，一同灭菌，将5ml糖溶液加 入到 100ml 液体培养基中，以无菌操作分装小试管。注：蔗糖不纯,加热后会自行水解者,应采用过滤法除菌。实验方法：从琼脂斜面上挑取小量培养物